【正文】 日內(nèi)和日間精密度結(jié)果（ n = 3 ） 日內(nèi)精密度 R S D (% ) 日間精密度 R S D (% ) 編號(hào) 濃度 (181。 0 . 1 1 6 . 4 4 177。 0 . 5 2 ND ND ND 句容 3 . 2 5 177。 0 . 1 5 1 4 . 7 8 177。 0 . 0 5 3 . 8 4 177。 0 . 1 1 8 . 2 6 177。 0 . 1 0 （ 1 ） 佛手柑內(nèi)酯 ，（ 2 ） 歐前胡素 ，（ 3 ） 蛇床子素 ，（ 4 ） 2’ 乙酰白芷素 ，（ 5 ）歐山芹素 ，（ 6 ） O 乙酰哥倫比亞內(nèi)酯 ND ： 未檢測(cè) 到 （ n o t d e te c te d ） 105 不同來(lái)源蛇床子藥材的含量測(cè)定 流動(dòng)相：乙腈 10 mM醋酸銨水溶液 （ 用醋酸調(diào)節(jié) pH至 ） （ 體積比為 50：50） ；進(jìn)樣量： 40 nL；分離電壓 6 kV；反壓： 1500 psi；流速 mL/min；反壓 1500 psi；紫外檢測(cè)波長(zhǎng) 320 nm。 0 . 1 5 4 . 0 1 177。 0 . 2 1 7 . 8 6 177。 0 . 4 9 ND ND ND 商河 2 . 9 4 177。 0 . 0 9 5 . 3 4 177。 0 . 1 4 1 2 . 1 4 177。 SD 4 177。 樣品：蛇床子藥材（產(chǎn)地 浙江臨安 ） 表 2 自制新型填充柱保留時(shí)間（ t R ）、保留因子（ k ）和柱效的比較（ N ） 重現(xiàn)性 (R S D % , 3 c o l u m n s , n = 1 2 ) 香豆素 t R k N 佛手柑內(nèi)酯 4 . 5 3 5 . 8 7 6 . 0 3 歐前胡素 4 . 1 5 4 . 9 3 5 . 4 1 蛇床子素 3 . 7 8 4 . 5 8 4 . 7 8 實(shí)驗(yàn)條件同圖 3 。 （ 1） 佛手柑內(nèi)酯 ， （ 2） 歐前胡素 ，（ 3） 蛇床子素 ， （ 4） 2’ 乙酰白芷素 ， （ 5） 歐山芹素 ， （ 6） O乙酰哥倫比亞內(nèi)酯 。 ? 常規(guī)的填充柱在柱子兩端燒結(jié)塞子以固定填料，燒塞不好將導(dǎo)致在使用中易產(chǎn)生一系列問題： ? 塞子的重現(xiàn)性不好 ? 柱子在燒塞處易折斷 ? 燒塞處峰擴(kuò)展和易形成氣泡等 ? 本文在 pCEC系統(tǒng)上使用一種改進(jìn)后的電色譜填充柱，它的出口端用一段整體柱作為塞子代替?zhèn)鹘y(tǒng)燒結(jié)的塞子而進(jìn)口端則為無(wú)塞子的開口端。 知母及虎杖藥材色譜指紋圖譜研究，黃晟，第二軍醫(yī)大學(xué)碩士論文， 2022 68 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳儀 69 一、毛細(xì)管電泳系統(tǒng)的基本結(jié)構(gòu) 70 二、進(jìn)樣系統(tǒng) 電動(dòng)進(jìn)樣、壓力進(jìn)樣、擴(kuò)散進(jìn)樣 + 電動(dòng)進(jìn)樣 進(jìn)樣量 Qin = ?r2c0(?ef +?os)E? 優(yōu)點(diǎn)： 普適方法 可完全實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化 缺點(diǎn)： 存在歧視效應(yīng) 71 壓力進(jìn)樣 進(jìn)口端加壓 出口端減壓 虹吸作用 ? ????PLrScQ in ??840HgP ??? ?