分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)與產(chǎn)前診斷(更新版)
【正文】 重探針連接依賴性擴(kuò)增技術(shù) （ Multiplex Ligationdependent Probe Amplifcation, MLPA) DNA序列分析 （ DNA sequencing) （ HA） ? 由突變型和野生型 DNA鏈形成的異源雙鏈 DNA在其錯(cuò)配處形成一個(gè)凸起 ， 電泳時(shí)會(huì)產(chǎn)生與相應(yīng)的同源雙鏈 DNA不同的遷移率 ， 從而使兩者得以分離 。 （ 3） 無義突變 （ nonsense mutation）：堿基替換后，使編碼氨基酸的密碼子變成一個(gè)終止密碼子。 ? 所需染色體 DNA可來自各種組織，如新鮮組織、福爾馬林固定的組織、石蠟包埋組織，可在很少量的基礎(chǔ)上檢測(cè)，利于做回顧性研究。 14) 染色體技術(shù)的 應(yīng)用－ 2 inv(9)(p12q13) 分子細(xì)胞遺傳學(xué)： DMD基因第 46號(hào)外顯子缺失 細(xì)胞遺傳學(xué)研究中染色體技術(shù)的應(yīng)用 9號(hào)染色體涂染探針雜交。 ? 全染色體涂染探針 ：通過對(duì)來自特異性染色體分檢庫或僅含一條人類染色體的雜種細(xì)胞 DNA擴(kuò)增制備。通過使用不同的熒光素，在一個(gè)中期染色體涂片上可以鑒別幾條不同的染色體。 ? 通過檢測(cè)染色體上兩種熒光信號(hào)的相對(duì)比值，了解腫瘤細(xì)胞 DNA拷貝數(shù)的變化，并可在染色體上定位。 ? 靈敏度：限于檢測(cè)較大范圍的缺失（ 10 — 30MB） 二、突變分析與分子診斷 （一）基因突變類型 ? 點(diǎn)突變 ：只有一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的改變 ， 是突變中最多見的形式 。 ? DNA 大片段缺失或復(fù)制 （ large deletion or duplication)： 幾百個(gè) bp至幾十個(gè) kb的 堿基 缺失或復(fù)制 。 這種二級(jí)結(jié)構(gòu)依賴于其堿基的序列 。 ? SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ DHPLC） ? 1995年 Oefner and Underhill 首次報(bào)道 DHPLC技術(shù)。有資料表明大片段 DNA缺失可占基因突變的三分之一 定量多重 PCR技術(shù)要點(diǎn) ： ? 涉及至少 2個(gè)基因的多個(gè)外顯子在一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)同時(shí)進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，其中一個(gè)外顯子作為參照外顯子，其余作為檢測(cè)外顯子； ? 控制 PCR循環(huán)數(shù) ，使 PCR產(chǎn)物的增加處于對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線內(nèi)； ? PCR產(chǎn)物于 DNA測(cè)序儀電泳，其結(jié)果經(jīng) GeneScan軟件處理； ? 以檢測(cè)外顯子 PCR產(chǎn)物與參照外顯子 PCR產(chǎn)物的比值計(jì)算模版 DNA相對(duì)拷貝數(shù)，確定是否存在檢測(cè)外顯子的雜合性缺失； ? 檢出的缺失經(jīng)其它方法（長(zhǎng)片段 PCR或缺失斷裂點(diǎn)測(cè)序）確認(rèn)。 對(duì)家庭其他人員進(jìn)行癥狀出現(xiàn)前的基因分析 ? 體形成分析（ HD） ? B. 單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（ SSCP） A B （三）產(chǎn)前診斷 ? 分析指征 （ 1）夫婦之一存在染色體畸變，或曾生育染色體病患兒； （ 2）有畸形兒生育史； （ 3）有原因不明的習(xí)慣性流產(chǎn)孕婦； （ 4）夫婦之一有先天性代謝缺陷，或曾生育這類患兒； （ 5） X連鎖遺傳病基因攜帶者孕婦 （ 6）有遺傳病家族史，有系近親婚配的孕婦 ? 出生缺陷監(jiān)測(cè) Thanks!
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