【正文】 綜上所述，油茶從種子到粕餅都有很好的利用價(jià)值，所以充分開發(fā)、 利用 油茶 將是未來(lái)的研究的另一 主題 。 層析法是比較經(jīng)典的分離方法，由于皂 甙 極性較大，采用分配柱層析來(lái)分離的效果要比吸附層析好。雷治國(guó)等通過(guò)18 條引物對(duì) 90個(gè)油茶優(yōu)良無(wú)性系進(jìn)行 RAPD標(biāo)記，得到 569條多態(tài)性譜帶，其多態(tài)比率達(dá)到％ ，還找到了 32條特異性譜帶。 （ 1）油茶種子質(zhì)量的好壞，主要取決于品種的優(yōu) 劣 ，優(yōu)良品種的產(chǎn)量高，種子質(zhì)量好， 所以改良油茶品種也是解決油茶開發(fā)的一個(gè)問(wèn)題。 表 皂素的提取量 （ g） 試驗(yàn)號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 皂素產(chǎn)量 輔助 提取油茶 皂甙的正交試驗(yàn)結(jié)果分析見表 表 正交試驗(yàn)結(jié)果的直觀分析 列 號(hào) 影 響 因 素 皂素產(chǎn)量（ g） A B C D 試 驗(yàn) 號(hào) 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 2 6 2 3 1 1 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文 11 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 T1 T= T2 T3 ?X1 ?X2 ?X3 R 從表 ，溫度和超聲波的功率的極差分居第一、二位，是影響皂素提取的關(guān)鍵因素，其次是料液比， 超聲波提取 時(shí)間的影響程度最小。 本試驗(yàn) 是用水進(jìn)行提取皂素的，而且乙醇沉淀法比較安全，所以 采用的是乙醇沉淀法和陽(yáng)離子型聚丙烯酰胺絮凝劑法相結(jié)合來(lái)進(jìn)行純化的。 ： 在粗皂甙的水溶液中，加入新煅制的氧化鎂粉，然后向蒸發(fā)至干的粉末中加入乙醇，使吸附在氧化鎂上的皂甙溶解出來(lái)，放冷后，皂甙析出，得到純品，得率大約為粗皂甙的 50%，且純度不高。最近研究還表明，油茶 皂甙 具有抗突變、抗放射輻射和抗癌作用 [1920]，還可以影響釘螺生殖腺及肝臟 [21]，可以殺滅血吸蟲卵，體外有殺精子等作用 [22]。茶 皂甙 有抑制霉菌生長(zhǎng)的作用，但對(duì)革蘭氏陰、陽(yáng)菌的生長(zhǎng)無(wú)影響。本試驗(yàn)從改進(jìn) 皂甙 提取方法入手，利用超聲波的破碎原理，改變以前費(fèi)時(shí)、費(fèi)料的提取方法，增加提取方法在工業(yè)上應(yīng)用的可能性，將油茶的資源盡可能的開發(fā)出來(lái)。要求水分充足，年降水量一般在 1000mm以上，但花期連續(xù)降雨，影響授粉。 此試驗(yàn)結(jié)果降低了提取溫度、減少了提取時(shí)間和試劑的耗費(fèi) ，初步解決了皂甙大規(guī)模生產(chǎn)的問(wèn)題。 鑒于油茶資源的巨大浪費(fèi)， 本文從油 茶餅粕中茶皂素的提取純化著手， 旨在實(shí)現(xiàn)茶皂素 提取 方法的改進(jìn)和新方法的探索 。油茶喜溫暖，怕寒冷，要求年平均氣溫 16～ 18℃ ，花期平均氣溫為 12～ 13℃ 。 油茶籽餅中的氨基酸含量如 表 。溶血作用也是茶籽 皂甙 的毒性，據(jù)推測(cè)，可能是由于它與血液中的大分子醇 (如膽固醇等 )結(jié)合成復(fù)鹽所致。因此，以油茶 皂甙 為主要原料研制的植物殺蟲劑對(duì)人畜無(wú)害，對(duì)植物安全，具有推廣前景 [16]。 正丁醇萃取法： 將粗皂甙用少量水溶解， 水 溶液用正丁醇萃取，即可得到正丁醇層，濃縮至干 ，得到棕紅北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文 7 色粘稠固體。 ： 此技術(shù)是在水提技術(shù)的基礎(chǔ)上，使用超濾膜分離技術(shù)，通過(guò)水溶液中物質(zhì)分子量的差別而使糖類、鹽類、色素等雜質(zhì)被分離除去，從而達(dá)到濃縮、精制及脫色的目的 。 仁 率的測(cè)定 未脫殼的油茶籽 G=4152g，脫殼后的油茶籽重 G1=2930g 油茶籽的出 仁 率 = G1/G=2930/4152*100%=%。 （ 2）在進(jìn)行壓榨之前，應(yīng)控制種子的含水量，含有過(guò)多的水會(huì)對(duì)壓榨有一定的影響，從而給后面的試驗(yàn)帶來(lái)不必要的 麻煩，也可能會(huì)對(duì)皂素的產(chǎn)量有影響。首先由中南林學(xué)院譚曉風(fēng)等建立了改良 CTAB法提取山茶屬植物總 DNA的技術(shù)方法，張自俊等在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改良為同時(shí)提取 DNA與 RNA方法，改進(jìn)了油茶 RAPD反應(yīng)體系。 目前，低壓、中壓、高壓液相色譜以及反相高壓液相色譜 (RPHPLC)己經(jīng)成為分離皂 甙 的常用方法 。研究者對(duì)油茶枯餅進(jìn)行了固態(tài)發(fā)酵，以黑曲霉、毛霉、產(chǎn)朊假絲酵母及黑曲霉和產(chǎn)朊假絲酵母等四個(gè)菌種及菌種組合在油茶餅粕 對(duì)油茶餅粕培養(yǎng)基的蛋白質(zhì)最大提高率在 66． 7％ 99． 7％ ； 紫木耳、毛霉與產(chǎn)朊假絲酵母二次發(fā)酵產(chǎn)品的粗蛋白質(zhì)含量接近 20％ ，粗纖維含量下 降至 18％以下。 ，超聲波的輔助作用凸現(xiàn)出來(lái)。制備薄層層析也己用于皂 甙 分離，取得了較好的效果。 油茶功能表達(dá)檢測(cè)和轉(zhuǎn)基因育種 [30] 油茶育種的目標(biāo)是提高產(chǎn)油量，為了從更深層次探索油茶油脂轉(zhuǎn)化過(guò)程中其功能基因的作用情況，湖南省林科院的陳永忠博士利用基因芯片技術(shù)對(duì)油茶果實(shí)的功能基因進(jìn)行檢測(cè)，旨在繪制各功能基因在油茶果實(shí)油脂轉(zhuǎn)化過(guò)程中的表達(dá)譜，為進(jìn)一步深入開展高產(chǎn)油量、高含油量和油茶優(yōu)良的油茶新品種的定向培育作前期探索研究。傳統(tǒng)上油茶多采用實(shí)生繁殖。 (3)考慮 A、 D因素， B作為 A*D的 互作 SSe=SSTSSASSBSSD= dfT=91=8 dfA=dfB=dfD=31=2 dfe=dfTdfAdfBdfD=8222=2 表 溫度和 功率 兩因素正交方差分析 影響因素 df SS x2 F 溫度 A 2 功率 D 2 溫度 *功率 B 2 試驗(yàn)誤差 2 總誤差 8 由表 ，溫度的 F值最高，溫度與功率的互作作用也不是很明顯。 北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文 9 （ 3） 將脫殼的油茶籽放入液壓榨油機(jī)中， 60MPa 壓榨至恒重。 ： 硅膠柱采用干法上柱，干法上樣 。 由上可知，油茶 皂甙 是一種非離 子型的表面活性劑，其來(lái)源于天然，刺激性小，去污能力強(qiáng)，本身又具有抑菌的作用，因此，作為人體的洗滌用品和高級(jí)衣料的洗滌用品很合適，這與人們生活水平的提高，在吃、穿、用諸方面返樸歸真，回歸大自然的消費(fèi)心理和消費(fèi)要求又是十分吻合的。 油茶 皂甙 的用途 油茶 皂甙 是一種天然非離子表面活性劑，具有良好的乳化、分散、發(fā)泡、膠粘、潤(rùn)濕等作用，同時(shí)還具有消炎、怯痰、抗?jié)B透、鎮(zhèn)痛、健胃等藥理，廣泛應(yīng)用于毛織、針織、日用化工、醫(yī)藥、農(nóng)藥方面 [11]，具體性質(zhì)及應(yīng)用如下 : 用作洗滌劑 油茶 皂甙 是天然活性劑，易酶解為無(wú)毒化合物，不會(huì)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生污染。