【正文】 X=,s= SI下限 == SI上限 == 68 孔間差變異的控制 ? ELISA檢驗(yàn)孔與孔間的差異的調(diào)查，可以在同一塊板上獲取同一份質(zhì)控血清至少十孔并行試驗(yàn)的S/CO值的均值Ｘ和標(biāo)準(zhǔn)差Ｓ． ? 質(zhì)控血清 HBsAg 1 ng/ml作孔間變異Ａ值檢測(cè)，結(jié)果如下： Ｘ = S= CV=% ? 通過孔間的變異調(diào)查，可以了解不同試劑，不同批號(hào)，不同操作者的變異，以便于選擇，改進(jìn)， ? 了解孔間變異，就可以了解每個(gè)樣品測(cè)定值的可能變動(dòng)范圍，對(duì)于制定處于ＣＯ值上下的樣品的結(jié)果是十分有用的． 69 （板間差異）與批間變異的控制 ? 實(shí)驗(yàn)室一天需用數(shù)塊微孔板，這里就存在同一天檢測(cè)數(shù)塊板之間的變異（批內(nèi)變異）和不同天檢測(cè)之間的變異（批間 變異）的問題。首先開展室間質(zhì)評(píng) (EQA)，從 EQA調(diào)查中發(fā)現(xiàn)許多問題，引起 ? 1950年美國(guó)學(xué)者 Levey和 Jenning發(fā)表第一篇關(guān)于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控方法學(xué)研究的論文，將 Shewhart質(zhì)控圖介紹給臨床化 ? 79 LeveyJennings質(zhì)控圖做法 ? 以 20次質(zhì)控物的檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算平均值[X]和標(biāo)準(zhǔn)差 (s)，定出控制限。 2S的控制方法二者在誤差出靈敏度和對(duì)失控誤差識(shí)別特異性上有著明顯的差，Westgard將它們巧妙地結(jié)合起來，并且引進(jìn)其它控制規(guī)則，成了多規(guī)則控制方法。 86 3) 22S 有兩種表現(xiàn) 87 4) R4S 88 5) 41S 有兩種表現(xiàn)： 89 6) 10X 90 ? 7) 7x：連續(xù) 7個(gè)質(zhì)控點(diǎn)落在均值之一側(cè)。 3S的可能性僅為 %(1個(gè)控制品作雙份 ,或同時(shí)用兩個(gè)控制品 ,則出現(xiàn) 1控制值超出 X177。 96 ? ③ 免疫質(zhì)控中，重點(diǎn)不應(yīng)放到哪個(gè)點(diǎn)是超出 2S就判為失控，而應(yīng)放到某一階段的變異趨勢(shì)上。做質(zhì)控圖分析每一階段的變化趨勢(shì)，尋找有無問題發(fā)生和發(fā)生了什么問題， ? 室內(nèi)質(zhì)控具體應(yīng)考慮以下三個(gè)步驟： 95 ? ① 免疫檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控的重點(diǎn)首先要求滿足試驗(yàn)條件，滿足試劑盒要求，滿足了就是 “ 合格 ” 。 92 ? 若不是失控，既不要重測(cè)控制品，也不必作其它處理，照發(fā)報(bào)告。 85 ? 2） 13S 即這個(gè)控制值不僅超出 177。失控限定得太寬 (例如定到 3s)，幾乎不必?fù)?dān)心有失控可能，這樣常將失控結(jié)果誤判為合格，使質(zhì)控失去意義；相反，失控限定得太嚴(yán) (例如定 1s為失控限 )，使太多的結(jié)果，甚至合格的結(jié)果，判為失控，這也使質(zhì)控失去意義。 ? 從圖 ，前 7次數(shù)值偏于 X軸的下方及第 21次到 29次，數(shù)值呈明顯上升趨勢(shì)，反映出這 76 個(gè)體操作變異的控制 ? 當(dāng)每天檢測(cè)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)按操作者分類計(jì)算時(shí)，獲取每個(gè)操作者的日間變異，在日間變異質(zhì)控圖中，描出本室質(zhì)控曲線變化的同時(shí)，用不同顏色，描記出每個(gè)操作者質(zhì)控?cái)?shù)值。 SI下限、 SI上限 均小于 n2sn3s,因此該三次檢測(cè)數(shù)據(jù)在控制范圍內(nèi) 65 ? 在第五次測(cè)定后，按上法計(jì)算： n=5 測(cè)得 S /CO 值為 求出 x=,s= 計(jì)算： SI下限 == SI上限 == 查 SI值表： n=5時(shí)， n2=,n3=。在實(shí)驗(yàn)室中選擇素質(zhì)最好、操作最熟練的技術(shù)員進(jìn)行認(rèn)真地專門測(cè)定，選用最佳的試劑盒，檢測(cè)之前應(yīng)將恒溫箱、加樣器等認(rèn)真校正、調(diào)試，使用新的加樣吸頭等，即在最佳、最理想地條件下進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品， 質(zhì)控血清做雙測(cè)定 ， 得出 2個(gè)吸光值（ A值）的均值。 