20xx核酸檢測基本知識(完整版)
【正文】 、血液篩選、遺傳病診斷和預(yù)防、法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的核酸檢測。核酸具有非常重要的生物功能，主要是貯存遺傳信息和傳遞遺傳信息。在蛋白質(zhì)的復(fù)制和合成中起著儲存和傳遞遺傳信息的作用。雙鏈DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,經(jīng)其啟動子序列起動而轉(zhuǎn)錄RNA，RNA又可在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下反轉(zhuǎn)錄成DNA，進入循環(huán)相,對模板進行大量擴增。①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。發(fā)出的熒光可以被熒光探頭檢測到,一邊擴增,一邊檢測,這樣就實現(xiàn)了“實時”檢測。在微孔中形成HIVRNA寡核苷酸復(fù)合物。DNA應(yīng)置于20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應(yīng)置于80℃保存。在擴增儀中，按照設(shè)定的程序進行擴增。（4）應(yīng)在完成檢測后5個工作日內(nèi)發(fā)出檢測報告。擴增產(chǎn)物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標(biāo)準(zhǔn)比較，判斷擴增片段是否在預(yù)期的分子量范圍內(nèi)。在擴增儀或水浴箱中，在規(guī)定的溫度和時間下進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。通過發(fā)光強度來定量,因為發(fā)光強度與樣品中HIVRNA含量成比例?！猙DNAbDNA是定量檢測血漿中的HIV1型RNA的一種方法。③引物的延伸：DNA模板—引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成1條新的與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈，重復(fù)循環(huán)變性—退火—延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板
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