【正文】 ⑷ 在動物乳腺表達的外源基因可以遺傳，可用常規(guī)技術(shù)繁殖生產(chǎn)群體。拔出顯微注射針解除固定管的負壓，操作完成。目的基因的制備和轉(zhuǎn)基因的方法? 目的基因的制備卵母細胞 體外受精 目的基因 轉(zhuǎn)基因動物 缺點：注入目的基因的命中率低，目的基因的整合率低，受精卵移植的受孕率低。putida）l上市產(chǎn)品： IFN溶解氧控制工程菌是好氧微生物，生長過程需要大量氧。選擇劑 selective agentl維持工程菌的純正性和質(zhì)粒的穩(wěn)定性的化合物。? 修飾的蛋白質(zhì)糖基化側(cè)鏈過長，會引起副作用。因此，當載體的多克隆位點沒有插入外源 DNA片段時， α 互補能正常進行，產(chǎn)生有活性的 β 半乳糖苷酶。 所用的方法主要有遺傳學方法、免疫學方法、核酸雜交法、 PCR等。l外源基因表達盒 (操縱子模型 )：目標基因 PCR定位克隆PCR循環(huán)PCR擴增的反應體系組成l模板 DNA：目標序列 ,100－ 10這種載體適用于可編碼 β半乳糖苷酶羧基端部分序列的宿主細胞。菌落原位雜交的原理 鑒定方法? 菌落 PCR： 是否 含有目標基因? 載體大?。弘娪緳z測? 酶切鑒定：插入 片段大小 及插入方向? 測序確證：目標基因的序列準確無誤，閱讀框架通讀二 基因工程菌的構(gòu)建? 基因工程菌： 微生物為操作對象，通過基因工程技術(shù)獲得的表達外源基因或過量或抑制表達自身基因的工程生物體。2融合蛋白、 OspA脂蛋白（疫苗）等PEG? 聚乙二醇（ PEG）是中性、無毒且具有獨特理化性質(zhì)和良好的生物相容性的高分子聚合物，也是經(jīng) FDA批準的極少數(shù)能作為體內(nèi)注射藥用的合成聚合物之一。但這種方法能獲得相當量的重組水蛭素，所以極大地推動了水蛭素的藥理、臨床等方面研究工作的深人開展。? 甲基營養(yǎng)型酵母：加入甲醇進行誘導l溫度l溶解氧lpH大腸桿菌和釀酒酵母生長最低溫度為 10℃大腸桿菌生長最適溫度為 37℃ ，最高溫度為 45℃ 。l免疫調(diào)節(jié)活性 —— 治療慢性肉芽腫瘤（ rhuIFNγ ）l多發(fā)性硬化癥 rhuIFNβ重組干擾素的臨床應用l體外誘生干擾素制備工藝： Sendai病毒誘導人白細胞干擾素生產(chǎn)工藝路線（ 1）l1989年： IFNαn3/Alferon，批準上市l(wèi)產(chǎn)量低： 1g逆轉(zhuǎn)錄合成法 通過 PCR擴增目的基因? 顯微注射法是最早使用、至今仍在使用的較成熟的基因?qū)敕椒?。病毒載體法 轉(zhuǎn)基因動物的應用研究? 改良動物經(jīng)濟性狀的嘗試試圖通過轉(zhuǎn)移單個基因改良動物經(jīng)濟性狀的研究，至今仍未見成功的報道，尚需對性狀表現(xiàn)的生化代謝途徑，有關(guān)基因的相互作用以及基因定位整合，基因定量表達、組織特異性表達等進行深入的研究。病毒轉(zhuǎn)基因?qū)λ拗鞯挠绊? 一頭奶牛一年可生產(chǎn)乳蛋白 250—300Kg ，一只綿羊或山羊一年可生產(chǎn)乳蛋白 25—30Kg。細菌質(zhì)粒和噬菌體載體只能將目的基因運載至細菌中擴增和表達。受體動物子宮 取核動物胎兒成纖維細胞 取出 l基因工程大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)工藝：干擾素生產(chǎn)工藝路線（ 3）l上市產(chǎn)品：重組人干擾素 rhuIFN?? 1986， rhuIFNα2a， rhuIFNα2b；?? 1990， rhuIFNγ1b； 1993， rhuIFNβ1b；?? 2023－ 2023： PEG化 IFN， PEGIntron,干擾素是在酸性條件下穩(wěn)定，而在堿性條件下容易降解。