【正文】 Section Q 1 密碼子與反密碼子的反向互補(bǔ)配對(duì) 一個(gè)tRNA可識(shí)別的密碼子數(shù)由反密碼子的第一位堿基決定擺動(dòng)學(xué)說(shuō)：第三位密碼子與第一位反密碼子的配對(duì)可以擺動(dòng)反密碼子第一位為A或C時(shí)，配對(duì)無(wú)搖擺現(xiàn)象。轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物剛開(kāi)始合成時(shí)，即對(duì)其5’端進(jìn)行加帽反應(yīng)。反式作用基因/調(diào)節(jié)基因（transacting genes，regulator genes）可以影響與他們不在同一條染色體上的基因的表達(dá)水平的DNA元件。利福平只抑制轉(zhuǎn)錄的起始。堿對(duì)DNA的影響：高pH值對(duì)DNA的影響比低pH值的要小。(6）取出樣品杯，吸出樣品，然后用高純水洗幾次，自然晾干。l和5～7181。O/T172。⑧電泳結(jié)束，儀器顯示：“END”，并連續(xù)蜂鳴提醒。VH174。（6），機(jī)器不運(yùn)轉(zhuǎn)，應(yīng)關(guān)機(jī)斷電，10秒鐘后重新開(kāi)機(jī)，待所設(shè)轉(zhuǎn)速顯示后，再按運(yùn)轉(zhuǎn)鍵，機(jī)器將照常運(yùn)轉(zhuǎn)。離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地面上，應(yīng)至少距離10cm以上且具有良好的通風(fēng)環(huán)境中，周?chē)諝鈶?yīng)呈中性，且無(wú)導(dǎo)電性灰塵、易燃?xì)怏w和腐蝕性氣體，環(huán)境溫度應(yīng)在0～30℃之間，相對(duì)濕度小于80%。因其相對(duì)分子質(zhì)量小、在凝膠電泳中遷移速度快而得名。岡崎片段:是在DNA半不連續(xù)復(fù)制中產(chǎn)生的長(zhǎng)度為10002000個(gè)堿基的短的DNA片段,能被連接形成一條完整的DNA鏈?；?是產(chǎn)生一條多肽鏈或功能RNA分子所必需的全部核苷酸序列。5甲基化程度與基因的表達(dá)一般呈反比關(guān)系。（3生物DNA分子的大小等于基因的總和。1高度重復(fù)序列中有一些可編碼蛋白質(zhì)。45．限制性核酸內(nèi)切酶的作用特點(diǎn)是（）、（）、（）、（）。25．限制性?xún)?nèi)切酶分為（）、（）、（）三種，其中只有（）在基因工程操作中被應(yīng)用。第二篇：現(xiàn)代分子生物學(xué)總結(jié)醫(yī)學(xué)細(xì)胞與分子生物學(xué)習(xí)題庫(kù)一、名詞解釋1．基因組2．基因文庫(kù)3．衛(wèi)星DNA4．SD序列5．分子克隆6．載體7．反式作用因子8．粘性末端9．限制性?xún)?nèi)切酶10．cDNA文庫(kù)11．轉(zhuǎn)化率12．質(zhì)?？截悢?shù)13．體外重組14．感受態(tài)細(xì)胞15．探針16．核酸雜交17．陽(yáng)性克隆18．固相雜交19．解鏈溫度20．C值悖理21．基因家簇22．反義RNA23．RNA干擾24．魔斑25．順式作用元件二．填空題（）、（）和（）。例如堿基結(jié)構(gòu)類(lèi)似物5溴尿嘧啶等可以取代個(gè)別堿基，亞硝酸能引起堿基的氧化脫氨反應(yīng)，原黃素（普魯黃）等吖啶類(lèi)染料和甲基氨基偶氮苯等芳香胺致癌物可以造成個(gè)別核苷酸對(duì)的增加或減少而引起移碼突變（見(jiàn)基因突變）。岡崎片段的大小，在原核生物中約為1000～2000個(gè)核苷酸，而在真核生物中約為100個(gè)核苷酸。C、需要引物（primer)：DNA聚合酶必須以一段具有339。一個(gè)線(xiàn)粒體中一般有多個(gè)DNA分子。