基因工程制藥技術(shù)(存儲版)
【正文】 市重組干擾素 :l優(yōu)點(diǎn)：首次實(shí)現(xiàn)大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)。α2b/安福隆l表達(dá)產(chǎn)物：無糖基化可溶性蛋白質(zhì)，具有天然分子結(jié)構(gòu)和生物活性l工藝特點(diǎn)：?? 發(fā)酵周期短：幾個(gè)小時(shí)?? 無需變性、復(fù)性過程，獲得有活性產(chǎn)品?? 純化過程：淘汰抗體親和層析干擾素生產(chǎn)工藝路線（ 5）五 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)主要步驟：? 獲取外源目的基因? 外源目的基因?qū)肷臣?xì)胞或胚胎干細(xì)胞? 選擇攜帶目的基因的細(xì)胞，選擇體外培養(yǎng)系統(tǒng)和宿主動物? 轉(zhuǎn)基因胚胎的發(fā)育及鑒定? 篩選所得的轉(zhuǎn)基因動物? 經(jīng)典的技術(shù)路線 已交配的 多細(xì)胞胚胎 受精卵 去核 轉(zhuǎn)基因動物的技術(shù)路線（續(xù)）? 整合卵受精的技術(shù)路線 ：目的基因的獲得cell， ES細(xì)胞）是從胚泡內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離得到的多潛能細(xì)胞。基因藥物生產(chǎn)? 基因藥物生產(chǎn)第一階段是細(xì)菌基因工程，第二階段是動物細(xì)胞基因工程，第三階段是轉(zhuǎn)基因動物 — 乳腺生物反應(yīng)器。轉(zhuǎn)基因動物研究存在的問題? 乳腺反應(yīng)器的完善? 生物活性接近天然產(chǎn)品。至今國際上轉(zhuǎn)基因羊、轉(zhuǎn)基因牛等的成功報(bào)道實(shí)例已有 10多種，生產(chǎn)出抗胰蛋白酶、乳鐵蛋白、人凝血蛋白因子 Ⅷ 、蛋白質(zhì) C等藥用蛋白。胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法 胚胎干細(xì)胞（ embryonic精子載體法是將成熟的精子與外源 DNA的載體共同孵育，使精子攜帶外源 DNA，受精后外源DNA整合至染色體中。顯微注射法是在顯微注射儀上，一側(cè)用吸管固定受精卵，另一側(cè)將注射針插入受精卵原核（一般是雄原核）。轉(zhuǎn)基因動物的方法 通過載體在宿主中克隆 成熟卵細(xì)胞 ? 特點(diǎn)：體細(xì)胞核移植；核移植前導(dǎo)入目的基因。妊娠目的基因 轉(zhuǎn)基因動物的技術(shù)路線（續(xù)）? 核移植（克?。┑募夹g(shù)路線或囊胚 整合外源基因卵子 體外培養(yǎng) 移植 目的基因kul工藝特點(diǎn)：分泌表達(dá)，產(chǎn)量低，成本高 ,過程嚴(yán)格l宿主：腐生型假單胞桿菌（ Pseudomonasαn1/Wellferon,分階段控制 pH： 根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果 來確定生長最適 pH和產(chǎn)物最適 pH，以達(dá)到最佳生產(chǎn)。溫度對工程菌發(fā)酵的影響兩段變溫發(fā)酵培養(yǎng)：前期：較高溫度發(fā)酵，獲得足夠高的菌體密度；后期：較低溫培養(yǎng)發(fā)酵，對菌體合成目標(biāo)產(chǎn)物的抑制不明顯，但可有效抑制目標(biāo)產(chǎn)物的降解和包涵體形成，總體提高工程菌的生產(chǎn)能力。l酵母：利用氨基酸為氮源無機(jī)鹽l磷、硫、鉀、鈣、鎂、鈉等大量元素和鐵、銅、鋅、錳、鉬等微量元素的鹽離子形態(tài)l基因工程菌生長提供必需的礦物質(zhì)。三 基因工程菌 的 培養(yǎng)與發(fā)酵? （ 1） 培養(yǎng)基組成與控制碳源氮源無機(jī)鹽選擇劑誘導(dǎo)物碳源l大腸桿菌：蛋白胨等蛋白質(zhì)的降解物作為碳源l酵母：利用葡萄糖、半乳糖等單糖類物質(zhì)。缺點(diǎn)：? 釀酒酵母發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，制約了高密度發(fā)酵。當(dāng)藕聯(lián)到藥物分子或藥物表面時(shí)，能 防止腎小球?yàn)V過 減少免疫原性 阻止蛋白酶降解2. 酵母表達(dá)系統(tǒng)細(xì)胞：單細(xì)胞真核生物，球形、橢圓形、卵形。 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是 發(fā)展最早、應(yīng)用最廣泛的經(jīng)典的表達(dá)系統(tǒng)優(yōu)點(diǎn)：? 遺傳背景清楚、目標(biāo)基因表達(dá)水平高（高達(dá) 70％），培養(yǎng)周期短，抗污染能力強(qiáng)缺點(diǎn)：? 以包涵體形式表達(dá)的重組蛋白喪失了原有的生物活性? 不能用于加工修飾化（糖基化、酰胺化）蛋
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