【正文】 22:36:3322:36:3322:363/22/2023 10:36:33 PM 1越是沒有本領(lǐng)的就越加自命不凡。 22:36:3322:36:3322:36Wednesday, March 22, 2023 1乍見翻疑夢(mèng)，相悲各問年。 近 20種，年產(chǎn)值達(dá) 30億。 才能確定目的基因是否真正在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和正確表達(dá)。 ① 對(duì)受體細(xì)胞 無害 ② 具有一個(gè)或多個(gè) 限制酶切點(diǎn) ，以便與外源基因插入； 載體能對(duì)受體細(xì)胞有害嗎？ 載體怎樣才能具有能連接不同目的基因的潛能呢？ 目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞，你如何察覺？ ——載體 已知標(biāo)記基因有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素的基因， 現(xiàn)探討某細(xì)菌的質(zhì)粒中有無標(biāo)記基因或標(biāo)記基因是什么 ？請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并得出相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)論。 獲取目的基因 （例如血清蛋白基因） 構(gòu)建基因表達(dá)載體 （在血清白蛋白基因前加特異表達(dá)的啟動(dòng)子） 顯微注射導(dǎo)入哺乳動(dòng)物受精卵中 形成胚胎 將胚胎送入母體動(dòng)物 發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 （只有在產(chǎn)下的雌性動(dòng)物個(gè)體中，轉(zhuǎn)入的基因才能表達(dá)） 供體動(dòng)物： 存在的難題： 解決方法： 將供體基因組導(dǎo)入某種基因調(diào)節(jié)因子，以抑制抗原決定基因的表達(dá)； 或設(shè)法除去抗原決定基因，再結(jié)合克隆技術(shù)，培育出沒有免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆豬器官。 , March 22, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 2023年 3月 22日星期三 10時(shí) 36分 33秒 22:36:3322 March 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 2023年 3月 下午 10時(shí) 36分 :36March 22, 2023 1行動(dòng)出成果，工作出財(cái)富。 作用：抗病毒的特效藥。 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 體外 特定 DNA片段 ： 體外模擬雙鏈 DNA復(fù)制 （二）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 四種脫氧核苷酸 (dNTP) 一對(duì)引物： 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq酶） 模板 DNA( 含有目的基因 ) ： 與目的基因的起始段互補(bǔ)核苷酸序列 一段已知目的基因的核苷酸序列 ： 變性 （ 90℃ 95℃ ）：目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈； 復(fù)性 （ 55℃ 65℃ ）：引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合； 延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在Taq酶的作用下，合成與模板互補(bǔ)的 DNA鏈； 約 2n PCR技術(shù)擴(kuò)增與 DNA復(fù)制的比較 PCR技術(shù) DNA復(fù)制 相同點(diǎn) 原料 條件 不同點(diǎn) 解旋方式 場所 酶 結(jié)果 四種脫氧核苷酸 模板、能量、酶 高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復(fù)制 主要細(xì)胞核內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細(xì)胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個(gè) DNA分子 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 目的基因 推測 推測 化學(xué)合成 例：根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： （三）化學(xué)方法人工合成的目的基因 適用：基因比較小，核苷酸序列已知 ： 使目的基因 在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在 ，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因 能夠表達(dá)和發(fā)揮作用 。 黏性末端或平末端 DNA1 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT DNA2 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 重組 DNA GGCATCTTAA AATTCCGTAG 由于切割后的載體和目的基因具有相同的末端，故重組 DNA存在 3中可能連接 。 例如：將富含賴氨酸的蛋白質(zhì)編碼基因?qū)胗衩?，賴氨酸含量提?30%。 蛋白質(zhì)工程流程圖： 預(yù)期功能 DNA合成 分子設(shè)計(jì) 生物功能 轉(zhuǎn)錄 翻譯 折疊 1. 從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā) 2. 設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 3. 推測應(yīng)有的氨基酸序列 4. 找到相應(yīng)的脫氧核苷酸序列 某多肽鏈的一段氨基酸序列是： …… 丙氨酸 色氨酸 賴氨酸 甲硫氨酸 苯丙氨酸 …… 丙氨酸： GCU、 GCC、 GCA、 GCG 色氨酸： UGG 賴氨酸： AAA、 AAG 甲硫氨酸： AUG 苯丙氨酸： UUU、 UUC 討論： 怎樣得出決定這一段肽鏈的脫氧核苷酸序列？ 請(qǐng)把相