【正文】 lume of vehicle (DMSO). Cells were observed by phase contrast microscopy on three sequential days after addition of the pounds, without changing the medium or replenishing the pounds. Methuosis is characterized by extensive accumulation of phaselucent cytoplasmic vacuoles, with eventual cell rounding and detachment from the substratum as viability Figure 4. Comparison of the abilities of MOMIPP and MIPP to inhibit survival of U251 GBM cells in colonyforming assays. (A) Cells were plated for colonyforming assays as described in the Experimental Section. One day after plating the cells, MOMIPP (●) or MIPP (■) was added to the medium at the indicated concentrations, and cells were maintained in the presence of the pounds for 48 h. Thereafter, the pounds were removed, and colonies 50 cells were counted after 2 weeks. Each point represents the mean (177。在用MOMIPP處理的組中細(xì)胞數(shù)量的減少以大規(guī)模早期細(xì)胞空泡的出現(xiàn)和底層非活性細(xì)胞的損傷的形式表現(xiàn)。 (2) 5 N NaOH, 99%. Compound 26: 4acetylpyridine, piperidine, MeOH, reflux, 34%. Compound 27: 4acetylpyridine, piperidine, MeOH, reflux, 21%.化合物19（MOMIPP）與化合物2（MIPP）生物活性比較上述研究確定化合物19是最有力誘導(dǎo)methuosis的化合物。相關(guān)反應(yīng)在溫和條件基礎(chǔ)下（碳酸氫鈉）生產(chǎn)了酯24，而在5 N的氫氧化鈉條件下產(chǎn)生酸25。我們?cè)诓煌琾Ka值的多個(gè)基地進(jìn)行了篩選，從K2CO3到Cs2CO3，以及乙胺，tetramethylguanidine，1,8 二氮雜雙環(huán)[]螺7烯（DBU），氫化鈉。此外，甲基吲哚氮的化合物13與NaH/CH3I在二甲基甲酰胺（DMF）（計(jì)劃1D）制造20時(shí)產(chǎn)生了一種化合物，它能誘發(fā)一些胞質(zhì)空泡化，但只有溫和影響細(xì)胞活力（見表1）。如表1所示，盡管他們?cè)诙唐诘脑鲩L/可行性實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞毒性不一致。元和正射類似物10和11，以及苯乙酮類似物9，均在誘導(dǎo)methuosis方面與MIPP相比相對(duì)無效。因此，一種類似物的初始構(gòu)成被合成，以用來研究調(diào)查吡啶氮的位置對(duì)生物活性的影響?；衔?被分配的縮寫是MIPP，即3 （2 甲基1H吲哚3 基）1 （4 吡啶基）2丙烯1。查耳酮由一個(gè)1,3 二苯基2 丙烯1框架組成，這種框架是黃酮類天然產(chǎn)物的前體組成。Methuosis本質(zhì)特點(diǎn)在于GBM細(xì)胞，它是被激活的Ras和Rac GTP酶異位表達(dá)而觸發(fā)這種形式的細(xì)胞死亡的場所。（3，4）此外，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞通過提高他們修復(fù)DNA損傷的能力而獲得對(duì)烷化劑的抗藥性。在此，我們描述了直接相關(guān)化合物庫的合成及構(gòu)效關(guān)系，提供了深入了解兩個(gè)芳環(huán)系統(tǒng)的貢獻(xiàn)，并強(qiáng)調(diào)了一個(gè)強(qiáng)有力的衍生物，3 （5 甲氧基2 甲基1H吲哚3 基）1 （4 吡啶基）2丙烯1（即，MOMIPP）在微摩爾濃度這樣低的濃度下可誘導(dǎo)methuosis。因此，它可能可以作為一種能夠在癌癥中通過methuosis形式來促進(jìn)細(xì)胞凋零的藥物原型，這種原理與傳統(tǒng)細(xì)胞死亡（如細(xì)胞凋亡）的機(jī)理不同。（6）后者當(dāng)膜皺褶（偽足）附上許多口袋狀細(xì)胞外液，并內(nèi)化時(shí)形成。