質(zhì)粒提取方法ppt課件(完整版)
【正文】 離心管架。3H2 O,用冰醋酸調(diào) pH至 , 加水定容至 100ml, 分裝后高壓滅菌 ,儲存于 4℃ 冰箱。冷卻后用 eppendorf管分裝成小份保存于 20℃ 。酚和氯仿均有很強的腐蝕性，操作時應(yīng)戴手套。 1 電泳所用試劑： （ 1） TBE 緩沖液 (5 )：稱取 Tris 54g，硼酸 ，并加入 EDTA () 20ml，定溶至 1000ml。Cl()， 10 mmol/L EDTA ()， 5% Triton X100。 加入新配制的溶液 Ⅱ 300μl, 蓋緊管口，快速溫和顛倒 eppendorf管數(shù)次 ,以混勻內(nèi)容物 (千萬不要振蕩 ),冰浴 5分鐘。 2. 提取質(zhì)粒 DNA過程中除去蛋白很重要 ,采用酚 /氯仿去除蛋白效果較單獨用酚或氯仿好 ,要將蛋白盡量除干凈需多次抽提。 ，室溫干燥沉淀 2min，然后加入 20μl無菌水溶解DNA。沉淀 DNA 可用異丙醇 (一般使用等體積 ), 無水乙醇（ ）， 區(qū)別？ 。 上清液移入干凈 eppendorf管中 ,加入等體積的酚 /氯仿 (1:1),顛倒 混勻 , 4℃ 下 12022g離心 5分鐘，重復(fù)一次。 ? 加入 25μL溶菌酶 (10mg/mL)，放入沸水中 40s，立即于10 000r/min離心 10min。 操 作 步 驟 一、 細菌的培養(yǎng)和收集 將含有質(zhì)粒菌種接種在 LB固體培養(yǎng)基 (含 50μg/ml Amp)中 , 37℃ 培養(yǎng) 1224小時。Cl ()， 1 mmol/L EDTA ()。重蒸酚加入 ％的 8羥基喹啉 (作為抗氧化劑 ),并用等體積的 溶液 Ⅰ 可成批配制 ,每瓶 100ml,高壓滅菌 15分鐘 ,儲存于 4℃ 冰箱。 三、試劑 LB液體培養(yǎng)基 (LuriaBertani) ：稱取蛋白胨 (Tryptone)10 g，酵母提取物 (Yeast extract) 5 g， NaCl 10 g，溶于 800ml去離子水中，用 NaOH調(diào)pH至 , 加去離子水至總體積 1升 ,高壓下蒸氣滅菌 20分鐘。 閉合環(huán)狀的質(zhì)粒
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