高二生物蛋白質(zhì)和dna技術(shù)(更新版)
【正文】 三個(gè)步驟 。 ?(3)PCR技術(shù)包括三步：變性 → 復(fù)性 → 延伸 ，變性反應(yīng)的原理是采用加熱處理 。 ?(3)為構(gòu)建基因工程菌 ， 可用 PCR等技術(shù)從上述菌株中克隆植酸酶基因 。 延伸 (70℃ ～ 75℃ )：在 Taq酶 (在 72℃ 左右活性最高 )的作用下 ， 以 dNTP(三磷酸脫氧核糖核苷酸的縮寫 )為原料 ， 從引物的 5′端向3′端延伸 ， 合成與模板鏈互補(bǔ)的 DNA鏈 。吸管應(yīng)貼著管壁加樣，待樣品完全進(jìn)入凝膠層后才可關(guān)閉下端出口，加入緩沖液，待紅色蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每次 5 mL收集一管，連續(xù)收集。 ? (5)制干膠板：保存液浸泡凝膠板后 ，放在兩層透氣玻璃紙中間自然干燥 。 ? 實(shí) 驗(yàn) 要 求 ? 白質(zhì)提取的原理和方法。 ? (2)原理： ① 各種蛋白質(zhì)分子帶電性質(zhì)的差異； ? ② 分子本身大小 、 形狀的不同 。 ?(1)在加樣示意圖中 ， 正確的加樣順序是________。 PCR過程一般經(jīng)歷 30多次下述循環(huán)： 95℃ 條件下使模板 DNA變性、解鏈 → 55℃ 條件下復(fù)性 (引物與 DNA模板鏈結(jié)合 )→ 72℃ 條件下引物鏈延伸 (形成新的脫氧核苷酸鏈 )。在產(chǎn)酶菌株篩選過程中，常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板，植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產(chǎn)生 ________，可根據(jù)其大小選擇目的菌株，所得菌株需要進(jìn)一步測(cè)定植酸酶活性。 反應(yīng)過程中打開模板 DNA雙鏈的方法是 ________。 ?正答示范： (1)透 明圈 植酸鈉的消耗量 (減少量 )或磷酸 (肌醇 )的生成量 (產(chǎn)量 ) (2)小分子雜質(zhì) 凝膠色譜法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間的分子大小、吸附性質(zhì)等差異進(jìn)行純化 (或電泳法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間的電荷、分子大小等差異進(jìn)行純化 ) (3)變性、復(fù)性和延伸 (長(zhǎng) ) 加熱 (或高溫處理 ) (4)蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶 ? 【 例 2】 近 十年來， PCR技術(shù) (多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) )成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室里的一種常規(guī)手段，其原理是利用 DNA半保留復(fù)制，在試管中進(jìn)行 DNA的人工復(fù)制 (如圖 )，在很短的時(shí)間內(nèi)，將 DNA擴(kuò)增幾百萬倍甚至幾十億倍，使實(shí)驗(yàn)室所需要的遺傳物質(zhì)不再受限于活的生物體。 以引物為標(biāo)記 ，可判斷出此產(chǎn)物最早為第 ________次循環(huán)的產(chǎn)物 。 DNA聚合酶不能從頭合成 DNA，只能從 3′端延伸 D
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