在此，我們報(bào)告了相關(guān)化合物庫合成及構(gòu)效關(guān)系（SAR）的研究從而導(dǎo)出（1）定義的主要特點(diǎn)，為誘導(dǎo)methuosis活動(dòng)，（2）確定改進(jìn)生物活性的衍生物以及發(fā)展一個(gè)可能適合在未來目標(biāo)識(shí)別工作中用作光親探測器的疊狀類似物做準(zhǔn)備。（1214 ）這促使我們懷疑化合物1可能代表了一種新型的查耳酮，它可以通過誘導(dǎo)methuosis殺死癌細(xì)胞。（ 10）Figure 1. Structures of pounds 1 and 2, initially found to be active inducers of methuosis(10) as pared with mercially available analogues 3–8, which failed to induce the hallmarks of methuosis in culture U251 GBM cells.因?yàn)樾枰狹IPP的濃度≥10μM才能有效誘導(dǎo)methuosis，所以我們開始組裝MIPP相關(guān)化合物庫，并與經(jīng)效能提高的確定的目標(biāo)類似物進(jìn)行初步特區(qū)的比較。這些化合物按照三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)與濃度為10μM的MIPP進(jìn)行了活性比較：（1）在24和48 h借助相差顯微鏡進(jìn)行活細(xì)胞的形態(tài)空泡評(píng)估。C, 61 and 95% for 15 and 21, respectively. (C) POCl3, DMF, 0 176。為了確認(rèn)吡啶氮的位置仍然是5 甲氧基取代的化合物活性的關(guān)鍵，類似物16和17被分析。在生理?xiàng)l件下使用MIPP的局限性之一是其在水溶液中始終有一定溶解度。單被烷基化產(chǎn)品的產(chǎn)量在5吲哚的地位是微不足道的。Scheme 2. Analogues with 5′ Modifications of the Indole Ring Generated by Functionalizing the Indole Prior to Introduction of the Pyridine MoietyaaConditions and reagents: Compound 22: BBr3, CH2Cl2, ?78 176。圖2A顯示的是藥物對(duì)細(xì)胞活力的影響的劑量反應(yīng)曲線。當(dāng)用集落形成實(shí)驗(yàn)來評(píng)估細(xì)胞增殖能力和長期活力時(shí)，MOMIPP和MIPP的區(qū)別就表現(xiàn)非常明顯（圖4）。例如，我們觀察到類似情況，MOMIPP在親代和抗阿霉素的MCF7乳腺癌細(xì)胞（圖5C，D）引起空泡并導(dǎo)致其集落形成能力的降低。這些觀察表明，雖然MOMIPP會(huì)對(duì)正常細(xì)胞產(chǎn)生毒性，但與癌癥細(xì)胞系，如U251和MCF7相比，正常細(xì)胞對(duì)這類化合物相對(duì)不太敏感。幾個(gè)關(guān)于通過親電化合物進(jìn)行特定蛋白質(zhì)修改的例子已有報(bào)道（見討論）。二苯甲酮類似物（化合物，苯甲酰MIPP30）用兩個(gè)步驟制備，首先從2 甲基吲哚的Vilsmeier–Haack中間體（圖3A）酰化開始。 (2) AlCl3, benzoyl chloride, 0 176。C, 53%. Compound 40: POCl3, DMF, 0 176。按照相同的序列完成以上所述的反應(yīng)步驟就得到41——6疊氮MOMIPP。在為SAR研究服務(wù)的化合物庫形成過程中，我們進(jìn)行了各種indole3carboxaldehydes和芳香酮在哌啶催化下的ClaisenSchmidt縮合反應(yīng)，從而能有效提供吲哚查耳酮。相反，用OH（化合物21），P甲基芐氧基酯（化合物26）和P羧基芐氧基（化合物27）修改5位都造成活性的重大損失。因此，MOMIPP不大可能通過蛋白質(zhì)的親電改造誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。methuosis誘導(dǎo)劑的嚴(yán)格的結(jié)構(gòu)特異性和吲哚和吡啶基團(tuán)特定取代模式的依賴性，區(qū)別了以前報(bào)道為抗有絲分裂劑的查耳酮類化合物和MOMIPP。一個(gè)可能的例外在一份報(bào)告中被指出，報(bào)告稱一個(gè)被稱為“C2的”查爾酮的衍生物可誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞以非凋亡的死亡機(jī)制死亡，其中涉及自噬泡的積累。MOMIPP的核心支架是偽芳酮的（由于一方包含雙乙烯基取代酰胺，而另一個(gè)包含一個(gè)4 吡啶），并可能會(huì)表現(xiàn)出與二苯甲酮類似的光激發(fā)化學(xué)性質(zhì)。初步研究表明，MOMIPP誘發(fā)空泡的能力并不僅限于癌細(xì)胞（圖5E