【正文】 表示標準偏差 。 在其它形式的液相色譜中 ， 溶質(zhì)在流動相和固定相之間進行分配 。 0 Kd 1, VM Ve VM＋ VS 樣品分子 選擇性滲透 , 樣品組分按它們的分子大小被分離 。 一些 小 到幾乎可滲透到整個填料顆粒的 樣品分子 具有最大保留值 , 通過柱子最慢 , 并最后 在色譜圖上出現(xiàn) 。 在許多色譜模式探索中 ,人們往往從溶質(zhì) ——固定相 ——流動相之間的相互作用力來討論色譜分離問題 。 因此 ， 在離子排斥色譜中溶質(zhì)的保留作用取決于： l 溶質(zhì)受阻程度的不同 l 溶質(zhì)與樹脂功能團間極性相互作用的差別 l 溶質(zhì)與樹脂功能團間非極性相互作用的差別 離子排斥色譜主要用于有機酸無機弱酸和醇類的分離 。 單柱法的檢測：電導(dǎo)法和間接光度法 間接光度法是一種離子對探針檢測無紫外響應(yīng)物質(zhì)的技術(shù) 。 海水淡化 電滲析原理 + 鹽水 淡水 極水 1 離子在電場下的定向遷移 2 膜的選擇性透過 3 分離對象 /產(chǎn)品的去向 關(guān)注 電化學(xué)抑制器的工作原理 圖 電化學(xué)膜抑制器的抑制原理 (陰離子分析 ) 對比電滲析 ● 膜類型及位置 ● 離子的遷移 ● 作用及目的 思考題：試設(shè)計用于陽離子分析的電化學(xué)抑制器。 （ 如何再生 ？ ） 。 思考題： 1）抑制柱的選擇？ 2）如何獲得大容量抑制柱？ 3）試分析 NaHCO3 Na2CO3洗脫液的抑制過程。 離子色譜的由來 ：早期的 IEC， 缺少相匹配的檢測器 ， 難于發(fā)揮更大的作用 。在高鹽濃度條件下，蛋白質(zhì)與固定相疏水締合；濃度降低時，疏水作用減弱，逐步被洗脫下來 ★ （應(yīng)用特點） HIC分離條件有利于蛋白質(zhì)保持活性，回收率高 離子性化合物如何分離？ ● 光度檢測的可行性 鹵素、無機酸根和一些弱的有機酸根離子，在可見或紫外區(qū)域沒有光吸收或吸收很弱 。 CO2NH4+ NH3+ NH3+ NH3+ SO42+ NH4+ SO42+ 蛋白質(zhì)鹽析機理示意圖 六、疏水作用色譜 疏水相互作用色譜法 （ HIC） 指采用適度疏水性的固定相 , 以含鹽的水溶液作為流動相分離生物大分子（ 如蛋白質(zhì) ） 鍵合相色譜方法 。最好保持柱溫穩(wěn)定 。11 高效液相色譜法 (續(xù) 2) 例如鄰位 、 間位和對位羥基苯甲酸的 Ka1（ 25℃ ） 分別為 103(oHBA)、 105(mHBA)和 105(pHBA)。 （ 2） 流動相優(yōu)化 流動相系統(tǒng)最好是 CH3OH / H2O， 緩沖液一般是磷酸鹽（ pH ~ ~ ） 和醋酸鹽 （ pH ~） 。 蛋白質(zhì)在稀鹽溶液中，溶解度會隨鹽濃度的增高而上升（鹽溶），但當鹽濃度增高到一定數(shù)值時，其溶解度又逐漸下降，直至蛋白質(zhì)析出（鹽析）。 圖 蛋白質(zhì)在疏水柱和反相柱上的分離比較 1 細胞色素 C 2 肌紅蛋白 3 溶菌酶 TSK 5PW硫酸銨從RP304 乙腈從 0增加到 100% 疏水作用色譜與反相色譜的比較 ★ （固定相的差別） HIC填料表面疏水性沒有 RPC強：疏水基團一般是低密度的苯基、戊基、丁基、丙基等 ★ （流動相的差別） HIC一般采用 pH68的鹽水溶液[如 (NH4)2SO4]，作降濃度洗脫。 ① 氨基酸分析儀 ② 柱后衍生檢測 （ 如茚三酮 ） ● 糖類的分離 ：糖化合物與硼酸生成絡(luò)陰離子 , 用陰離子交換樹脂進行分離 。 注意：電導(dǎo)檢測器是一種通用性檢測器 ， 它檢測的溶液中陰離子和陽離子的電導(dǎo)總和 。 樹脂填充式抑制柱缺點 ： 。 92年， Dionex公司推出 SRS系列電化學(xué)抑制柱。 在使用上 ， 雙柱法具有較高的靈敏度 ， 但死體積較大；而單柱法死體積較小 ， 比雙柱法使用更低濃度的洗脫劑以及更低交換容量的填料 ， 但由于其柱容量小 ， 因此 ， 進樣量受到一定的限制 。 五、離子排斥色譜 (Ion Exclusion Chromatography， IEC) 高容量陽離子交換樹脂使樣品 陰離子由于受到Donnan排斥很快流出色譜柱 , 而低電離度 弱酸分子能進入到樹脂內(nèi)部 ， 且通過溶質(zhì)與樹脂功能團之間的極性相互作用和溶質(zhì)與樹脂基體間的非極性相互作用為固定相保留 。 凝膠滲透色譜 (GPC): 以有機溶劑為流動相 。 這些 大的樣品分子 直接流過柱子 , 并 首先 在色譜圖上出現(xiàn) 。 Kd = 1, Ve = VM＋ VS 樣品分子 完全滲透 （ 自由擴散 ） ； 182。 目前有三種分離理論： ① 平衡理論 ：認定分子擴散進入填料顆粒的孔中并再出來所需的時間遠小于溶質(zhì)區(qū)段在此停留的時間 , 溶質(zhì)分子出入孔達到了平衡 。 ③ 流動分離理論 ：速度的流型分布決定分離 。 ② 無機凝膠：多孔硅膠和多孔玻璃 。