b、不存在操縱子結(jié)構(gòu)。順?lè)匆蜃禹樖阶饔迷╟isacting element）能影響基因表達(dá)，但不編碼RNA和蛋白質(zhì)的DNA序列反式作用因子（transactingfactor）能識(shí)別和結(jié)合特定的順式作用元件,并影響基因轉(zhuǎn)錄的一類(lèi)蛋白質(zhì)或RNA順式調(diào)控元件有順式調(diào)控元件(cisregulatory element)，或順式作用元件是調(diào)節(jié)位于相同的DNA分子(通常是一個(gè)染色體)的基因的表達(dá)的DNA或RNA的區(qū)域。構(gòu)成常染色質(zhì)的DNA主要是單一序列DNA和中度重復(fù)序列DNA（如組蛋白基因和tRNA基因）。在無(wú)性繁殖物種中，生物體內(nèi)所有細(xì)胞的染色體數(shù)目都一樣；而在有性繁殖大部分物種中，生物體的體細(xì)胞染色體成對(duì)分布，稱(chēng)為二倍體。由此引入拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)： （Linking number）：在雙螺旋DNA中，一條鏈以右手螺旋繞另一條鏈纏繞的次數(shù)，以L(fǎng) 表示（或以α表示），其計(jì)數(shù)方法為處于松弛環(huán)形DNA時(shí)的螺旋周數(shù)，肯定為整數(shù)，右手螺旋為正、左手螺旋為負(fù)。RNA主要是負(fù)責(zé)DNA遺傳信息的翻譯和表達(dá)，為單鏈分子，分子量要比DNA小得多。這與早期生理學(xué)研究中常用的切除部分觀(guān)察整體推測(cè)功能的三部曲思想相似。DNA修復(fù)DNA修復(fù)（DNA repairing）是細(xì)胞對(duì)DNA受損傷后的一種反應(yīng)，這種反應(yīng)可能使DNA結(jié)構(gòu)恢復(fù)原樣，重新能執(zhí)行它原來(lái)的功能；但有時(shí)并非能完全消除DNA的損傷，只是使細(xì)胞能夠耐受這DNA的損傷而能繼續(xù)生存。同源重組需要一系列的蛋白質(zhì)催化，如原核生物細(xì)胞內(nèi)的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等；以及真核生物細(xì)胞內(nèi)的Rad5Mre11Rad50等等?；蚪M學(xué)的主要工具和方法包括： 生物信息學(xué)，遺傳分析，基因表達(dá)測(cè)量和基因功能鑒定。不同的DNA分子由于堿基對(duì)的排列順序存在著差異,因此,每一個(gè)DNA分子的堿基對(duì)都有其特定的排列順序,這種特定的排列順序包含著特定的遺傳信息,從而使DNA分子具有特異性。哺乳動(dòng)物雄性個(gè)體細(xì)胞的性染色體對(duì)為XY，雌性則為XX。通過(guò)一對(duì)分別與選定的2段DNA配對(duì)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)PCR產(chǎn)物的有無(wú)、產(chǎn)量的高低等，就可以對(duì)是否存在相互作用進(jìn)行判斷。在生物體的不同發(fā)育期，基因的活性是不同的，而且基因的活性有嚴(yán)格的程序。c、功能相關(guān)的序列常串連在一起，由共同的調(diào)控元件調(diào)控，并轉(zhuǎn)錄成同一mRNA分子，可指導(dǎo)多種蛋白質(zhì)的合成，這種結(jié)構(gòu)稱(chēng)操縱子。(二)在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定基因的數(shù)目。DNA以半保留方式進(jìn)行復(fù)制， 和 所完成的實(shí)驗(yàn)所證明。→339。絲裂霉素C可造成DNA分子單鏈間的交聯(lián)，這種情況常發(fā)生在兩個(gè)單鏈的對(duì)角的鳥(niǎo)嘌呤之間。