【正文】 多價診斷血清 ：用含有兩種（型）的菌體免疫動物后所獲得的血清。如兩者呈均勻混濁，無凝固則為陰性。試驗方法（ 1）卵黃平板法： A法： 將待檢菌培養(yǎng)物劃線接種或點種于卵黃瓊脂平板上， 36177。試驗方法?平板法?試管法平板法 將培養(yǎng)物接種于血平板培養(yǎng)基上，36177。試驗方法 取待檢菌新鮮純培養(yǎng)物，接種于丙二酸鈉培養(yǎng)基上，于 36177。1 ℃培養(yǎng) 18~24h后，加入氯化鐵溶液 4~5滴，轉動試管，使試劑與菌苔表面充分接觸，立即觀察結果。靛基質試驗原理及照片 靛基質 +結果觀察與記錄呈現(xiàn)玫瑰紅色，為陽性反應，記 +無紅色者，為陰性反應，記 （二） 硫化氫（ H2S）試驗原理： 某些細菌可分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸或含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇鉛鹽或鐵鹽可生成黑色沉淀物 PbS或 FeS，以此鑒別細菌。MRVP試驗原理及照片VP結果觀察與記錄（ 1）呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈淡紅色為弱陽性，記 MR+；（ 2）呈橘黃色或黃色為陰性，記 MR，迄至發(fā)現(xiàn)陰性并培養(yǎng)至第 5天仍為陰性，即可判定結果?！? 培養(yǎng)1~3天，每天觀察結果。細菌典型生理生化鑒定技術鄭培君第一節(jié) 細菌的生化試驗一、概述? （一）、什么是生化試驗 ?? 指通過利用生物化學的方法來測定微生物的代謝產(chǎn)物、代謝方式和條件等來鑒別細菌的類別、屬種的試驗。結果觀察和記錄記錄：? 產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，陽性，以 “+”表示? 產(chǎn)酸產(chǎn)氣， 陽性，以 “⊕”表示? 不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，陰性，以 “”表示氣泡導管氣泡 氣泡陽性 陽性 陰性培養(yǎng)基變?yōu)辄S色 培養(yǎng)基未變色、無氣泡產(chǎn)生（二）葡萄糖氧化發(fā)酵（ O/F）試驗　 原理： 細菌對葡萄糖的分解，分為氧化型和發(fā)酵型。MR+ MR（五） 七葉苷水解試驗１、原理： 七葉苷被細菌分解后，生成葡萄糖和七葉素，七葉素與 Fe2+結合，生成黑色化合物，使培養(yǎng)基呈黑色，以此鑒別細菌。試驗方法： 挑取待檢菌，用穿刺接種法接種于三糖鐵培養(yǎng)上，于 36177。結果觀察與記錄? 試驗管立即出現(xiàn)綠色，為陽性，記 +? 無色為陰性，記 。1 ℃ 培養(yǎng)48h，觀察結果。1 ℃ 培養(yǎng) 24～ 48h，觀察結果。1 ℃ 培養(yǎng) 3～ 6h，觀察結果。有凝塊 均勻混濁血漿 生理鹽水血漿凝固酶試驗陽性反應陰性反應不凝固 少量、零散凝固明顯的塊狀凝固 巨大塊 凝固 完全凝固，倒置不流動金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實驗 試管法的結果觀察與記錄? 空白對照管的血漿流動自如，陽性對照管血漿凝固，試驗管血漿凝固者為陽性；? 均無凝固則為陰性。單價診斷血清 ：只含有一種（型）特異性抗體的血清。表面抗原血清 ：用含有表面抗原的菌體免疫動物后所獲得的血清。試驗方法（ 1）玻片法： 取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔（人）血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合， 5 min內 ,如血漿內出現(xiàn)團塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁，則為陽性 。結果觀察與記錄? 如凝塊全部溶化 ,為陽性 +，? 凝塊 24 h仍不溶化 ,為陰性 （三）卵磷脂酶試驗原理： 某些微生物能產(chǎn)生卵磷脂酶，在鈣離子存在時，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸膽堿，在卵黃瓊脂平板上菌落周圍形成不透明的乳濁環(huán)或混濁白環(huán)，或使血清、卵黃液變混濁，以此鑒別細菌。 六、毒性酶類試驗F溶血試驗F鏈激酶試驗F卵磷脂酶試驗F血漿凝固酶試驗（一） 溶血試驗原理： 某些細菌在代謝過程中能產(chǎn)生溶血素，可使人或動物的紅細胞發(fā)生溶解，不同的細菌有不同的溶血反應，借此可鑒別細菌。結果觀察與記錄? 斜面有菌苔生長，培養(yǎng)基斜面變?yōu)樗{色或深藍色，為陽性，記 +；? 無菌苔生長，培養(yǎng)基斜面仍為綠色者，為陰性，記 檸檬酸鹽試驗原理及斜面照片 陽性 +（二） 丙二酸鹽利用試驗 : 某些細菌可以利用培養(yǎng)基中的丙二酸鹽作為唯一碳源 ,丙二酸鹽被分解成碳酸鈉 ,使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性 ,培養(yǎng)基由草綠色變成藍色，為陽性，以此鑒別細菌。試驗方法? 從待檢菌瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，接種于苯丙氨酸培養(yǎng)基上，在 36177。 或沿試管壁緩慢加入歐 波試劑約，兩液接觸處呈現(xiàn)玫瑰紅色者，為陽性反應，無紅色者為陰性反應。1 ℃ 或 30 ℃（以 30 ℃ 較好）培養(yǎng) 3~5天，從第 48h起，每日取培養(yǎng)液 1mL，加入甲基紅指示劑 1~2滴，立即觀察結果。置 36177。（二）檢驗細菌的生化試驗范圍糖（醇）類代謝試驗氨基酸和蛋白質代謝試驗有機酸鹽和銨鹽的利用試驗呼吸酶類試驗毒性酶類試驗（三）生化試驗的方法? 在培養(yǎng)物中加入某種底物與指示劑 ,經(jīng)接種、培養(yǎng)后 ,觀察培養(yǎng)基的 pH值變化。 氧化型細菌 在有氧的條件下才能分解葡萄糖，無氧的條件下不能分解葡萄糖；發(fā)酵型細菌 在有氧無氧條件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的細菌稱為產(chǎn)堿型。試驗方法 將待試純培養(yǎng)物少許，接種于七葉苷培養(yǎng)基，于 36177。1℃ 培養(yǎng) 24~48h，觀察結果。加氯化鐵試劑出現(xiàn)綠色 +（六） 明膠液化