動物細胞培養(yǎng)(更新版)
【正文】 培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一。首次傳代時，細胞接種數(shù)量要多，使細胞盡快適應(yīng)新環(huán)境，有利于二細胞的生存和增殖。30s后，立即終止消化。生長快的細胞系(株)按l：4分種傳代。這一過程就叫傳代。酒精消毒后，沿著膈膜剪斷胸廓，并將胸骨兩側(cè)肋骨剪斷(第Ⅱ套器械)。實驗二 細胞的原代培養(yǎng)實驗?zāi)康模簩嶒炘恚簭墓w獲取組織細胞的首次培養(yǎng)叫原代培養(yǎng)或初代細胞培養(yǎng)。 注意事項：。三．溶液配制：（一）DMEM培養(yǎng)液取一包DMEM試劑（）溶于800ml雙蒸水中，,雙蒸水定容至1L，攪拌均勻，等待過濾除菌。 帶蓋的瓶子或塑料離心管等物品應(yīng)擰松蓋子，包裝消毒后再擰緊。細胞培養(yǎng)是指細胞在體外條件下的生長，動物細胞在單獨細胞培養(yǎng)的過程中不再形成個體。消毒時間是從壓力達到15磅，溫度達到121℃時算起。不同的細胞對胰蛋白酶液的濃度、作用溫度和作用時間等要求也不一樣。避免因包裝瓶過大、貯液時間過長或反復凍融使用造成營養(yǎng)成分丟失和微生物污染。一般常用方法有二：一是組織塊培養(yǎng)法；二是單層細胞培養(yǎng)法。 用Hanks液漂洗肝脾腎表面血污，然后粗剪幾下，再用Hanks液漂洗多次后，吸去多余液體。原代培養(yǎng)細胞在瓶壁匯合后，需進行分離再培養(yǎng)，否則會因細胞密度過大，或生存空間不足、營養(yǎng)不夠?qū)е录毎ダ稀⑼Ｖ股L甚至死亡。試劑培養(yǎng)液，Hanks液，胰蛋白酶液實驗步驟，一般經(jīng)過7d左右可形成致密單層細胞。
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