xxxx年本科實(shí)驗(yàn)四重組質(zhì)粒dna提取、雙酶切鑒定(完整版)
【正文】 上。 2 提取大腸桿菌質(zhì)粒 DNA的 方法和原則 分離純化質(zhì)粒 DNA的主要步驟 (1)培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴(kuò)增 （ DNA的擴(kuò)增與選擇 ） (2)細(xì)菌的收集與裂解 ? 收集方法：高速離心的方法 ? 裂解細(xì)菌方法：去污劑法、有機(jī)溶劑法、 堿變性法 、 沸水 熱裂法、溶菌酶法、超聲處理法等。 實(shí) 驗(yàn)步驟 加 EP管， 12023rpm 1min，去上清， 再加 ， 12023rpm 1min，去上清 加入冰的 200 181。l上層水相轉(zhuǎn)移到新的 EP管 ，加入 2倍體積 800181。G A A T T C3‘ 339。 (3)反應(yīng)緩沖液。 BamHI 539。l TE 溶解 DNA 注意事項(xiàng)： 加樣槍正確使用； 標(biāo)記自己所提取的質(zhì)粒類(lèi)型； 廢液倒在水池中，槍頭扔到垃圾桶中； 加不同溶液要換槍頭； 離心前把管擦干； 轉(zhuǎn)移上清時(shí)不要吸到沉淀； 吸取酚時(shí)槍頭伸到下層溶液中，注意不要沾到 皮膚； 每人最終得到 20ul質(zhì)粒 DNA，其中 10ul用于酶 切和電泳，其余 DNA儲(chǔ)存于 20℃ 用于電泳對(duì) 照！ 二、限制性內(nèi)切酶切割重組質(zhì)粒 1 關(guān)于限制性核酸內(nèi)切酶 （ restriction endonuclease） 定義 能在特異位點(diǎn)（酶切位點(diǎn)）上催化雙鏈 DNA分子的斷裂 ,產(chǎn)生相應(yīng)的限制性 DNA片段。l 溶液 II，快速顛倒數(shù)次，冰浴 3min （不要振蕩?。? 加入 150181。 (3)質(zhì)粒 DNA的純化 ? 常用的方法有：超速離心、層析法、聚乙二醇沉淀法等 所有純化方法都是利用了質(zhì)粒 DNA相對(duì)較 小及共價(jià)閉合環(huán)狀的性質(zhì)。 9 (1) 超螺旋 DNA (supercoiled DNA, SC DNA) 質(zhì)粒的三種構(gòu)型 10 (
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