發(fā)育生物學(xué)——發(fā)育生物學(xué)研究技術(shù)(專業(yè)版)
【正文】 發(fā)育遺傳學(xué)技術(shù) ? 反向遺傳學(xué)技術(shù)： 通過抑制性因子抑制目的基因的功能 1. RNA干擾 。 突變基因的克隆 突變體獲得后，克隆引起該突變的基因 ? 插入突變： 利用 P因子序列作為探針，從突變體文庫中篩選出含 P因子的克隆，從而確定其插入點(diǎn)及被阻斷的基因。 顯微鏡技術(shù) 目的：觀察胚胎個體 分類： ? 光學(xué) (optical)顯微鏡 : ? 體視顯微鏡 : 組織分離用 ? 熒光顯微鏡 ： 顯微鏡技術(shù) 激光共聚焦顯微鏡 (laser confocal)： 熒光標(biāo)記，對胚胎或細(xì)胞中的特定蛋白質(zhì)或 mRNA的分布進(jìn)行定性或定量研究； 圖像采集的效果很好 ；細(xì)胞或組織的三維重塑 (reconstructing) 組織切片技術(shù) 目的：觀察胚胎的內(nèi)部組織學(xué)結(jié)構(gòu) 分類： ? 石蠟組織切片： 石蠟包埋，切片機(jī)切片 ? 冷凍切片： 低溫包埋劑包埋，低溫切片機(jī)切片，對樣品中 核酸的保存較好，但切片的質(zhì)量差。 分子生物學(xué)技術(shù) 目的：檢測目的基因或蛋白質(zhì)在某一發(fā)育時期或特定組織中的表達(dá) 分類： ? Polymerase chain reaction (PCR): DNA amplification ? Realtime quantitative PCR: RNA 定量 ? RTPCR/Northern blotting: mRNA expression ? Western blotting: protein expression ? 免疫共沉淀 (CoIP): proteinprotein interaction Northern Blotting Analysis Southern Blotting Analysis Realtime PCR 儀 原位雜交技術(shù) 目的：檢測某一特定基因 mRNA在某胚胎和組織中的分布情況 分類： ? 放射性標(biāo)記探針：放射自顯影 ? 非放射性標(biāo)記探針： 地高辛 (DIG)免疫組化 熒光素 熒光免疫組化 (FISH) 原位探測基因表達(dá) ? Gene expressing guiding development ? When and where particular genes are active ? Intact embryos or sections of embryos In situ hybrid: probesradi
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