新型蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析手段-氫氘交換質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)展(完整版)
【正文】 點(diǎn)。要避免回交需要做到兩點(diǎn)：盡量縮短液質(zhì)分析時(shí)間和保證液質(zhì)分析中的溫度和pH為最低回交反應(yīng)系數(shù)所要求的環(huán)境。沃特世公司自2005年起，針對(duì)以上難點(diǎn)不斷進(jìn)行攻關(guān)，推出了目前唯一商業(yè)化的全自動(dòng)氫氘交換質(zhì)譜系統(tǒng)解決方案——nanoACQUITY UPLC174。隨著氫氘交換質(zhì)譜技術(shù)的不斷發(fā)展，它正在成為結(jié)構(gòu)生物學(xué)家及生物藥物研發(fā)的重要手段。除樣品制備外，氫氘交換質(zhì)譜法的主要過程包括：交換反應(yīng)、終止反應(yīng)、將蛋白快速酶切為多肽、液相分離、質(zhì)譜檢測、數(shù)據(jù)解析。自1991年第一篇研究論文發(fā)表起，氫氘交換質(zhì)譜技術(shù)不斷發(fā)展，已經(jīng)成為結(jié)構(gòu)生物學(xué)及質(zhì)譜技術(shù)中一個(gè)非常重要的應(yīng)用領(lǐng)域[6]。nanoACQUITY UPLC HDExchange System完全通過智能機(jī)械臂，精確完成交換、終止交換、進(jìn)樣、酶切等一系列實(shí)驗(yàn)過程，而且始終保證各個(gè)步驟所需不同的溫度環(huán)境。因?yàn)榻粨Q率判斷需要通過對(duì)發(fā)生交換的多肽進(jìn)行定量，毫無疑問因疊加的而混亂的質(zhì)譜數(shù)據(jù)將極大的影響對(duì)質(zhì)譜峰的準(zhǔn)確定量。除氫氘交換技術(shù)外，SYNAPT質(zhì)譜系統(tǒng)在蛋白質(zhì)復(fù)合體結(jié)構(gòu)研究中也是獨(dú)具特色，已有多篇高質(zhì)量應(yīng)用文獻(xiàn)發(fā)表[13,14,15]。 沃特世的nanoACQUITY UPLC HDExchange System為氫氘交換質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)提供了前所未有的簡易的解決方案，強(qiáng)有力地推動(dòng)了氫氘交換技術(shù)在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及動(dòng)態(tài)變化研究、蛋白質(zhì)相互作用位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)、蛋白表位以及活性位點(diǎn)鑒定方面的應(yīng)用，正在成為眾多結(jié)構(gòu)生物學(xué)科學(xué)家和生物制藥企業(yè)必不可少的工作平臺(tái)。 Measurements. J Am Soc Mass Spectrom. 2011, in press。 Sons, Inc. 2007, 4561(3) Tiyanont K, Wales TE, AsteAmezaga M, et al. Evidence for increased exposure of the Notch1 metalloprotease cleavage site upon conversion to an activated conformation. Structure. 2011, 19, 546554(4) Heck AJ. Native mass spectrometry: a bridge between interactomics and structural biology. Nat Methods. 2008, 5, 927933.(5) Esther van Duijn, Albert . Heck. Mass spectrometric analysis of intact macromolecular chaperone plexes. Drug
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