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免疫組織化學技術(shù)介紹(更新版)

2025-02-19 03:57上一頁面

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【正文】 抗非特異性染色的原因常為組織標本固定不佳、抗體質(zhì)量問題或稀釋度不合理及操作方法不規(guī)范等體質(zhì)量問題或稀釋度不合理及操作方法不規(guī)范等。 ? (( 2)腫瘤細胞異常表達)腫瘤細胞異常表達 :: 可選用多種標記去證可選用多種標記去證實或排除,鑒別其真正組織來源或向某一組織細實或排除,鑒別其真正組織來源或向某一組織細胞分化。 五、非特異著色特征五、非特異著色特征 ? 以下情況可干擾免疫組化標記結(jié)果的觀察和判斷以下情況可干擾免疫組化標記結(jié)果的觀察和判斷:: (( 1)抗體交叉反應(yīng):)抗體交叉反應(yīng): 是由于該抗原決定簇同是由于該抗原決定簇同時存在于多種組織細胞,如時存在于多種組織細胞,如 GFAP可同時存在于可同時存在于星形膠質(zhì)細胞和唾液腺肌上皮。 ? 陽性顆粒主要位于腺癌腔緣的陽性顆粒主要位于腺癌腔緣的微絨毛處,沿腺管腔緣表面內(nèi)襯一薄層微絨毛處,沿腺管腔緣表面內(nèi)襯一薄層黃色顆粒,基底部多為陰性。陽性細胞膜與膜間相互緊靠,而胞核呈陰性細胞膜與膜間相互緊靠,而胞核呈陰性反應(yīng),免疫組化標記顯示網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。 ? 較常見。陽性細胞可多可少,排列不規(guī)則,無固定排列形式,陽性染可多可少,排列不規(guī)則,無固定排列形式,陽性染色深淺不一。甲狀腺腺癌中甲狀腺球蛋白常以該形式出現(xiàn)。? 抗原顆粒主要分布于腺癌細胞的微絨抗原顆粒主要分布于腺癌細胞的微絨毛,而胞漿和胞膜可以是陽性或陰性表達。大部分抗原均屬于此種類型,如細胞角蛋白、波形蛋白、結(jié)蛋均屬于此種類型,如細胞角蛋白、波形蛋白、結(jié)蛋白、神經(jīng)絲蛋白、肌紅蛋白、白、神經(jīng)絲蛋白、肌紅蛋白、 α1抗胰糜蛋白酶及前抗胰糜蛋白酶及前列腺特異性抗原(列腺特異性抗原( PSA)等。此類型常見于某些膜抗原,如上皮膜抗原(膜抗原( EMA)、白細胞共同抗原()、白細胞共同抗原(LCA)及)及 B細胞、細胞、 T細胞、粒細胞相關(guān)抗細胞、粒細胞相關(guān)抗原(原( GAA)和)和 Ki1等。而前者除考慮標本處理和方法學因素外,可能與細胞只有輕度異常表達,或某些細胞攝法學因素外,可能與細胞只有輕度異常表達,或某些細胞攝取了周圍組織抗原之故。 免疫組化標記的形態(tài)學特征免疫組化標記的形態(tài)學特征 ? 免疫組化標記具有形態(tài)學特點,若能熟免疫組化標記具有形態(tài)學特點,若能熟練掌握則有助于對免疫組化標記結(jié)果的練掌握則有助于對免疫組化標記結(jié)果的正確判斷,現(xiàn)擇要分述如下:正確判斷,現(xiàn)擇要分述如下: 一、陽性標記色度特征一、陽性標記色度特征 ? 免疫組化標記時細胞陽性著色程度取決于抗原含量、分布密免疫組化標記時細胞陽性著色程度取決于抗原含量、分布密度和標記方法及其敏感性。確定組織、細胞結(jié)構(gòu)的化學成份或化學性質(zhì)。根據(jù)陽密度越高,標記方法越敏感,陽性結(jié)果顯色則越強。在診斷中陽抗原在細胞中的定位和分布情況。此多見于增殖細胞核抗原不規(guī)則分布。前布形式,通常表現(xiàn)為彌漫性分布或局限性分布。其特點是陽性顆粒除靠近腔面陽性外,其余等。值得注意的是組胞膜和胞核同時表達。蛋白等均可表現(xiàn)為局灶性陽性。此型可見于上皮源性腫瘤、某些向上皮分化構(gòu)。上皮標記物多為胞漿構(gòu)的胚胎性腫瘤。 ? 陽性腫瘤細胞排列呈菊團樣結(jié)陽性腫瘤細胞排列呈菊團樣結(jié)構(gòu),部分陽性細胞圍繞血管排列。因此,應(yīng)全面了嚴重,可表達于多種組織細胞。內(nèi)抗原定位較模糊,因此應(yīng)該區(qū)別。如果缺乏細胞間的不均一性染色,即深淺不一。很重要的。不在抗原所在部位的在細胞膜上。 :假陽性結(jié)果的主要原因是:(( 1)) 所用的抗體與其它無關(guān)的抗原有交叉反應(yīng),特所用的抗體與其它無關(guān)的抗原有交叉反應(yīng),特異性差,特別在應(yīng)用多克隆抗血清時更易出現(xiàn);異性差,特別在應(yīng)用多克隆抗血清時更易出現(xiàn);(( 2)) 所用抗體濃度過高或染色過程中切片干燥導致所用抗體濃度過高或染色過程中切片干燥導致抗體與組織產(chǎn)生非特異性結(jié)合;抗體與組織產(chǎn)生非特異性結(jié)合;(( 3)) 組織或細胞中有內(nèi)源性過氧化物酶、堿性磷酸組織或細胞中有內(nèi)源性過氧化物酶、堿性磷酸酶及生物素等產(chǎn)生非特異性顯色;酶及生物素等產(chǎn)生非特異性顯色;免疫組化操作經(jīng)驗和體會免疫組化操作經(jīng)驗和體會? 操作中應(yīng)注意以下問題:操作中應(yīng)注意以下問題:,但要注意防止脫片。顯色注意底物要適量、時間要嚴格控制。(一)均勻的背景染色(一)均勻的背景染色 底物反應(yīng)時間過長。(五)某些抗體不著色(五)某些抗體不著色。甲醇封閉不恰當。切片已干燥(特別是冰凍切片)??贵w或其它試劑活性下降。二甲苯混合液。 三月 21三月 2121:39:1421:39:14March 28, 20231他 鄉(xiāng) 生白 發(fā) ,舊國 見 青山。 21:39:1421:39:1421:39Sunday, March 28, 20231不知香 積 寺,數(shù)里入云峰。 三月 2121:39:1421:39Mar2128Mar211越是無能的人,越喜 歡 挑剔 別 人的 錯 兒
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