【正文】 AA + HCl 實驗操作 1. DNS氨基酸的制備（已完成） 2. 混合 DNS－氨基酸的雙向?qū)游? ? 點樣：在薄膜右下角距兩邊各 ，直徑控制在 2～ 3mm之間，點在無光澤面，可重復點樣 23次； ? 苯－冰醋酸層析：將點好樣品的薄膜用回形針固定放入展層劑中，展層劑前緣在距薄膜頂端 2mm處即可停止 ,冷風吹干，紫外燈下觀察； ? 甲酸－水層析：調(diào)轉(zhuǎn) 90度與第一相垂直，放入展層劑中，熱風吹干，紫外燈下觀察，用鉛筆輕輕標記 （以免損壞薄膜表面） ； ? 分析實驗結(jié)果； ? 將層析后標記好的薄膜以點樣點為左下角貼于實驗報告中。 凝膠層析的基本概念 ? 外水體積是指凝膠柱中凝膠顆粒周圍空間的體積，也就是凝膠顆粒間液體流動相的體積。親和層析的分離原理簡單的說就是通過將具有親和力的兩個分子中一個固定在不溶性基質(zhì)上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另一個分子進行分離純化。生物化學中常用的凝膠層析、離子交換層析、親和層析、高效液相色譜等都通常采用柱層析形式。他們首先提出了色譜塔板理論。 ? 1944年出現(xiàn)紙層析以后，層析法不斷發(fā)展，相繼出現(xiàn)薄層層析、親和層析、凝膠層析、氣相層析、高壓液相層析等。 薄層層析 將適當粘度的固定相均勻涂鋪在薄板上，點樣后用流動相展開，使各組份分離 薄層層析主要適用于小分子物質(zhì)的快速檢測分析和少量分離制備，通常為一次性使用。 ? 親和層析可用于純化生物大分子、稀釋液的濃縮、不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的貯藏、從純化的分子中出去殘余的污染物、用免疫吸附劑吸附純化對此尚無互補配體的生物大分子，分離核酸是親和層析應(yīng)用的重要方面。 ? 內(nèi)水體積是指凝膠顆粒中孔穴的體積，凝膠層析中固定相體積就是指內(nèi)水體積。 操作注意事項： ? 嚴格控制點樣位置以及點樣直徑?？捎貌０魯嚢枋贡砻嫫秸?； 3. 平衡：反復加蒸餾水 ,平衡 10分鐘 .使蒸餾水維持在 34cm高度； 4. 加樣：待蒸餾水流至柱平面時（不可使柱平面干掉），馬上靠近柱平面小心滴加4滴樣品（注意盡量不要使床面攪動），待樣品浸入到凝膠中后馬上加入 3－ 4滴蒸餾水 (動作輕柔 )，反復兩次，然后加大量蒸餾水洗脫； 5. 收集樣品：樣品一旦加入后馬上用量筒收集流出液，注意向柱床上不斷加水，記錄紅色流出一半時的毫升數(shù)（血紅蛋白的 Ve，也即 Vo），繼續(xù)收集，記錄黃色流出一半時體積（魚精蛋白 Ve）； 實驗操作 第三部分， DNA親和層析分離目標轉(zhuǎn)錄因子蛋白 實驗設(shè)計 1. 查閱相關(guān)資料，了解 DNA親和層析技術(shù)的原理和種類； 2. 查詢某種轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點序列； 3. 請設(shè)計一個實驗，利用 DNA親和層析技術(shù)分離某種轉(zhuǎn)錄因子； 4. 對于分離得到的轉(zhuǎn)錄因子，有什么方法驗證。 ? 展層后必須經(jīng)電吹風將膜吹干。 ? 柱床體積就是指凝膠柱所能容納的總體積。對分離含量極少又不穩(wěn)定的活性物質(zhì)尤為有效。 ? 凡能將其他物質(zhì)聚集到自己表面的物質(zhì)稱吸附劑，包括硅皮