免疫熒光檢測(更新版)
【正文】 多聚酶I、II和III靶抗原：多個蛋白亞單位組成的核仁酶復(fù)合物功能： 多聚酶 I: 2% 5% Scl70 靶抗原抗SSB抗體靶抗原：與 小分子RNA （U6RNA, pretRNA） 結(jié)合的磷脂蛋白 （48 kDa）功能： SLE： 組蛋白靶抗原：組蛋白HH2A、H2B、HH4 pattern，M）著絲點型（centromert 85－95類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎ELISAANA確認(rèn)實驗（2）Westernblot:HEp2 細(xì)胞提取物 ELISA:封片體積:10 181?？稍诿?50ml磷酸鹽緩沖液中加10滴(150 181。l/反應(yīng)區(qū)(5 x 5 mm)60 181。清洗：用燒杯盛PBSTween緩沖液，流水沖洗載片，然后立即放入裝有PBSTween緩沖液的小杯中浸洗至少5分鐘。滴加完所有待測標(biāo)本后才開始溫育（一次最多200份）。只有當(dāng)載片平衡到室溫后方可打開袋子。 協(xié)助檢測其它項目（如 ANCA、ENA）ELISA：采用高度純化的抗原初篩ANA 經(jīng)驗性強ELISA法：采用高度純化抗原或全細(xì)胞抗原 廣義定義靶抗原分布：該方法簡便、敏感，且可根據(jù)核染色形態(tài)確定核抗原的類型。6．封片進(jìn)不可用力擠壓蓋玻片，以免損壞基質(zhì)。②周邊型(核膜型)：細(xì)胞核周圍呈現(xiàn)熒光；③斑點型(顆粒型)：細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)斑點狀熒光；然后繼續(xù)下1張。30℃保存?zhèn)溆谩Ｈ缧枳孕兄苽?，方法如下?1)肝印片制備：取48周齡小鼠，斷頸殺死后，剖腹取肝。本次實驗以熒光免疫顯微技術(shù)檢測抗核抗體(ANA)為例進(jìn)行實習(xí)。以小鼠肝細(xì)胞或某些培養(yǎng)細(xì)胞(如Hep2)作抗原片，將病人血清加到抗原片上。冷風(fēng)吹干，乙醇固定，冰箱可保存1周。5．沖洗：用燒杯盛PBSTween緩沖液流水沖洗生物薄片，然后立即將其浸入盛有PBSTween緩沖液的小杯中至少1分鐘?？乖谐霈F(xiàn)陽性染色細(xì)胞為ANA陽性，否則為陰性。⑤混合型：兩種以上核染色；4．載片蓋到加樣板上后，確保反應(yīng)區(qū)與液滴完全接觸后，才開始記時溫育。7．封片介質(zhì)含有熒光穩(wěn)定劑，應(yīng)保存在28℃。檢測抗核抗體(ANA）的實驗方案ANA簡介抗核抗體（antinuclear 抗原譜有限（十余種） 操作簡單快速其他方法：金標(biāo)法、比濁法滴度較低，親和力弱，大多為IgM型。系統(tǒng)的幾何結(jié)構(gòu)決定了液滴的位置和高度。稀釋：l/反應(yīng)區(qū)(3 x 3 mm)25 181。使用連續(xù)加樣器。檢查生物薄片是否與液滴接觸良好，然后繼續(xù)下一張。在蓋玻片上滴加甘油/PBS。l/反應(yīng)區(qū)(7 x 9 mm)結(jié)果判斷：熒光顯微鏡下觀察熒光。用HEp2細(xì)胞檢測自身抗體ANA熒光模型胞漿型 檢測目前無法純化的靶抗原的抗體 （如PMScl、Ku）結(jié) WesternblotANA譜與相關(guān)疾病 80－100其它風(fēng)濕病 檢出率（%）3ssDNA4080U1nRNP 1020Ku 510心磷脂、 b2GP1HEp2細(xì)胞/靈長類肝臟：核均質(zhì)型 雙鏈、天然DNA （脫氧核糖核酸結(jié)構(gòu)）相關(guān)性： % % 40% 80% 少見靶抗原：與UUUU5 或U6nRNA 5% 30%HEp2細(xì)胞/靈長類肝臟: 抗核糖體P蛋白抗核糖體P蛋白抗體抗原：核糖體的亞單位( 60S), 3個蛋白分子組成: P0、PP2 （3117 kDa）。 陽性率 （%）SSAssDNA 多聚酶 II: 4% 陽性率 （%）ssDNA 1020 2酮戊酸脫氫酶 （50 kDa）蛋白X (52 kDa), 與丙酮酸脫氫酶復(fù)合物相關(guān)相關(guān)性：HEp2細(xì)胞/靈長類肝臟：抗核膜型聯(lián)合a生物薄片（HEp2/猴肝冰凍組織切片）檢測到的一些少見的特殊的熒光模型與細(xì)胞周期相關(guān)的熒光模型HEp2 細(xì)胞/靈長類肝臟：抗原肌球蛋白
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