【正文】 多價診斷血清 ：用含有兩種（型）的菌體免疫動物后所獲得的血清。如兩者呈均勻混濁，無凝固則為陰性。試驗(yàn)方法（ 1）卵黃平板法： A法： 將待檢菌培養(yǎng)物劃線接種或點(diǎn)種于卵黃瓊脂平板上， 36177。試驗(yàn)方法?平板法?試管法平板法 將培養(yǎng)物接種于血平板培養(yǎng)基上，36177。試驗(yàn)方法 取待檢菌新鮮純培養(yǎng)物，接種于丙二酸鈉培養(yǎng)基上，于 36177。1 ℃培養(yǎng) 18~24h后，加入氯化鐵溶液 4~5滴，轉(zhuǎn)動試管，使試劑與菌苔表面充分接觸，立即觀察結(jié)果。靛基質(zhì)試驗(yàn)原理及照片 靛基質(zhì) +結(jié)果觀察與記錄呈現(xiàn)玫瑰紅色，為陽性反應(yīng)，記 +無紅色者，為陰性反應(yīng)，記 （二） 硫化氫（ H2S）試驗(yàn)原理： 某些細(xì)菌可分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸或含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇鉛鹽或鐵鹽可生成黑色沉淀物 PbS或 FeS，以此鑒別細(xì)菌。MRVP試驗(yàn)原理及照片VP結(jié)果觀察與記錄（ 1）呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈淡紅色為弱陽性，記 MR+；（ 2）呈橘黃色或黃色為陰性，記 MR，迄至發(fā)現(xiàn)陰性并培養(yǎng)至第 5天仍為陰性，即可判定結(jié)果?！? 培養(yǎng)1~3天，每天觀察結(jié)果。細(xì)菌典型生理生化鑒定技術(shù)鄭培君第一節(jié) 細(xì)菌的生化試驗(yàn)一、概述? （一）、什么是生化試驗(yàn) ?? 指通過利用生物化學(xué)的方法來測定微生物的代謝產(chǎn)物、代謝方式和條件等來鑒別細(xì)菌的類別、屬種的試驗(yàn)。結(jié)果觀察和記錄記錄：? 產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，陽性，以 “+”表示? 產(chǎn)酸產(chǎn)氣， 陽性，以 “⊕”表示? 不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，陰性，以 “”表示氣泡導(dǎo)管氣泡 氣泡陽性 陽性 陰性培養(yǎng)基變?yōu)辄S色 培養(yǎng)基未變色、無氣泡產(chǎn)生（二）葡萄糖氧化發(fā)酵（ O/F）試驗(yàn)　 原理： 細(xì)菌對葡萄糖的分解，分為氧化型和發(fā)酵型。MR+ MR（五） 七葉苷水解試驗(yàn)１、原理： 七葉苷被細(xì)菌分解后，生成葡萄糖和七葉素，七葉素與 Fe2+結(jié)合，生成黑色化合物，使培養(yǎng)基呈黑色，以此鑒別細(xì)菌。試驗(yàn)方法： 挑取待檢菌，用穿刺接種法接種于三糖鐵培養(yǎng)上，于 36177。結(jié)果觀察與記錄? 試驗(yàn)管立即出現(xiàn)綠色，為陽性，記 +? 無色為陰性，記 。1 ℃ 培養(yǎng)48h，觀察結(jié)果。1 ℃ 培養(yǎng) 24～ 48h，觀察結(jié)果。1 ℃ 培養(yǎng) 3～ 6h，觀察結(jié)果。有凝塊 均勻混濁血漿 生理鹽水血漿凝固酶試驗(yàn)陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)不凝固 少量、零散凝固明顯的塊狀凝固 巨大塊 凝固 完全凝固，倒置不流動金黃色葡萄球菌血漿凝固酶實(shí)驗(yàn) 試管法的結(jié)果觀察與記錄? 空白對照管的血漿流動自如，陽性對照管血漿凝固，試驗(yàn)管血漿凝固者為陽性；? 均無凝固則為陰性。單價診斷血清 ：只含有一種（型）特異性抗體的血清。表面抗原血清 ：用含有表面抗原的菌體免疫動物后所獲得的血清。試驗(yàn)方法（ 1）玻片法： 取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔（人）血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合， 5 min內(nèi) ,如血漿內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁，則為陽性 。結(jié)果觀察與記錄? 如凝塊全部溶化 ,為陽性 +，? 凝塊 24 h仍不溶化 ,為陰性 （三）卵磷脂酶試驗(yàn)原理： 某些微生物能產(chǎn)生卵磷脂酶，在鈣離子存在時，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸膽堿，在卵黃瓊脂平板上菌落周圍形成不透明的乳濁環(huán)或混濁白環(huán)，或使血清、卵黃液變混濁，以此鑒別細(xì)菌。 六、毒性酶類試驗(yàn)F溶血試驗(yàn)F鏈激酶試驗(yàn)F卵磷脂酶試驗(yàn)F血漿凝固酶試驗(yàn)（一） 溶血試驗(yàn)原理： 某些細(xì)菌在代謝過程中能產(chǎn)生溶血素，可使人或動物的紅細(xì)胞發(fā)生溶解，不同的細(xì)菌有不同的溶血反應(yīng)，借此可鑒別細(xì)菌。結(jié)果觀察與記錄? 斜面有菌苔生長，培養(yǎng)基斜面變?yōu)樗{(lán)色或深藍(lán)色，為陽性，記 +；? 無菌苔生長，培養(yǎng)基斜面仍為綠色者，為陰性，記 檸檬酸鹽試驗(yàn)原理及斜面照片 陽性 +（二） 丙二酸鹽利用試驗(yàn) : 某些細(xì)菌可以利用培養(yǎng)基中的丙二酸鹽作為唯一碳源 ,丙二酸鹽被分解成碳酸鈉 ,使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性 ,培養(yǎng)基由草綠色變成藍(lán)色，為陽性，以此鑒別細(xì)菌。試驗(yàn)方法? 從待檢菌瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，接種于苯丙氨酸培養(yǎng)基上，在 36177。 或沿試管壁緩慢加入歐 波試劑約，兩液接觸處呈現(xiàn)玫瑰紅色者，為陽性反應(yīng)，無紅色者為陰性反應(yīng)。1 ℃ 或 30 ℃（以 30 ℃ 較好）培養(yǎng) 3~5天，從第 48h起，每日取培養(yǎng)液 1mL，加入甲基紅指示劑 1~2滴，立即觀察結(jié)果。置 36177。（二）檢驗(yàn)細(xì)菌的生化試驗(yàn)范圍糖（醇）類代謝試驗(yàn)氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)有機(jī)酸鹽和銨鹽的利用試驗(yàn)呼吸酶類試驗(yàn)毒性酶類試驗(yàn)（三）生化試驗(yàn)的方法? 在培養(yǎng)物中加入某種底物與指示劑 ,經(jīng)接種、培養(yǎng)后 ,觀察培養(yǎng)基的 pH值變化。 氧化型細(xì)菌 在有氧的條件下才能分解葡萄糖，無氧的條件下不能分解葡萄糖；發(fā)酵型細(xì)菌 在有氧無氧條件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的細(xì)菌稱為產(chǎn)堿型。試驗(yàn)方法 將待試純培養(yǎng)物少許，接種于七葉苷培養(yǎng)基，于 36177。1℃ 培養(yǎng) 24~48h，觀察結(jié)果。加氯化鐵試劑出現(xiàn)綠色 +（六） 明膠液化