基因工程制藥技術(文件)
【正文】 量低，成本高 ,過程嚴格l宿主：腐生型假單胞桿菌（ Pseudomonas目的基因取出 移植 輸卵管 整合胚胎移植的技術路線非手術體外培養(yǎng) 整合外源基因卵子 或囊胚 轉基因動物的技術路線（續(xù)）? 核移植（克隆）的技術路線目的基因 轉基因動物 動物胎兒成纖維細胞 妊娠取核重組的 ? 特點：體細胞核移植；核移植前導入目的基因。妊娠 成熟卵細胞 囊胚 受體動物子宮 目的基因的擴增通過載體在宿主中克隆 轉基因動物的方法 顯微注射法 顯微注射法是在顯微注射儀上，一側用吸管固定受精卵，另一側將注射針插入受精卵原核（一般是雄原核）。精子載體法是將成熟的精子與外源 DNA的載體共同孵育，使精子攜帶外源 DNA，受精后外源DNA整合至染色體中。胚胎干細胞介導法 胚胎干細胞（ embryonic在嵌合過程中，帶有外源基因的 ES細胞可能進入生殖系，在經雜交育種可得到純合體，即為所需的轉基因小鼠。細菌質粒和噬菌體載體只能將目的基因運載至細菌中擴增和表達。病毒 DNA序列中有很強的啟動子，可使其后方的外源基因高產量和高頻率地表達。至今國際上轉基因羊、轉基因牛等的成功報道實例已有 10多種，生產出抗胰蛋白酶、乳鐵蛋白、人凝血蛋白因子 Ⅷ 、蛋白質 C等藥用蛋白。一頭奶牛一年可生產乳蛋白 250—300Kg ，一只綿羊或山羊一年可生產乳蛋白 25—30Kg。生物活性接近天然產品。轉入基因引起完整基因突變? 乳腺反應器的完善? 病毒轉基因對宿主的影響? 轉基因動物研究存在的問題? ⑶ 乳腺分泌的基因產物不但產量高，而且易提純?；蛩幬锷a? 基因藥物生產第一階段是細菌基因工程，第二階段是動物細胞基因工程，第三階段是轉基因動物 — 乳腺生物反應器。轉基因動物的應用研究? 改良動物經濟性狀的嘗試試圖通過轉移單個基因改良動物經濟性狀的研究，至今仍未見成功的報道，尚需對性狀表現的生化代謝途徑，有關基因的相互作用以及基因定位整合，基因定量表達、組織特異性表達等進行深入的研究。病毒載體法 cell， ES細胞）是從胚泡內細胞團分離得到的多潛能細胞。顯微注射法是最早使用、至今仍在使用的較成熟的基因導入方法。通過 PCR擴增目的基因? 逆轉錄合成法 目的基因的獲得特點：卵母細胞導入目的基因后再與精子受精 。感染 精子轉基因動物的技術路線（續(xù)）? 整合卵受精的技術路線 ：去核 受精卵 多細胞胚胎 已交配的 α2b/安福隆l表達產物：無糖基化可溶性蛋白質，具有天然分子結構和生物活性l工藝特點：?? 發(fā)酵周期短：幾個小時?? 無需變性、復性過程，獲得有活性產品?? 純化過程：淘汰抗體親和層析干擾素生產工藝路線（ 5）五 轉基因動物技術主要步驟：? 獲取外源目的基因? 外源目的基因導入生殖細胞或胚胎干細胞? 選擇攜帶目的基因的細胞，選擇體外培養(yǎng)系統(tǒng)和宿主動物? 轉基因胚胎的發(fā)育及鑒定? 篩選所得的轉基因動物? 經典的技術路線 干擾素生產工藝路線（ 4）動物無限細胞系培養(yǎng)生產工藝：l上市產品： rhuIFNβ1a?? 1996， Avonex(Biogen)； 2023，Rebif(Serono)l表達產物： 166l優(yōu)點：首次實現大規(guī)模商業(yè)化生產。l免疫調節(jié)活性 —— 治療慢性肉芽腫瘤（ rhuIFNγ ）l多發(fā)性硬化癥 rhuIFNβ重組干擾素的臨床應用l體外誘
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