【正文】 ⑷ 在動(dòng)物乳腺表達(dá)的外源基因可以遺傳，可用常規(guī)技術(shù)繁殖生產(chǎn)群體。拔出顯微注射針解除固定管的負(fù)壓，操作完成。目的基因的制備和轉(zhuǎn)基因的方法? 目的基因的制備卵母細(xì)胞 體外受精 目的基因 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 缺點(diǎn)：注入目的基因的命中率低，目的基因的整合率低，受精卵移植的受孕率低。putida）l上市產(chǎn)品： IFN溶解氧控制工程菌是好氧微生物，生長(zhǎng)過程需要大量氧。選擇劑 selective agentl維持工程菌的純正性和質(zhì)粒的穩(wěn)定性的化合物。? 修飾的蛋白質(zhì)糖基化側(cè)鏈過長(zhǎng)，會(huì)引起副作用。因此，當(dāng)載體的多克隆位點(diǎn)沒有插入外源 DNA片段時(shí)， α 互補(bǔ)能正常進(jìn)行，產(chǎn)生有活性的 β 半乳糖苷酶。 所用的方法主要有遺傳學(xué)方法、免疫學(xué)方法、核酸雜交法、 PCR等。l外源基因表達(dá)盒 (操縱子模型 )：目標(biāo)基因 PCR定位克隆PCR循環(huán)PCR擴(kuò)增的反應(yīng)體系組成l模板 DNA：目標(biāo)序列 ,100－ 10這種載體適用于可編碼 β半乳糖苷酶羧基端部分序列的宿主細(xì)胞。菌落原位雜交的原理 鑒定方法? 菌落 PCR： 是否 含有目標(biāo)基因? 載體大?。弘娪緳z測(cè)? 酶切鑒定：插入 片段大小 及插入方向? 測(cè)序確證：目標(biāo)基因的序列準(zhǔn)確無誤，閱讀框架通讀二 基因工程菌的構(gòu)建? 基因工程菌： 微生物為操作對(duì)象，通過基因工程技術(shù)獲得的表達(dá)外源基因或過量或抑制表達(dá)自身基因的工程生物體。2融合蛋白、 OspA脂蛋白（疫苗）等PEG? 聚乙二醇（ PEG）是中性、無毒且具有獨(dú)特理化性質(zhì)和良好的生物相容性的高分子聚合物，也是經(jīng) FDA批準(zhǔn)的極少數(shù)能作為體內(nèi)注射藥用的合成聚合物之一。但這種方法能獲得相當(dāng)量的重組水蛭素，所以極大地推動(dòng)了水蛭素的藥理、臨床等方面研究工作的深人開展。? 甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母：加入甲醇進(jìn)行誘導(dǎo)l溫度l溶解氧lpH大腸桿菌和釀酒酵母生長(zhǎng)最低溫度為 10℃大腸桿菌生長(zhǎng)最適溫度為 37℃ ，最高溫度為 45℃ 。l免疫調(diào)節(jié)活性 —— 治療慢性肉芽腫瘤（ rhuIFNγ ）l多發(fā)性硬化癥 rhuIFNβ重組干擾素的臨床應(yīng)用l體外誘生干擾素制備工藝： Sendai病毒誘導(dǎo)人白細(xì)胞干擾素生產(chǎn)工藝路線（ 1）l1989年： IFNαn3/Alferon，批準(zhǔn)上市l(wèi)產(chǎn)量低： 1g逆轉(zhuǎn)錄合成法 通過 PCR擴(kuò)增目的基因? 顯微注射法是最早使用、至今仍在使用的較成熟的基因?qū)敕椒?。病毒載體法 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用研究? 改良動(dòng)物經(jīng)濟(jì)性狀的嘗試試圖通過轉(zhuǎn)移單個(gè)基因改良動(dòng)物經(jīng)濟(jì)性狀的研究，至今仍未見成功的報(bào)道，尚需對(duì)性狀表現(xiàn)的生化代謝途徑，有關(guān)基因的相互作用以及基因定位整合，基因定量表達(dá)、組織特異性表達(dá)等進(jìn)行深入的研究。病毒轉(zhuǎn)基因?qū)λ拗鞯挠绊? 一頭奶牛一年可生產(chǎn)乳蛋白 250—300Kg ，一只綿羊或山羊一年可生產(chǎn)乳蛋白 25—30Kg。細(xì)菌質(zhì)粒和噬菌體載體只能將目的基因運(yùn)載至細(xì)菌中擴(kuò)增和表達(dá)。受體動(dòng)物子宮 取核動(dòng)物胎兒成纖維細(xì)胞 取出 l基因工程大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)工藝：干擾素生產(chǎn)工藝路線（ 3）l上市產(chǎn)品：重組人干擾素 rhuIFN?? 1986， rhuIFNα2a， rhuIFNα2b；?? 1990， rhuIFNγ1b； 1993， rhuIFNβ1b；?? 2023－ 2023： PEG化 IFN， PEGIntron,干擾素是在酸性條件下穩(wěn)定，而在堿性條件下容易降解。