【正文】 稀釋液和無(wú)菌水各 mL， 分別涂布于各組平板上 ， 將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置 ， 37℃ 恒溫培養(yǎng) 24～ 48小時(shí) ， 在確定對(duì)照組無(wú)菌后 ， 選擇菌落數(shù)在 30～ 300的一組平板為代表進(jìn)行計(jì)數(shù) 。 蛋白胨來(lái)源于動(dòng)物原料 ， 含有維生素 、 糖和有機(jī)氮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) ， 在培養(yǎng)基中主要是作為氮源 ， 微生物的培養(yǎng)基各種配方一般都要含有水 、 碳源 、 氮源 、 無(wú)機(jī)鹽 。 除此之外 ， 培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是 ________和 ________。 [答案 ] D 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)過(guò)程 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)過(guò)程涉及培養(yǎng)基的配制 、 滅菌 、 接種 、培養(yǎng) 、 觀(guān)察等過(guò)程 ， 其中配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各種營(yíng)養(yǎng)要素的均衡以及 pH的適宜 ， 這是基礎(chǔ) 。 [答案 ] A 特定微生物的數(shù)量測(cè)定 1． 為了保證結(jié)果準(zhǔn)確 ， 一般選擇菌落數(shù)在 30～ 300的平板上進(jìn)行計(jì)數(shù) 。 (3)培養(yǎng)基中缺乏氮源時(shí) ， 可以分離固氮微生物 ， 因?yàn)榉枪痰⑸锊荒茉诖伺囵B(yǎng)基上生存 。 (2)牛胃是一個(gè)厭氧的環(huán)境 ， 所以其中的纖維素分解菌與需氧的醋酸菌培養(yǎng)條件有所不同 。 培養(yǎng)基 B中 ， 纖維素是唯一的碳源 ， 所以也屬于選擇培養(yǎng)基 。7H2O 葡萄糖 尿素 瓊脂 g g g g g g B組 纖維 素粉 NaNO3 Na2HPO4 可將同一稀釋度的樣品接種到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上 ， 經(jīng)涂布 、培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù) 。 2． 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 (1)理論依據(jù)：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí) ， 培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落 ， 來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌 。 3． 平板劃線(xiàn)操作的注意事項(xiàng) (1)第一次劃線(xiàn)及每次劃線(xiàn)之前都需要灼燒接種環(huán)滅菌 。 小貼士 1． 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) (1)菌種篩選：使用 是唯一氮源的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng) 。 這時(shí)可使用直接的方法 ， 如使用顯微鏡直接統(tǒng)計(jì)細(xì)胞的數(shù)目 。 ① 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) ② 營(yíng)養(yǎng)基質(zhì) ③ 碳源 ④ 氮源 ⑤ pH ⑥ 氧氣 1： 為什么倒平板后等平板冷卻后要將平板倒置 ？ 提示： 將平板倒置的目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的水珠滴落到平板上造成污染 。 還需要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì) 、 特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及 的要求 。 因此 ， 這種方法不宜用于某些食品工業(yè)的質(zhì)量控制 ， 因?yàn)橛行┦称啡缗Ｄ桃赘瘮∽冑|(zhì) ， 不宜延擱這么長(zhǎng)的時(shí)間 。 ?連續(xù)劃線(xiàn) ?梯度稀釋 2： 平板劃線(xiàn)法為什么要把第一次以后的每一次劃線(xiàn)的起點(diǎn)放在上一次劃線(xiàn)的末端 ？ 提示： 目的是使每一次劃線(xiàn)后菌體數(shù)目減少 ， 培養(yǎng)之后形成的菌落是由單個(gè)菌體繁殖而成 。 (2)營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：配制培養(yǎng)基時(shí)要注意各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例 、 pH要適宜 。 [答案 ] D 1． 篩選原理 配制選擇培養(yǎng)基 ， 把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源 ， 原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng) ， 其他微生物則不能在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng) 。 (4)為使結(jié)果接近真實(shí)值 ， 要設(shè)置重復(fù)組 ， 取其平均值 。 下表為兩種微生物的培養(yǎng)基配方 A組 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4 因?yàn)榕囵B(yǎng)基 A中有凝固劑 ——瓊脂 ， 所以屬于固體培養(yǎng)基 。 [解析 ] (1)剛果紅與纖維素形成的紅色復(fù)合物在纖維素被分解后將不再形成 ， 則在培養(yǎng)基上出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈 。 (2)培養(yǎng)基中加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌 。 利用上述方法能從混雜的微生物群體中分別分離出 ( ) ① 大腸桿菌 ② 霉菌 ③ 放線(xiàn)菌 ④ 固氮細(xì)菌 A. ④②③ B. ①②③ C. ①③④ D. ③④ [解析 ] 缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無(wú)法生長(zhǎng) ， 而固氮細(xì)菌能生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線(xiàn)菌 ， 霉菌能生長(zhǎng)；在培養(yǎng)基中加入 10%的酚可以抑制細(xì)菌和霉菌 ， 放線(xiàn)菌能生長(zhǎng) 。 C項(xiàng)雖涂布了 3個(gè)平板 ， 但是 ， 其中 1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn) ， 說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤 ， 此時(shí) ， 不能簡(jiǎn)單地將 3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來(lái)求平均值 。 請(qǐng)回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問(wèn)題： (1)培養(yǎng)基中含有的蛋白胨 、 淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了________和 ________。 [解析 ] (3)小題易回答錯(cuò)誤 ， 錯(cuò)誤原因是不知道如何處理對(duì)照實(shí)驗(yàn) ， 該實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組為空白對(duì)照 ， 因此應(yīng)接種無(wú)菌水 。 [答案 ] (1)氮源 (碳源不作要求 ) 碳源 無(wú)機(jī)鹽 水 (2)高壓蒸汽滅菌 (3)恒溫箱 無(wú)菌水 (4)多 高 (5)鹽 (或 NaCl) 選擇培養(yǎng)基 1. [2022 (4)通常情況下 ， 在微生物培養(yǎng)過(guò)程中實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌 、 ________和 ________。 答案： (1)原油 選擇 (2)平板劃線(xiàn)法 稀釋涂布平板法 (3)強(qiáng) (4)干熱滅菌 高壓蒸汽滅菌 火焰 3. [2022 (6)若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn) ， 使用過(guò)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò) ________處理后才能丟棄 ， 以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散 。 答案： (1)溫度 酸堿度 易培養(yǎng) 生活周期短 (2)滅菌 消毒 損傷 DNA的結(jié)構(gòu) (3)比例合適 (4)鑒定 (或分類(lèi) ) (5)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間 ， 觀(guān)察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生 (6)滅菌 4. [2022 ④ 與 ⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于 ________；使用 ________法可以在 ⑥ 上獲得單菌落 。 研究人員用化合物 A、 硝酸鹽 、磷酸鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基 ， 成功地篩選到能產(chǎn)生纖維素酶的微生物 。 要分離分解纖維素的微生物 ， 就應(yīng)該在培養(yǎng)基中加入纖維素作為碳源 ， 不能利用纖維素的微生物在這樣的培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng) ， 所以該培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基 ， 在篩選分解纖維素的微生物時(shí) ， 加入剛果紅作為指示劑 ， 剛果紅能與纖維素形成紅色的復(fù)合物 ， 當(dāng)纖維素被分解后 ， 紅色消失形成了透明圈 。 之后 ， 將菌液涂布接種于以 ________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上 ， 30℃ 條件下培養(yǎng) 。 倒置可以避免培養(yǎng)基受污染 ， 為排除其他因素影響 ， 需要設(shè)置未接種的空白的培養(yǎng)基作對(duì)照組 。 (3)培養(yǎng)大腸桿菌時(shí) ， 常用的接種方法是平板劃線(xiàn)法和________。 (2)根據(jù)表中培養(yǎng)基的組成可看出 ， 該培養(yǎng)基中的碳源是乳糖 、 蔗糖 (蛋白胨 )， 由于在培養(yǎng)基中添加了顯色劑 ， 可判斷此培養(yǎng)基為鑒別培養(yǎng)基 。 答案： (1)分解者 異養(yǎng)型 (2)鑒別 乳糖 、 蔗糖 (蛋白胨 ) (3)稀釋涂布平板法 滅菌 (4) 108 (5)B、 C (6)植物激素(或生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素 )