常用方法學(xué)簡介(2)(更新版)
【正文】 備比光鏡的要求更嚴(yán)格，組織塊要更新鮮，體積更?。?1mm3），固定常用戊二醛和鋨酸。切片則用超薄切片機(jī)，制成 50~80nm的超薄切片，用醋酸鈾和檸檬酸鉛染色，然后在電鏡下觀察并攝片。它將激光束落在樣品上，并作移動(dòng)掃描，對(duì)樣品內(nèi)某種熒光標(biāo)記的物質(zhì)進(jìn)行二維和三維的動(dòng)態(tài)微量分析測定。 酶 酶細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)的基本原理是利用酶對(duì)其相應(yīng)底物的水解、氧化等作用，使底物的反應(yīng)產(chǎn)物被某種捕獲劑捕獲并在原位沉淀，形成有色的終產(chǎn)物，借此測定該酶在細(xì)胞內(nèi)的分布及活性強(qiáng)弱。 應(yīng)用：生物學(xué)方面 —— 判定維生素，研究生物學(xué)上的生物源的胺。 流式細(xì)胞術(shù)（ flow cytometry） 是近年發(fā)展起來的細(xì)胞分類和定量研究技術(shù)，能對(duì)細(xì)胞的生物化學(xué)和生物物理特性進(jìn)行快速定量測定，還可分選收集各種細(xì)胞。如細(xì)胞周期各時(shí)相細(xì)胞的比例，同步分析細(xì)胞內(nèi) DNA、RNA和蛋白質(zhì)的含量， T淋巴細(xì)胞亞群的分離和定量，淋巴細(xì)胞表面受體的分析，分離和濃縮造血干細(xì)胞，血細(xì)胞增殖情況，惡性腫瘤早期診斷，藥物作用機(jī)制等。 應(yīng)用：吖啶橙 +核酸 金胺 +結(jié)核菌 介子奎二噁因 +染色體 （ C）抗體熒光技術(shù) （用免疫染色） 利用特定的抗原必然和特定的抗體相結(jié)合這一個(gè)事實(shí)，有意識(shí)地使帶熒光標(biāo)記的抗體和標(biāo)本中的抗原進(jìn)行抗原 /抗體反應(yīng)，這樣兩者的結(jié)合體就能通過抗體的熒光觀察到。 （四）免疫組織化學(xué)術(shù)（ immunohistochemistry） 利用免疫學(xué)抗原和抗體特異性結(jié)合的原理，檢測組織或細(xì)胞中的多肽和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的分布。 （三）組織化學(xué)術(shù)（ histochemistry） 應(yīng)用化學(xué)反應(yīng)與物理反應(yīng)原理檢測組織或細(xì)胞內(nèi)某種化學(xué)成分并進(jìn)行定位、定量及相關(guān)功能研究的技術(shù)。 掃描電鏡（ scanning electron microscope) 冰凍切片 組織置入液氮（ 196℃ ）快速凍結(jié)，恒冷切 片機(jī)切片、染色。光鏡分辨率為，放大倍數(shù)約為 1000倍，而電鏡的分辨率為，比光鏡高 1000倍，可放大幾萬倍至幾十萬倍，因此電鏡能觀察到更微細(xì)的結(jié)構(gòu)。光源為高壓汞燈，可產(chǎn)生紫外光，標(biāo)本中的自發(fā)熒光物質(zhì)或經(jīng)熒光素染色或標(biāo)記的結(jié)構(gòu)在紫外光激發(fā)下可產(chǎn)生各種顏色的熒光，以此來研究該熒光物質(zhì)在細(xì)胞和組織中的分布。此反應(yīng)稱 PAS陽性反應(yīng)，PAS陽性部位為多糖存在部位。 熒光的觀察 （按標(biāo)本分類） 在熒光顯微鏡下觀察的標(biāo)本，當(dāng)然必須發(fā)出熒光，可是大多數(shù)標(biāo)本本身不能發(fā)出熒光，因而必須用熒光色素處理過才能發(fā)出熒光。應(yīng)用某種已知的并被標(biāo)記的 RNA或 DNA片段即核酸探針（ cRNA或 cDNA），與細(xì)胞內(nèi)的待測核酸（ RNA或 DNA片段）進(jìn)行雜交，通過標(biāo)記物的顯示在光鏡和（或）電鏡下觀察目的 mRNA或 DNA的存在與定位
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