植物基因工程中的λ噬菌體載體(專業(yè)版)
【正文】 λ噬菌體載體的克隆原理和步驟 （ 1）通過裂解過程增殖載體 ? 通過噬菌體的增殖，從中提取噬菌體 DNA ? 噬菌體載體均含有與裂解生長所必須的基因片斷，不同的載體采用不同的大腸桿菌宿主菌來增殖。 由于噬菌體頭部包裝容量的限制，重組 λ DNA分子大小只能在 39— 52kb之間。 其中使用最多的是入噬菌體。 噬菌體 (bacteriophage， phage)簡介 噬菌體分類 毒性噬菌體（ virulent phage） ：吸附、穿入、生物合成、成熟、 釋放 溫和噬菌體（ temperate phage） ：轉(zhuǎn)導、溶 源 性轉(zhuǎn)換 噬菌體 溫和噬菌體可有三種存在狀態(tài)：溶菌周期的具有感染性的游離噬菌體顆粒；溶源周期的前噬菌體；宿主菌細胞質(zhì)內(nèi)的游離噬菌體核酸。環(huán)狀DNA 分子在宿主細胞里復制若干次 , 合成了大量的噬菌體基因產(chǎn)物 , 形成子代噬菌體顆粒 , 成熟后使細菌裂解 , 釋放出許多新的有感染能力的病毒顆粒。 λ DNA作為外源基因的克隆載體 λ 基因組中間部分占 30% 的 DNA(包括重組和溶源化基因 )并不是噬菌體裂解生長所必需的，裂解生長所需的基因都在基因組的左側(cè)和右側(cè)，而典型的 λ 克隆載體在部分或全部非必需基因的兩側(cè)含有限制酶位點，這就賦予了 λ 載體克隆大片段的能力，外源基因插入到限制酶位點之間，在體外包裝成噬菌體，雖然包裝效率僅達 10%，但一經(jīng)包裝，在大腸桿菌中形成噬菌斑的效率可達 100% 。 ? 置換型載體，切割后形成左臂、填充片斷、右臂，填充片斷的存在會影
教學課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1