臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)(完整版)
【正文】 的容量大；可將抗體或抗原牢固地固定在其表面，經(jīng)長(zhǎng)期保存和多次洗滌也不易脫落；不影響所固定的抗體或抗原的免疫反應(yīng)性，而且為使反應(yīng)充分進(jìn)行，最好其活性基團(tuán)朝向反應(yīng)溶液，固相方法簡(jiǎn)便易行，快速經(jīng)濟(jì)。優(yōu)點(diǎn)：酶標(biāo)志物質(zhì)量較均一，標(biāo)記效率也較一步法高。（βGal）的底物常用4甲基傘酮基RD半乳糖苷（4MUU），酶作用后，生成高強(qiáng)度熒光物4甲基傘形酮（4MU），其敏度性較HRP高30～50倍，但測(cè)量時(shí)需用熒光計(jì)。（三）常用的底物（1）鄰苯二胺（OPD）：是HRP最為敏感的色原底物之一。由無色的糖蛋白（主酶）和亞鐵血紅蛋白（輔基）結(jié)合而成的復(fù)合物。一、酶和酶作用底物（一）酶的要求：一個(gè)酶蛋白分子每分鐘可催化103～104個(gè)底物分子轉(zhuǎn)變成有色產(chǎn)物。，方法簡(jiǎn)單易行、敏感和重復(fù)性好。（AP）：大腸桿菌來源的AP分子量80kD，；小牛腸黏膜AP分子量為100kD，；后一種AP的活性高于前者。缺點(diǎn)是水溶性差。②缺點(diǎn)：交聯(lián)時(shí)分子間比例不嚴(yán)格，大小不一，影響效果。，滴加酶的底物溶液，若沉淀線上顯色，則酶標(biāo)記物中的酶活性仍保留。均勻地分散到整個(gè)反應(yīng)溶液中，因此反應(yīng)速度快。第二節(jié) 酶免疫技術(shù)的分類包括兩種：酶免疫組織化學(xué)技術(shù)：用于組織切片或其他標(biāo)本中抗原的定位。（二）克隆酶供體免疫分析（CDEIA）DNA重組技術(shù)可分別合成某種功能酶（如βD半乳糖苷酶）分子的兩個(gè)片段，大片段稱為酶受體（EA），小分子稱作酶供體（ED），兩者單獨(dú)均無酶活性，一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性。：先將樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）與抗體混合反應(yīng)達(dá)平衡，然后加入酶標(biāo)記抗原繼續(xù)溫育一段時(shí)間，測(cè)定離心沉淀物（酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物）中加入酶底物液后的呈色吸光度值。：針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同且空間距離較遠(yuǎn)的決定簇，包被使用一種單抗，酶標(biāo)記使用另一種單抗。原理：將抗原包被在固相載體上，加入待測(cè)樣本形成固相抗原受檢抗體復(fù)合物；經(jīng)溫育洗滌后，加入酶標(biāo)二抗，常用羊抗人IgG，在固相上即形成固相抗原待測(cè)抗體酶標(biāo)抗抗體復(fù)合物，加入底物后根據(jù)顯色的深淺確定待測(cè)抗體含量。主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測(cè)定，最常用的是病原體急性感染診斷中的IgM型抗體。常用免疫電泳或雙相擴(kuò)散法，出現(xiàn)沉淀線表示酶標(biāo)記物中的抗體（抗原）具有免疫活性。下列有關(guān)雙位點(diǎn)一步法ELISA的敘述中，錯(cuò)誤的是，另一種作為酶標(biāo)抗體，會(huì)出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)『正確答案』A『答案解析』雙位點(diǎn)一步法：在雙抗體夾心法基礎(chǔ)上，進(jìn)一步發(fā)展了雙位點(diǎn)一步法。用一種標(biāo)記物可檢測(cè)多種與抗原相應(yīng)的抗體的ELISA方法是『正確答案』B『答案解析』用一種標(biāo)記物可檢測(cè)多種與抗原相應(yīng)的抗體的ELISA方法是間接法。ELISA間接法中固相上包被的是『正確答案』C『答案解析』ELISA間接法中固相上包被的是抗原。測(cè)定時(shí)將含待測(cè)抗原標(biāo)本和酶標(biāo)抗體同時(shí)加入進(jìn)行反應(yīng)，兩種抗體互不干擾，經(jīng)過一次溫育和洗滌后，即可加入底物進(jìn)行顯色測(cè)定。也可直接用ELISA方法測(cè)定。第四節(jié) 酶免疫測(cè)定的應(yīng)
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