研發(fā)部崗前培訓(xùn)細(xì)胞培養(yǎng)(完整版)
【正文】 成敗的關(guān)鍵： 常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、馬血清等，其中以胎牛血清質(zhì)量最好 優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無沉淀物，無細(xì)菌、支原體、病毒污染 血清的滅活（消除補(bǔ)體活性）： 56 ℃ ， 30 分鐘 血清的消毒：過濾除菌 抗菌素的使用： 在培養(yǎng)液配制后，培養(yǎng)液內(nèi)常加適量抗菌素，以抑制可能存在的細(xì)菌的生長(zhǎng) 通常是青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用。定期消毒（ 90 ℃ ， 14 h) ③ 箱內(nèi)火菌蒸餾水 3000毫升蒸餾水槽中以 保持箱內(nèi)濕度，避兔培養(yǎng)液蒸發(fā) 純水儀 七、器械 用于解剖動(dòng)物、取材和原代培養(yǎng)切割組織等 解剖刀（剪）、鑷子、縫針（線）、持針器、止血鉗等 八、培養(yǎng)器皿 （一）玻璃瓶皿 玻璃瓶：用于配制、儲(chǔ)存培養(yǎng)液、血清等 培養(yǎng)瓶：用于培養(yǎng)細(xì)胞 培養(yǎng)皿：用于培養(yǎng)和分離細(xì)胞 吸管、離心管、燒瓶（杯）、量筒、漏斗、試管、注射器等 （二）塑料瓶皿 多孔培養(yǎng)板：適于做單細(xì)胞克隆、生長(zhǎng)曲線測(cè)定、藥物測(cè)試和單克隆抗體等研究：分為 2 96孔板 培養(yǎng)皿： 培養(yǎng)瓶：適于在 CO2培養(yǎng)箱中使用 九、培養(yǎng)基（液） （一）平衡鹽溶液： （二）天然培養(yǎng)基：血清、組織提取液、雞 血漿等 （三）合成培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是維持體外細(xì)胞生存和生長(zhǎng)的溶液，分天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基 天然培養(yǎng)基： 天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液） 優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好 缺點(diǎn)：來源受限。也稱懸浮期。 胎牛血清是品質(zhì)最高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。 （ 2）新生牛血清：出生 1224小時(shí)新生牛靜脈采血 。 血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在 5℃ 至 20℃ ，若存放在 4℃ 不可超過一個(gè)月。 ，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。含有多種生長(zhǎng)因子，常用于體外細(xì)胞培養(yǎng)。 胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生 24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生 10－ 30天的小牛。 ，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。有一點(diǎn)可以肯定，胎牛血清中的部分功能蛋白與小牛血清中的含量有差別。 血清是血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。 176。 主要用干玻璃器皿消毒 濾 器：過濾除菌 ， 大多數(shù)培養(yǎng)用液 ， 如人工合成培養(yǎng)基 、 血清 、 酶液等均采用濾過法除菌 超凈工作臺(tái)：為細(xì)胞操作提供無菌環(huán)境 紫外燈：紫外線消毒 。培養(yǎng)基內(nèi)青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升 100單位 慶大霉素：每毫升 100單位，方便、廣譜、穩(wěn)定 謝 謝！ 。 CO2培養(yǎng)箱 ? CO2培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為 37 ℃ ， 5％ CO2 ? 使用 CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)注意的問題： ① 用螺旋口瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，需將瓶蓋微 松，以保證通氣
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