36 質(zhì)控血清的制備 ? 各實(shí)驗(yàn)室可以按美國(guó) CAP或國(guó)家檢定新的標(biāo)準(zhǔn)建立起定值質(zhì)控品 ? 制備方法： （ 1）收集血清 （ 2）滅活 （ 3）離心或過濾除去沉淀物 （ 4）稀釋 （ 5）保存 （ 6）定期校正 37 HBsAg標(biāo)準(zhǔn)曲線圖 1 2 5 10 ng/ml 38 3質(zhì)控物定值的選擇 ? 室內(nèi)質(zhì)控點(diǎn)的選擇，以需要設(shè)置質(zhì)控的點(diǎn)，設(shè)置質(zhì)控物進(jìn)行質(zhì)控為原則。Ab* (2) ? 綜上所述，一步法 ELISA試劑盒作為適合臨床實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)便快速要求的產(chǎn)物，有著巨大市場(chǎng)，其雖有潛在缺陷，易導(dǎo)致高濃度待測(cè)物的標(biāo)本檢測(cè)為假陰性，但精心的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)包被和酶標(biāo)記抗體的仔細(xì)選擇，完全可以將 “ 鉤狀效應(yīng) ” 出現(xiàn)的可能性降至最低。 ? 總之，將圍繞改善免疫測(cè)定的特異性和敏感性來制備基因工程片斷。 15 HIVELISA試劑 ? 目前對(duì) HIV的檢測(cè)原料有了較大改進(jìn)，主要如下： ? （ 1）可用于檢測(cè)血清或血漿中 HIV IgM亞特異性抗體和檢測(cè) HIV 2和多種亞型。 9 HCVELISA試劑盒 ? 用基因重組的 HCV結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白抗原包被固相載體。 4 基因工程試劑對(duì)免疫測(cè)定技術(shù) 發(fā) 展 的 影 響 ? 免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料，如抗原抗體，酶等。 ? 可測(cè)得 HBsAg變異樣品。 * NS3 區(qū)增加了氨基酸片斷（比例十分重要）。 16 。 ? Ab+Ag+Ab*→ Ab ? 以上一般以 S值確定的灰區(qū)范圍比 CV值確定值要大。 40 cut off (CO)值又稱臨界值 或陽性與陰性界限值 CO 值計(jì)算實(shí)例：（以夾心法為例） ? 1）依據(jù)試劑盒說明書規(guī)定 S/N ≥2 .1 為陽性 .（ S:樣品， N：陰性對(duì)照） 因?yàn)?S ≥ N 判斷為陽性 , 所以 S = N 為陰陽性結(jié)果分界點(diǎn)，即 CO值 . CO (cut off) 值 = N 當(dāng) S≥CO值時(shí)，判為陽性； SCO值時(shí)，判為陰性 ? 2）樣品結(jié)果表示法： S/CO 值 S/CO = 樣品 A值 247。 一般 RCV的 S值在 OCV 的 S值的兩倍范圍內(nèi)可以接受 。如表： 70 某實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)表 日期序號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 s/co值 日期序號(hào) 9 10 11 12 13 14 15 16 17 s/co值 日期序號(hào) 18 19 20 21 22 23 s/co值 71 ? 取表 20天的每天最大值（ x大 ）和最小值（ x小 ）列表，并計(jì)算其值差（ x差 ），求 20天值差的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，此為批內(nèi)變異（以 x內(nèi) 、 s內(nèi) 表示）；取每天數(shù)值的均值 x，求 20天均值的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，此為批間變異（以 x間 、 s間 ）表示，見表 72 表 某實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控批內(nèi)、批間 數(shù)值表（ S/CO值） 第 n天 最小值 最大值 值差 均值 第 n天 最小值 最大值 值差 均值 （ X小 ） （ X大 ） （ X差 ） （ X） （ X小 ） （ X大 ） （ X差 ） （ X） 1 11 2 12 3 13 4 14 5 15 6 16 7 17 8 1