吸濕性強(qiáng)， 對(duì)甲基紅 顯酸性，難溶于無(wú)水甲醇、乙醇、不溶于乙醚、丙酮、苯、石油醚等有機(jī)溶劑，易溶于含水甲醇，含水乙醇以及冰醋酸、醋酐、吡啶等。 據(jù)統(tǒng)計(jì)，全國(guó)現(xiàn)有油茶林面積為 400 萬(wàn) hm2 ，分布于南方 16個(gè)省 (區(qū) )1100多個(gè)縣，年產(chǎn)茶油 億 kg，占我國(guó)木本食用油料樹種栽培面積的 80%以上。茶餅既是農(nóng)藥，又是肥料，可提高農(nóng)田蓄水能力和防治稻田害蟲 ； 果皮是提制栲膠的原料。茶籽蛋白質(zhì)含有 18種氨基酸成分， 其中 8種是人體必需的氨基酸?；斏蛞干瑑?性花，白色。我國(guó)在茶 皂甙 (包括油茶 皂甙 )表面活性的理論體系的建立并指導(dǎo)應(yīng)用于實(shí)踐 是一大創(chuàng)舉 [5]。據(jù)報(bào)道，以茶籽 皂甙軟化石蠟，其乳化力強(qiáng)， 分散性良好，乳液顆粒度在 m左右，穩(wěn)定性好，能在室溫下長(zhǎng)時(shí)間存放不分層，在 40℃ 恒溫條件下存 放 24h以上 (10％濃度 )，其表面結(jié)皮厚度為 ，下層析水度為 ％ ，且乳液的穩(wěn)定性和乳化效果幾乎不受水質(zhì)硬度影響 [9]。目前市面上己有油茶皂 甙 、新 型纖微板防水材料等 [14]。顯然，采用合適的純化方法用于生產(chǎn)意義重大。第一類沉淀劑主要有：乙醇，硫酸鋁鉀，聚丙烯乙酰胺 (PAM)，聚三氯化鐵 (PAC)以及硫酸鋁鉀 (活性三氯化鐵 )+可溶性甲殼素等；第二類沉淀劑主要有鉛鹽，丙酮，明礬，乙醚等。 （ 5） 濃縮液冷卻后加入陽(yáng)離子型聚丙烯酰胺絮凝劑，攪拌均勻，靜置 2h，得粘稠液體。 ，因?yàn)殛?yáng)離子型聚丙烯酰胺的分子中含有大量正電荷，能吸附雜質(zhì)微粒，起到電性中和作用， 而它的長(zhǎng)碳鏈又可以起到架橋作用，所以用它作絮凝劑可以形成大而連續(xù)的絮團(tuán)，加速沉降速度，縮短過(guò)濾時(shí)間，提高溶液澄清度。 1981年與 1982年，湖南省邵陽(yáng)地區(qū)林科所隆振雄和盧天玲 先后分別通過(guò)油茶未成熟的子葉幼胚離體培養(yǎng)獲得了完整的再生小植株，隨后油茶組織培養(yǎng)基本停滯。按照這種方法可以得到 較好 的茶油，還能夠提高皂素的提取率， 所以在以后的研究中也該對(duì)茶油的提取方法進(jìn)行改進(jìn)。 皂甙 的提取技術(shù) 正在 逐步完善，即將進(jìn)入工業(yè)化生產(chǎn)。 在走出學(xué)校大門之前，我要向你們深深的鞠一躬，道一聲謝謝。 因此， 在以后的實(shí)驗(yàn)中可以利用層析法的方法進(jìn)行分離，可以使實(shí)驗(yàn)的提取率、準(zhǔn)確度提北京林業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文 17 高，這是試驗(yàn)的最終目的。 （ 2） 針對(duì)于油茶種子中的含 水 量的問(wèn)題，可以從采收、晾曬和加工三方面考慮。而進(jìn)入生物時(shí)代后，育種就 應(yīng) 從組織培養(yǎng)、分子標(biāo)記、基因表達(dá)等方面進(jìn)行 研究 [2528]。 D2B1 的平均數(shù) = D2B2的平均數(shù) =(+)/2= 因此，時(shí)間 B還是 B2水平較好 ；溫度 A 取 A1水平較好；料液比水平差異不顯著，取哪個(gè)都可以，所以最佳組合 方案 是： A1B2C1D2或 A1B2C2D2 或 A1B2C3D2， 符合 直觀分析中得出 結(jié)論，既皂素提取的優(yōu)化方案是 A B C D2的組合 。 （ 2） 取 9 份 浸提過(guò)的油茶餅，每份 50g，然后按溫度、時(shí)間、超聲波功率、料液比四個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn) 。 ： 將粗皂甙利用離子交換樹脂可去除濾液中的可溶性 鹽類。該方