細(xì)胞死亡是生命現(xiàn)象不可逆停止及生命的結(jié)束，正常的組織中經(jīng)常發(fā)生細(xì)胞死亡，是維持組織機(jī)能和形態(tài)所必須的，包括細(xì)胞主動(dòng)死亡程序性死亡和細(xì)胞被動(dòng)死亡即細(xì)胞壞死、細(xì)胞凋亡。22.、操縱子由（）、（）和（）組成；受（）產(chǎn)物的調(diào)控。39．PCR技術(shù)的基本過(guò)程是（）、（）、（）。1短分散片段重復(fù)順序的平均長(zhǎng)度約為35005000bp。2在雙向復(fù)制中一條鏈按5′→3′的方向合成，另一條鏈按3′→5′的方向合成。4COS區(qū)是指λ噬菌體粘性末端構(gòu)成的區(qū)域。9．體外重組常用的連接方法有哪些？各有何優(yōu)缺點(diǎn)？13．何謂核酸雜交？常用的雜交方法有哪些？？分子克隆中常用的宿主細(xì)胞有哪些？宿主細(xì)胞應(yīng)具備哪些條件？3DNA損傷修復(fù)有哪些類(lèi)型？試述各類(lèi)型的修復(fù)方式。大腸桿菌的復(fù)制起點(diǎn)包括Ornh和OriH,OnC是首選的復(fù)制起點(diǎn),而OnH是在 Rnase h缺失突變株中發(fā)現(xiàn)的一系列復(fù)制起點(diǎn)DNA的半保留復(fù)制DNA在復(fù)制過(guò)程中,每條鏈分別作為模板合成新鏈,產(chǎn)生互補(bǔ)的兩條鏈。重疊的部分可以在調(diào)控區(qū),也可以在結(jié)構(gòu)基因區(qū)。在國(guó)內(nèi)，有多個(gè)廠(chǎng)家生產(chǎn)冷凍離心機(jī)，本實(shí)驗(yàn)室的高速冷凍離心機(jī)為GL20GⅡ型（上海安亭），落地式。（4）揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí)，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。則操作步驟如下：①按“模式”鍵，將工作模式由標(biāo)準(zhǔn)（STD）轉(zhuǎn)為定時(shí)（TIME）3 模式。在狀態(tài)欄最下方，顯示實(shí)際的工作時(shí)間（精確到秒）。（2）打開(kāi)天平開(kāi)關(guān)“on”，天平則自動(dòng)進(jìn)行靈敏度及零點(diǎn)調(diào)節(jié)。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常使用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行核酸溶 液定量和純度的初步判斷。顯示屏上出現(xiàn)一系列數(shù)據(jù)均“”并提示插入樣品“Insert sample ”。雙鏈序列反向互補(bǔ)各基團(tuán)排列方式：糖磷酸骨架DNA分子排列在外。b 亞基：RNAP的催化中心。轉(zhuǎn)錄的起始：開(kāi)放復(fù)合物 閉合復(fù)合物 無(wú)效起始延伸：?jiǎn)?dòng)子的清空，鏈的延伸轉(zhuǎn)錄泡，s因子的循環(huán)利用終止：依賴(lài)性 不依賴(lài)性反復(fù)重復(fù)序列Section L （cisacting elements）：一般為DNA上較為保守的、有著特異性序列或結(jié)構(gòu)的特定區(qū)域。SP1 為組成性表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，在所有的細(xì)胞中都存在，與基因本底表達(dá)水平有關(guān) SL1，選擇因子,RNA Pol I起始轉(zhuǎn)錄所必需的因子 CTD:羧基末端結(jié)構(gòu)域，的磷酸化狀態(tài)與轉(zhuǎn)錄進(jìn)程有關(guān)轉(zhuǎn)錄起始時(shí)期，CTD結(jié)構(gòu)域一般處于去磷酸化形式，與結(jié)合啟動(dòng)子有關(guān)。