【正文】 ② 無(wú)機(jī)凝膠：多孔硅膠和多孔玻璃 。 目前有三種分離理論： ① 平衡理論 ：認(rèn)定分子擴(kuò)散進(jìn)入填料顆粒的孔中并再出來(lái)所需的時(shí)間遠(yuǎn)小于溶質(zhì)區(qū)段在此停留的時(shí)間 , 溶質(zhì)分子出入孔達(dá)到了平衡 。 這些 大的樣品分子 直接流過柱子 , 并 首先 在色譜圖上出現(xiàn) 。 五、離子排斥色譜 (Ion Exclusion Chromatography， IEC) 高容量陽(yáng)離子交換樹脂使樣品 陰離子由于受到Donnan排斥很快流出色譜柱 , 而低電離度 弱酸分子能進(jìn)入到樹脂內(nèi)部 ， 且通過溶質(zhì)與樹脂功能團(tuán)之間的極性相互作用和溶質(zhì)與樹脂基體間的非極性相互作用為固定相保留 。 92年， Dionex公司推出 SRS系列電化學(xué)抑制柱。 注意：電導(dǎo)檢測(cè)器是一種通用性檢測(cè)器 ， 它檢測(cè)的溶液中陰離子和陽(yáng)離子的電導(dǎo)總和 。 圖 蛋白質(zhì)在疏水柱和反相柱上的分離比較 1 細(xì)胞色素 C 2 肌紅蛋白 3 溶菌酶 TSK 5PW硫酸銨從RP304 乙腈從 0增加到 100% 疏水作用色譜與反相色譜的比較 ★ （固定相的差別） HIC填料表面疏水性沒有 RPC強(qiáng)：疏水基團(tuán)一般是低密度的苯基、戊基、丁基、丙基等 ★ （流動(dòng)相的差別） HIC一般采用 pH68的鹽水溶液[如 (NH4)2SO4]，作降濃度洗脫。 （ 2） 流動(dòng)相優(yōu)化 流動(dòng)相系統(tǒng)最好是 CH3OH / H2O， 緩沖液一般是磷酸鹽（ pH ~ ~ ） 和醋酸鹽 （ pH ~） 。最好保持柱溫穩(wěn)定 。在高鹽濃度條件下，蛋白質(zhì)與固定相疏水締合；濃度降低時(shí)，疏水作用減弱，逐步被洗脫下來(lái) ★ （應(yīng)用特點(diǎn)） HIC分離條件有利于蛋白質(zhì)保持活性，回收率高 離子性化合物如何分離？ ● 光度檢測(cè)的可行性 鹵素、無(wú)機(jī)酸根和一些弱的有機(jī)酸根離子，在可見或紫外區(qū)域沒有光吸收或吸收很弱 。 思考題： 1）抑制柱的選擇？ 2）如何獲得大容量抑制柱？ 3）試分析 NaHCO3 Na2CO3洗脫液的抑制過程。 海水淡化 電滲析原理 + 鹽水 淡水 極水 1 離子在電場(chǎng)下的定向遷移 2 膜的選擇性透過 3 分離對(duì)象 /產(chǎn)品的去向 關(guān)注 電化學(xué)抑制器的工作原理 圖 電化學(xué)膜抑制器的抑制原理 (陰離子分析 ) 對(duì)比電滲析 ● 膜類型及位置 ● 離子的遷移 ● 作用及目的 思考題：試設(shè)計(jì)用于陽(yáng)離子分析的電化學(xué)抑制器。 因此 ， 在離子排斥色譜中溶質(zhì)的保留作用取決于： l 溶質(zhì)受阻程度的不同 l 溶質(zhì)與樹脂功能團(tuán)間極性相互作用的差別 l 溶質(zhì)與樹脂功能團(tuán)間非極性相互作用的差別 離子排斥色譜主要用于有機(jī)酸無(wú)機(jī)弱酸和醇類的分離 。 一些 小 到幾乎可滲透到整個(gè)填料顆粒的 樣品分子 具有最大保留值 , 通過柱子最慢 , 并最后 在色譜圖上出現(xiàn) 。 在其它形式的液相色譜中 ， 溶質(zhì)在流動(dòng)相和固定相之間進(jìn)行分配 。 （ 2） 凝膠的選擇 根據(jù)凝膠的色譜指標(biāo) , 即 滲透極限 和 分離范圍 進(jìn)行選擇 。 其特點(diǎn)是熱穩(wěn)定性 、 機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)惰性差 , 凝膠易老化 , 所以對(duì)使用條件要求較嚴(yán)格 。 排阻色譜 (SEC)— 色譜柱校正曲線 Eluent : THF （ 2） 分離模型 （ 自學(xué) ） ：所謂的分離機(jī)理就是根據(jù)一定的物理模型 , 用分子參數(shù)和柱結(jié)構(gòu)參數(shù)來(lái)計(jì)算 Ve和 K。 . 溶質(zhì)在填料中的滲透體積 不同樣品分子通過多孔填料的排阻機(jī)理示意圖 如果某樣品分子太大不能進(jìn)入填料的孔中 , 就會(huì)被填料所排阻 。 除了傳統(tǒng)的以抑制柱為特點(diǎn)的離子交換色譜 （ HPIC）外 ， 離子色譜技術(shù)還出現(xiàn)了 以 Donnan排斥 、 空間排阻和吸附過程為分離機(jī)理的離子排斥色譜 （ HPIEC） 和以吸附為分離機(jī)理的離子對(duì)色譜 （ MPIC） 。 圖 纖維管抑制柱 CO32 + H+ → H 2CO3 H2SO4 NaHCO3 +X H+ Na+ 陽(yáng)離子交換膜 3）平板微膜抑制柱 85年 , Dionex公司 ★在流出液通道填充細(xì)目交換劑，提高了離子交換速度，從而提高了抑制柱的交換容量 ★抑制柱的死體積小 檢測(cè)器 分離柱 4） 電化學(xué)抑制器 85年，田昭武、胡榮宗等研制成功 XYZ1型電化學(xué)抑制柱。 交換： R+OH + Na+X → R +X + Na+OH 洗脫： R+X + Na+OH → R+OH + Na+X 離子色譜基本原理 高效離子交換色譜分離 電導(dǎo)抑制器 （最常見檢測(cè)方式） 1）分析柱的選擇？ 2）出峰順序？如鹵素陰離子？ 3）如何獲得高柱效？ 思考題： ● 抑制過程 ：當(dāng) 分離后的樣品離子 與淋洗液一起進(jìn)入抑制柱時(shí) ， 由于抑制柱中填充有陽(yáng)離子交換樹脂 ，淋洗液與分析樣品就發(fā)生了如下的反應(yīng)