【正文】 ，培養(yǎng)基表面可有透亮的溶菌空斑出現。v 根據噬菌體與宿主菌的相互關系，噬菌體可分為兩類 —— 毒性噬菌體 /烈性噬菌體 (virulent3.半乳糖 基因插入到載體的多克隆位點的側翼序列中，而在一些人工構建的大腸桿菌株系中卻只能編碼產生該酶的 ?片段 。pUC質粒載體優(yōu)點：（ 1）具有更小的分子量和更高的拷貝數2.空載體 轉化子 (amprtetr)影印在含 Ap的平板上 空載體 轉化子 (amprtetr)因插入外源 DNA而導致基因失活的現象稱之為 插入失活效應 。4363bp， 106Da，（ 2）具有 兩種抗菌素抗性基因可供作轉化子的選擇記號。堿裂解法216。 “嚴緊型 ”質粒（ stigent發(fā)生錯讀 在霉菌、藍藻、酵母和一些動植物細胞中也發(fā)現了質粒，目前對細菌的質粒研究得比較深入，特別是大腸桿菌的質粒。載體概念：n 在基因工程中，攜帶目的基因進入宿主細胞進行擴增和表達的工具。Characteristics of vectors for gene cloningMCSMarkerForeignp大腸桿菌的質粒主要有 F質粒（ F因子）、 R質粒（抗藥性因子）和 Col質粒（大腸桿菌素因子）三種。?內酰胺環(huán)氯霉素（ Cml） 蛋白質合成 修飾 Kan失活鏈霉素（ Sm） plasmid）： 拷貝數為 13；“松弛型 ”質粒（ relaxed 接合型質粒分子量大嚴緊型復制 煮沸裂解法（三）質粒載體的改造 策略⑴ 去掉非必需的 DNA區(qū)段⑵ 減少限制性內切酶的酶切位點的數目⑶ 加入易于撿出的選擇性標記基因氨芐青霉素抗性（ Ampr）四環(huán)素抗性（ Tetr)新霉素抗性（ Neor）氯霉素乙酰轉移酶（ CAT）卡那霉素抗性（ Kanr）⑷ 對質粒進行安全性改造，要求質粒不能隨便轉移。 對比兩個平板上的菌落，凡在 Tc平板上生長而在 Ap平板上不能生長的菌落則是重組質粒轉化子克隆，挑選陽性克隆，分離出重組質粒。pUC質粒載體1987年， 用 MCS技術在 pBR322基礎上構建的。這樣一來，含有功能性完整的 LacZ’pGEM3Z216。phage)： 能在宿主細胞內復制增殖，產生許多子代噬菌體，并最終裂解細菌。一個空斑系由一個噬菌體復制增殖并裂解細菌后形成，稱為 噬菌斑 (plaque),不同噬菌體噬斑的形態(tài)與大小不盡相同。大腸桿菌的 l 噬菌體 DNAlDNA載體的構建： 縮短長度 野生型 lDNA包裝的上限為 51kb，本身長度為 ，只有當插入的外源 DNA片段不大于 ，才能被包裝成有感染力的噬菌體顆粒。含有完整標記基因的 l載體進入受體細胞后，建立溶原狀態(tài)，細菌生長緩慢，形成渾濁斑；當外源 DNA插入到標記基因中，基因滅活， l重組分子便進入溶菌循環(huán)，形成透明斑。其 DNA中約有 20kb是非必需區(qū)段。超速離心，沉淀噬菌體 Charon　 0Charon–100n 柯斯質粒（ cosmid） =cos序列 +質粒。sequence)*b)鏈 ,成為雙鏈復制型 DNA(RFDNA),同時在宿n M13DNA在宿主菌內既可以是單鏈也可以是雙鏈。 1992年在大腸桿菌的 F因子（大小約100kb）的基因礎上構建。酵母人工染色體載體(yeastCEN） leu 2克隆外源 DNA正常酵母人工染色體含有：*?3），在缺口中形成三鏈結構．花椰菜花斑病病毒 DNA缺口的結構缺口 1： GA ATTT TTT AA 5’ 3’ GC ATTT TTT AA 5’ 5’ CGCT TAAAAAATT 3’缺口 2： 5’ GGTTGATTACTCGAGCC 5’ GGTTGATTACTCGAG AA 3’ 3’ CCAACTAATGAGCTCGGTT 5’缺口 3： 5’ TCCAATAGTCT TC TTTTT CAG 5’ TCCAATAGTCT TC TTTTT G AA 3’ 3’ AGGTTATCAGAAGAAAAACTCTT 5’ 　 CaMVORF長度為 RNA的啟動子．VI之間，長度為 60bp，II和 Xho擴大了 CaMV的正常宿主范圍ORF40， SV40) 1)SV40DNA編碼兩個基因區(qū)，早期轉錄區(qū)和晚期轉錄區(qū)，分別以相反的方向轉錄 .SV40基因轉錄圖SV40SV40DNA的轉錄、復制與增殖 SV40保留完整的 T抗原基因 .c)RNA編碼病毒的全部遺傳信息，兩條較小的 RNA分子為宿主細胞的tRNATrp．38,pcoslEMBL,Chromosome) 環(huán)狀≈3002023 三月 21三月 21Thursday, March 11, 2023n 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 2023/3/11 20:43:4820:43:4811 March 2023n 1做前，能夠環(huán)視四周；做時，你只能或者最好沿著以腳為起點的射線向前。 。勝人者有力，自勝者強。 11 三月 20238:43:48 下午 20:43:48三月 21n 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 2023/3/11 20:43:4820:43:4811 March 2023n 1空山新雨后，天氣晚來秋。 三月 21三月 21Thursday, March 11, 2023n 很多事情努力了未必有結果，但是不努力卻什么改變也沒有。 三月 2120:43:4820:43Mar2111Mar21n 1故人江海別，幾度隔山川。(MammalianoBAC系列YACpCV3z等 RNA鏈帶有兩段相同的 r序列的非編碼區(qū)，分別位于 5’末端和 3’末端 .RSV病毒 RNA分子結構（非編碼序列）　 被膜基因　聚合酶基因　抗原基因　2） RSV病毒的復制與原病毒 DNA的轉錄翻譯3)反轉錄病毒克隆載體構建策略 a）從感病細胞中分離原病毒 DNA.40SV40病毒 DNA進入細胞核Taq2759IHae346IIORF*突變體之間發(fā)生重組 ,重新產生野生型 CaMV 混合載體系統將 CaMVDNA整合到 Ti質粒 DNA分子上 ,使新的載體同時具有 CaMV和 Ti載體的特性 .共同感染BS） DNA的部分酶切位點④ CaMVDNA克隆載體的構建 基本策略和要求 * 利用病毒對宿主細胞感染的特性 * 利用 DN