有些物種也有重疊基因的現(xiàn)象。起始氨酰tRNA也進(jìn)入此位點(diǎn)。增強(qiáng)mRNA的翻譯水平，增加基因的表達(dá) 剪接 甲基化 2 核酶有：有催化功能的RNA即為核酶U2 U6 RNAP 3 RNA的多樣性：可變加工，反式剪接，RNA編輯 原核生物核糖體真核生物核糖體 原核rRNA 加工的大致過(guò)程：形成多個(gè)莖環(huán)結(jié)構(gòu)，與蛋白結(jié)合形成RNP，核苷酸修飾，逐級(jí)切割真核rRNA 加工的大致過(guò)程：甲基化，切割。（Lac operon，CRP調(diào)控）正控阻遏：共阻遏物使激活因子失活，減少基因的表達(dá)。w 亞基：可能與RNAP的組裝及維持RNAP結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性有關(guān)s factor(s因子)：s factor 在啟動(dòng)子特異性識(shí)別過(guò)程中至關(guān)重要 移動(dòng)慢的原因：可以保持與翻譯同步。超螺旋DNA（Supercoil DNA）:松弛型雙鏈DNA進(jìn)一步旋轉(zhuǎn)后，再形成閉環(huán)結(jié)構(gòu)時(shí)，就會(huì)形成DNA超螺旋結(jié)構(gòu)L=T+W 判斷是否為超螺旋 正負(fù)超螺旋 拓?fù)洚悩?gòu)酶：暫時(shí)斷裂DNA分子中一條或兩條單鏈上的磷酸二酯鍵，改變DNA分子的連接數(shù)及拓?fù)錉顟B(tài)。五、數(shù)字式酸度計(jì)酸度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室配置溶液必備的儀器。(2）在儀器面板上有許多功能鍵，其中包括檢測(cè)base sep、Tm、DNA、RNA、oligo、Protein595assay、Protein280 meas、cell culture等。（1）天平應(yīng)放置在牢固平穩(wěn)水泥臺(tái)或木臺(tái)上，室內(nèi)要求清潔、干燥，同時(shí)應(yīng)避免光線(xiàn)直接照射到天平上。(3)如果輸出端接多個(gè)電泳槽，則儀器顯示的電流數(shù)值為各槽電流之和，此時(shí)應(yīng)選擇穩(wěn)壓輸出，以減小各槽的相互影響。②先設(shè)置電壓U，按“選擇”鍵，先將其反顯，然后輸入數(shù)字鍵即可設(shè)置該參數(shù)的數(shù)值。二、電泳儀電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要手段。（1）插上電源，待機(jī)指示燈亮；打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，調(diào)速與定時(shí)系統(tǒng)的數(shù)碼管顯示的閃爍數(shù)字為機(jī)器工作轉(zhuǎn)速的出廠(chǎng)設(shè)定，溫控系統(tǒng)的數(shù)碼管顯示此時(shí)離心腔的溫度。大,小溝都是由于堿基對(duì)堆積和糖一酸骨架扭轉(zhuǎn)造成的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶(dnatopoismerase):能在閉環(huán)DNA分子中改變兩條鏈的環(huán)繞次數(shù)的酶,它的作用機(jī)制是首先切斷DNA,讓DNA繞過(guò)斷裂點(diǎn)以后再封閉形成雙螺旋或超螺旋DNA 復(fù)制體一種多蛋白復(fù)合體,包含DNA聚合酶,引發(fā)酶,解旋酶,單鏈結(jié)合蛋白和其他輔助因子復(fù)制叉:復(fù)制時(shí),雙鏈DNA要解開(kāi)成兩股鏈分別進(jìn)行DNA合成,所以,復(fù)制起點(diǎn)呈叉子形狀,被稱(chēng)為復(fù)制又引物。