植物dna分子標記ppt課件(更新版)
【正文】 Timothy geic variation (Guo et al. 2022) RAPD的優(yōu)缺點 優(yōu)點： （ 1）不需 DNA探針，設(shè)計引物不需知道序列信息。 RAPD的優(yōu)缺點 缺點： （ 1）顯性標記，無法區(qū)別顯性純合體和雜合體。 AFLP的基本原理 AFLP引物是一種人工合成的單鏈寡核苷酸，一般長度為 18~20個核苷酸。以人類基因組為例，平均每 1520kb就存在 1個 STR座位，據(jù)此估計整個人類基因組中大約有 50,000100,000個 STR位點。 基因芯片技術(shù)和應(yīng)用 ? 實驗操作： ? 準備探針： RNA提取 → 標記 → 熒光染料 ? 雜交反應(yīng) ? 雜交后的處理 ? 實驗設(shè)計：異種 DNA平行試驗； RNA質(zhì)量 檢測對照；封閉對照；規(guī)整化對照 ? 成像分析 Gene chip 基因芯片技術(shù)和應(yīng)用 ?基因芯片的應(yīng)用： 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究；藥物篩選；臨床診斷；指導(dǎo)用藥；預(yù)防醫(yī)學(xué)研究；環(huán)境保護；軍事、司法；農(nóng)業(yè)等 ?基因芯片使用應(yīng)注意的問題： 類型的選擇；基因芯片數(shù)量；取材；取材量；結(jié)果分析；多種芯片結(jié)合應(yīng)用 。 真核生物基因組中散布著大量的微衛(wèi)星 DNA，微衛(wèi)星DNA由更短的重復(fù)單位串聯(lián)而成，重復(fù)長度一般為2~6bp，一個 SSR總長度可達幾十到幾百 bp。 如： EcoRI引物和 MseI引物 EcoRI 5 180。模板濃度、 Mg 2+濃度， PCR反應(yīng)中條件的變化等。具有廣泛適用性和通用性。 RFLP標記缺點 （ 1） DNA需要量大。酶識別位點堿基對 越少 ， DNA分子中被識別的位點 越多 ，所產(chǎn)生的限制片段 越短 。 染色體原位雜交 是指 DNA探針與染色體上的 DNA雜交，并在染色體上直接進行檢測的分子技術(shù)，其原理是兩條核苷酸 單鏈片斷 在適宜的條件下，通過 氫鍵結(jié)合，形成 DNADNA， DNARNA， RNARNA雙鍵分子，用帶有標記的 DNA或者 RNA片斷作為核酸探針，與細胞內(nèi)染色體雜交，用放射自顯影等方法予以顯示，在熒光顯微鏡下觀察目的 mRNA或者 DNA的存在與定位。植物 DNA 分子標記 分子標記的概念 ?廣義的分子標記 （ molecular marker）：可遺傳的并可檢測的 DNA序列或蛋白。 分子雜交 ：由具有互補堿基順序的任何兩條 單鏈 核酸分子片斷形成 雙鏈 的過程。 限制性內(nèi)切酶酶解 DNA長鏈，是識別 DNA上的特異的位點并在這些位點上切斷的過程。 （ 3）瓊脂糖凝膠電泳 （ 4） Southern印跡轉(zhuǎn)移 （ 5） DNA雜交及放射自顯影 RFLP標記優(yōu)點 （ 1）不受性別、年齡局限，不會受表達的組 織、發(fā)育階段或外界環(huán)境的不同而受影 （ 2）標記座位的等位基因間是 共顯性 的，通過 雜交后電泳帶型可直接區(qū)別雜合子和顯性 純合子 （ 3） RFLP標記源于基因組 DNA自身變異，在 數(shù)量上幾乎不受限制。覆蓋整個基因組。 （ 2）對反應(yīng)條件敏感，重復(fù)性差。引物主要由 3部分組成： （ 1） 核心序列 （ CORE），該序列與人工接頭互補； （ 2）限制性內(nèi)切酶識別 特異序列 （ ENZ）； （ 3）選擇性 延伸序列 （ EXT），即引物 3端的選擇堿 基，選擇堿基延伸到 酶切片段區(qū) 。由于微衛(wèi)星 DNA具有高度的多態(tài)性和遺傳穩(wěn)定性，所以非常適合作為遺傳學(xué) DNA分子標
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