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正文內(nèi)容

常用方法學(xué)簡(jiǎn)介(2)(專業(yè)版)

  

【正文】 應(yīng)用某種已知的并被標(biāo)記的 RNA或 DNA片段即核酸探針( cRNA或 cDNA),與細(xì)胞內(nèi)的待測(cè)核酸( RNA或 DNA片段)進(jìn)行雜交,通過(guò)標(biāo)記物的顯示在光鏡和(或)電鏡下觀察目的 mRNA或 DNA的存在與定位。此反應(yīng)稱 PAS陽(yáng)性反應(yīng),PAS陽(yáng)性部位為多糖存在部位。光鏡分辨率為,放大倍數(shù)約為 1000倍,而電鏡的分辨率為,比光鏡高 1000倍,可放大幾萬(wàn)倍至幾十萬(wàn)倍,因此電鏡能觀察到更微細(xì)的結(jié)構(gòu)。 (三)組織化學(xué)術(shù)( histochemistry) 應(yīng)用化學(xué)反應(yīng)與物理反應(yīng)原理檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)某種化學(xué)成分并進(jìn)行定位、定量及相關(guān)功能研究的技術(shù)。 應(yīng)用:吖啶橙 +核酸 金胺 +結(jié)核菌 介子奎二噁因 +染色體 ( C)抗體熒光技術(shù) (用免疫染色) 利用特定的抗原必然和特定的抗體相結(jié)合這一個(gè)事實(shí),有意識(shí)地使帶熒光標(biāo)記的抗體和標(biāo)本中的抗原進(jìn)行抗原 /抗體反應(yīng),這樣兩者的結(jié)合體就能通過(guò)抗體的熒光觀察到。 流式細(xì)胞術(shù)( flow cytometry) 是近年發(fā)展起來(lái)的細(xì)胞分類和定量研究技術(shù),能對(duì)細(xì)胞的生物化學(xué)和生物物理特性進(jìn)行快速定量測(cè)定,還可分選收集各種細(xì)胞。 酶 酶細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)的基本原理是利用酶對(duì)其相應(yīng)底物的水解、氧化等作用,使底物的反應(yīng)產(chǎn)物被某種捕獲劑捕獲并在原位沉淀,形成有色的終產(chǎn)物,借此測(cè)定該酶在細(xì)胞內(nèi)的分布及活性強(qiáng)弱。切片則用超薄切片機(jī),制成 50~80nm的超薄切片,用醋酸鈾和檸檬酸鉛染色,然后在電鏡下觀察并攝片。 激光掃描共聚焦顯微鏡 ( laser scanning confocal microscope) 是近年研制和應(yīng)用的一種新型顯微鏡。 測(cè)定物質(zhì)的熒光光譜或者激發(fā)光譜,可以判定物質(zhì)性質(zhì)(熒光光度法)。 ( 七)組織培養(yǎng)技術(shù)( tissue culture) 是將離體的細(xì)胞、組織或器官置于培養(yǎng)基中,在無(wú)菌和適宜溫度及酸堿度條件下進(jìn)行培養(yǎng)成活,藉以觀察各種物理、化學(xué)和生物因素對(duì)組織或細(xì)胞的作用,探索和提示細(xì)胞生命活動(dòng)規(guī)律和細(xì)胞的結(jié)構(gòu)功能變化。為顯示抗原抗體復(fù)合物的存在,需進(jìn)行抗體標(biāo)記;用熒光素如異硫氰酸熒光素標(biāo)記,可以在熒光顯微鏡下觀察,用膠體金標(biāo)記,可以在電鏡下觀察,用辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記,則可在光鏡下或在電鏡下觀察。 更好保存細(xì)胞內(nèi)酶的活性、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。 缺點(diǎn):組織片厚,經(jīng)冷凍后易破壞組織結(jié)構(gòu) 熒光顯微鏡( fluorescence microscope) 由光源、濾光系統(tǒng)和顯微鏡三個(gè)部分組成。常用的方法有直接法、間接法和親和素 生物素復(fù)合物法( ABC法)等。 新鮮實(shí)體組織細(xì)胞分離 膠原纖維 酶消化法原理 緊密連接
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