【正文】 糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30~300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。采用此方法的注意事項(xiàng)：~，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入TTC 設(shè)置對照設(shè)置對照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。（2）選擇性培養(yǎng)基在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。（2）確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2天，無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（2）對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。平板劃線操作的討論？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。⑤將試管通過火焰，并塞上棉塞。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。倒平板操作的討論，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來倒平板。無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。天然培養(yǎng)基是用化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)配制而成，常用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)。培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。亞硝酸鹽含量發(fā)酵時(shí)間（d）一般在腌制 10 天后亞硝酸鹽含量開始降低，故在10天之后食用最好*測定亞硝酸鹽含量的原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與 N1萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。反應(yīng)式為：C6H12O62C3H6O3+能量 含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。防止雜菌污染：①用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。樣品水分含量（%）計(jì)算公式如下：(烘干前容器和樣品質(zhì)量烘干后容器和樣品質(zhì)量)/烘干前樣品質(zhì)量原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。先在試管中加入發(fā)酵液2ｍL，再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/L的H2SO43滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴，振蕩試管，觀察顏色1充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出二氧化碳的；出料口是用來取樣的。 C6H12O6＋6O2→6CO2＋6H2O在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要) 分裂生殖 孢子生殖在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。20℃左右最適合酵母菌的繁殖。營腐生生活。*水分測定方法如下：精確稱取經(jīng)研缽研磨成糊狀的樣品5～10g()，置于已知重量的蒸發(fā)皿中，均勻攤平后，在100～105℃電熱干燥箱內(nèi)干燥4h，取出后置于干燥器內(nèi)冷卻至室溫后稱重，然后再烘30min，直至所稱重量不變?yōu)橹?。食鹽的作用：，是豆腐變硬。香辛料的作用：（3）我們平常吃的豆腐，哪種適合用來做腐乳？含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。分裂方式是二分裂。亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外，但在適宜pH 、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。合成培養(yǎng)基是用成分已知的化學(xué)物質(zhì)配制而成，其中成分的種類比例明確，常用于微生物的分離鑒定。只有固氮微生物才能利用N2。④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。 ④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。②缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。微生物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營養(yǎng)物質(zhì)五類。尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的 篩選菌株（1）實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。（2）樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。纖維素與纖維素酶（1）棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈等也富含纖維素。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。（3）兩種剛果紅染色法的比較方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。 專題三 ＤＮＡ和蛋白質(zhì)技術(shù)課題一?。模危恋拇痔崛∨c鑒定一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子運(yùn)動(dòng)，易于形成沉淀析出；三是低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。一是因?yàn)殡u血細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得；二是雞血細(xì)胞極易吸水脹破，而用動(dòng)物肝臟細(xì)胞作實(shí)驗(yàn)材料常常需要?jiǎng)驖{和離心，對設(shè)備要求較高，操作繁瑣，歷時(shí)較長。血細(xì)胞在蒸餾水中大量吸水而張裂；洗滌劑瓦解細(xì)胞膜；食鹽溶解DNA物質(zhì)；選用尼龍布進(jìn)行過濾。方案一的原理是DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA；方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。溶解核內(nèi)DNA………… 加入NaCl至2mol/L，同一方向緩慢攪拌↓DNA析出……………… ，過濾，在溶解到2mol/L溶液中↓→除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。一般來說，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法固定，而細(xì)胞多采用包埋法固定化。放人200mL的燒杯中，加入150mL的蒸餾水，使其充分溶解，待用。固定化酵母細(xì)胞以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，觀察液滴在CaCl2溶液中形成凝膠珠的情形。課題三 血紅蛋白的提取和分離一、實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)的物化理性質(zhì)：形狀、大小、電荷性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)、親和力等千差萬別，由此提取和分離各種蛋白質(zhì)。（2）分離方法：瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。（選做）三、注意事項(xiàng)1. 電泳技術(shù)電泳技術(shù)就是在電場的作用下，利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而達(dá)到對樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的目的。5．沸水浴處理加入洗脫液的濕凝膠的目的不但節(jié)約時(shí)間，還能除去凝膠中可能帶有的微生物和排除凝膠