衛(wèi)星DNA通常是高度串聯(lián)重復(fù)的DNA。(4)調(diào)控序列DNA重組技術(shù):是20世紀(jì)70年代初興起的技術(shù)科學(xué),又稱(chēng)基因工程，是將不同的DNA片段(如某個(gè)基因或基因的一部分)按照人們預(yù)先的設(shè)計(jì)定向連接起來(lái),在特定的受體細(xì)胞中與載體同時(shí)復(fù)制并得到表達(dá),產(chǎn)生影響受體細(xì)胞的新的遺傳性狀的技術(shù)。5常染色質(zhì):結(jié)構(gòu)松散，基因不表達(dá)。3機(jī)體的各種細(xì)胞中含有相同的遺傳信息，所以有相同的表達(dá)，3在負(fù)控誘導(dǎo)系統(tǒng)中，阻遏蛋白不與效應(yīng)物結(jié)合時(shí)，結(jié)構(gòu)基因不轉(zhuǎn)錄。1不同生物中組蛋白基因在基因組中的排列不一樣。（）真核生物結(jié)構(gòu)基因都是單拷貝，rRNA基因?yàn)槎嗫截悺?8．分子克隆中常用的載體有（）、（）、（）和（）。（）、（）、（）、（）和（）五個(gè)層次。基因組重排技術(shù)結(jié)合了傳統(tǒng)誘變技術(shù)和細(xì)胞融合技術(shù),是一項(xiàng)對(duì)整個(gè)微生物基因組重排的新型育種技術(shù)。滾環(huán)式復(fù)制的一個(gè)特點(diǎn)是以一條環(huán)狀單鏈DNA為模板，進(jìn)行新的DNA環(huán)狀分子合成。RNA引物的大小，在原核生物中通常為50～100個(gè)核苷酸，而在真核生物中約為10個(gè)核苷酸。DNA不為蛋白質(zhì)所壓縮。真核生物的基因組里存在大量重復(fù)序列，通過(guò)其重復(fù)程度可將其分成高度重復(fù)序列、中度重復(fù)序列、低度重復(fù)序列和單一序列。非編碼RNA分子的調(diào)控作用 非編碼RNA（Noncoding RNA）是指不編碼蛋白質(zhì)的RNA。具有強(qiáng)嗜堿性，染色深，染色質(zhì)絲包裝折疊緊密，與常染色質(zhì)相比，異染色質(zhì)是轉(zhuǎn)錄不活躍部分，多在晚S期復(fù)制。鳥(niǎo)類(lèi)和蠶的性染色體與哺乳動(dòng)物不同：雄性個(gè)體的是ZZ，雌性個(gè)體為ZW。對(duì)于一定長(zhǎng)度的DNA雙鏈，一旦出現(xiàn)解鏈T值就減少。核酸不僅是基本的遺傳物質(zhì)，而且在蛋白質(zhì)的生物合成上也占重要位置，因而在生長(zhǎng)、遺傳、變異等一系列重大生命現(xiàn)象中起決定性的作用。b、因轉(zhuǎn)移法同源重組(homologousrebination)是將外源基因定位導(dǎo)人受體細(xì)胞染色體上的方法，因?yàn)樵谠撟挥信c導(dǎo)人基因同源的序列，通過(guò)單一或雙交換，新基因片段可替換有缺陷的基因片段，達(dá)到修正缺陷基因的目的。DNA損傷DNA損傷是復(fù)制過(guò)程中發(fā)生的DNA核苷酸序列永久性改變，并導(dǎo)致遺傳特征改變的現(xiàn)象。d、倒位或轉(zhuǎn)位：（transposition）指DNA鏈重組使其中一段核苷酸鏈方向倒置、或從一處遷移到另一處。用于概括涉及基因作圖、測(cè)序和整個(gè)基因組功能分析的遺傳學(xué)分支。再有,雙螺旋外側(cè)負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)同帶正電荷的陽(yáng)離子之間形成的離子鍵,可以減少雙鏈間的靜電斥力,因而對(duì)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)也有一定的