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正文內(nèi)容

固定化酶和固定化細(xì)胞(專(zhuān)業(yè)版)

  

【正文】 這種反應(yīng)器可用于難溶或者不溶性底物的轉(zhuǎn)化反應(yīng)。 連續(xù)流動(dòng)攪拌罐反應(yīng)器, CSTR CSTR Company Logo ? 優(yōu)點(diǎn):反應(yīng)液混合良好,各部位的成分相同,并與流出液的組成也一致。 Company Logo 固定化活細(xì)胞 ?將 活細(xì)胞 限制或定位于特定空間位置的方法。 ?常用的載體有 多糖類(lèi)的芳族氨基衍生物 、氨基酸的共聚體和聚丙烯酰胺衍生物等。離子吸附法具有操作簡(jiǎn)便、條件溫和、酶活力不易喪失等優(yōu)點(diǎn)。酶的固定化既不影響酶的原有構(gòu)象,又能使固定化酶能有效回收貯藏,利于反復(fù)使用。 ?( 3)固定化應(yīng)有利于自動(dòng)化、機(jī)械化操作。此外,吸附過(guò)程同時(shí)可以純化酶。 Company Logo ?( 2)疊氮法 即載體活化生成疊氮化合物,再與酶分子上的相應(yīng)基團(tuán)偶聯(lián)成固定化酶。 Company Logo ?無(wú)需進(jìn)行酶的分離和純化,減少酶的活力損失,同時(shí)大大降低了成本; ?保持了酶的原始狀態(tài),比固定化酶的穩(wěn)定性更高,對(duì)污染的抵抗力更強(qiáng); ?細(xì)胞本身含多酶系統(tǒng),可催化一系列反應(yīng),且不需添加輔助因子; ?細(xì)胞生長(zhǎng)停滯時(shí)間短,細(xì)胞多,反應(yīng)快等。 CSTR的開(kāi)放結(jié)構(gòu)使得調(diào)換固定化酶比較容易,而且有利于控制溫度和調(diào)節(jié) pH,還能夠處理膠態(tài)或不溶性底物 , 受底物抑制的固定化酶采用CSTR有較高的轉(zhuǎn)化率 。 Company Logo 酶反應(yīng)器的選擇依據(jù) ?根據(jù)固定化酶的形狀: ? 溶液酶: BSTR ? 顆粒狀和片狀: CSTR、 PBR ? 膜狀和纖維狀: PBR ? 容易變形、易粘結(jié)、顆粒細(xì)?。?FBR ?根據(jù)底物的物理性質(zhì) ? 溶解性和濁液性底物:任何類(lèi)型 ? 顆粒狀和膠狀底物: CSTR、 FBR、 RCR Company Logo ?根據(jù)酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特性 ? 產(chǎn)物對(duì)酶活性抑制: PBR ? 底物對(duì)酶活性抑制: CSTR ?根據(jù)外界環(huán)境對(duì)酶的穩(wěn)定性的影響 ? 改良的 CSTR ?根據(jù)操作要求及反應(yīng)器費(fèi)用 ? CSTR Company LOGO 固定化細(xì)胞法生產(chǎn) 6氨基青霉烷酸 Company Logo 基本原理 ?青霉素 G經(jīng)青霉素?;缸饔?,水解除去側(cè)鏈后的產(chǎn)物稱(chēng)為 6氨基青霉烷酸,也稱(chēng)無(wú)側(cè)鏈青霉素。 Company Logo 循環(huán)式反應(yīng)器, RCR 外循環(huán)反應(yīng)器 內(nèi)循環(huán)反應(yīng)器 循環(huán)操作仍能為底物與酶提供足夠的接觸機(jī)會(huì),以達(dá)到所需的轉(zhuǎn)化率。反應(yīng)桶內(nèi)裝有攪拌器,使反應(yīng)組分與 固定化酶顆粒 混合均一,出口處有過(guò)濾膜,可使不斷補(bǔ)充新鮮底物與反應(yīng)液流量維持動(dòng)態(tài)平衡。是將細(xì)胞在適當(dāng)?shù)臏囟认绿幚硎辜?xì)胞膜蛋白變性,但不使酶變性而使酶固定于細(xì)胞內(nèi)的方法。 Company Logo 載體活化的主要反應(yīng) ?重氮法 ?疊氮法 ?溴化氰法 ?芳香烴化法 Company Logo ?( 1)重氮法 重氮法是將酶蛋白與水不溶性載體的重氮基團(tuán)通過(guò)共價(jià)鍵相連接而固定化的方法,是共價(jià)鍵法中使用最多的一種。 ?其吸附容量一般大于物理吸附劑。 ?( 2)酶與載體必須有 一定 的結(jié)合程度。這要求用于固定化的載體必須有一定的 機(jī)械強(qiáng)度 ,才能使之在制備過(guò)程中不易破壞或受損。 Company Logo 包埋法 ?包埋法( entrapment)是將酶包埋在高聚物的細(xì)微凝膠網(wǎng)格中或高分子半透膜內(nèi)的固定化方法。 ?含有羥基、羧基、羧甲基等基團(tuán)的載體都可用此法活化。 固定化活細(xì)胞的
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