虹吸進(jìn)樣 緩沖液 的密度 液面落差 重力 加速度 優(yōu)點(diǎn)： 無(wú)組分歧視效應(yīng) 缺點(diǎn)： 選擇性差 73 擴(kuò)散進(jìn)樣 毛細(xì)管插入樣品溶液，管口界面存在 濃度差 ，樣品分子向管內(nèi)擴(kuò)散，將樣品引入毛細(xì)管中。 53 緩沖液濃度對(duì)電泳分離的影響 54 (五 )添加劑的影響 有三類重要的添加劑： ? 荷電表面活性劑，非電解質(zhì)高分子添加劑，功能性添加劑 牛血清白蛋白多肽的 CZE快速鑒定 55 56 57 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜（ MECC）分離示意圖 58 59 毛細(xì)管電色譜（ CEC） 60 Nonaqueous capillary electrophresis (NACE) ? 非水毛細(xì)管電泳是在 有機(jī)溶劑為主要的非水體系 中進(jìn)行的毛細(xì)管電泳 ? 有機(jī)溶劑中要加入電解質(zhì) ? 非水溶液中直接測(cè)得的 pH值稱為表觀 pH值，與水溶液中的 pH概念不同，即便表觀 pH與水中一樣，解離常數(shù)也會(huì)有很大的差別 61 示例：虎杖藥材 NACE指紋圖譜研究 ? 虎杖為廖科植物虎杖的干燥根莖和根，用藥歷史悠久，具有祛風(fēng)利濕，散瘀定痛，止咳化痰之功效，傳統(tǒng)憂郁關(guān)節(jié)痹痛，濕熱黃疸等。 概而言之 ， 在一定的范圍內(nèi)柱效隨電壓的最大而增大； 過了極點(diǎn)以后 ，隨著電壓的增高 ， 焦耳熱的影響加劇 ， 柱效反而下降 。 ? 焦耳熱大小取決于 操作功率 的大小，與 毛細(xì)管尺寸 、 緩沖液電導(dǎo) 及 電場(chǎng)強(qiáng)度 有關(guān)。 （ 2）加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向； 加入不同陽(yáng)離子表面活性劑來(lái)控制電滲流。 22 雙電層中處于擴(kuò)散層中的陽(yáng)離子在毛細(xì)管內(nèi)壁負(fù)離子表面形成一個(gè)圓筒形的陽(yáng)離子塞流，而陽(yáng)離子又是溶劑化的，在外加電場(chǎng)作用下，水化陽(yáng)離子攜帶溶劑一齊向陰極遷移，形成電滲流。 電泳技術(shù)：將電泳應(yīng)用于物質(zhì)的分離，就形成了電泳技術(shù)或方法 。1 毛細(xì)管電泳法 Capillary Electrophoresis 2 ? 經(jīng)典電泳最大局限性在于難以克服由于高電壓引起的焦耳熱。 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ _ _ _ _ _ _ _ _ ＋ ＋ 一、電泳和電泳淌度 15 16 電泳為帶電粒子在電場(chǎng)作用下在緩沖溶液中的定向移動(dòng) 。 電滲流 Electroosmotic flow, EOF 23 ? 電滲淌度 ?os ：也稱電滲率，即單位電場(chǎng)下的電滲速度 ?os = uos/ E 電滲淌度 ?os可用下式表示，即： ???? ?os一般地，電滲流速度是電泳流速度的 57倍，其中石英毛細(xì)管中電滲流 流向陰極。 加入陰離子表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（ SDS），可以使壁表面負(fù)電荷增加， zeta電勢(shì)增大，電滲流增大； （ 3）加入有機(jī)溶劑如甲醇、乙腈，使電滲流增大。 用物理方法直接降溫或恒溫 41 3. 吸附 ? 在毛細(xì)管電泳中，吸附是指毛細(xì)管管壁對(duì)被分離物質(zhì)粒子的作用。 毛細(xì)管電泳分離柱效方程： DLVLn2dap??49 (二 )緩沖液種類選擇 緩沖液的選擇通常須遵循下述要求： pH范圍內(nèi)有很好的緩沖容量 。 ? 主要活性成分是蒽醌和二苯乙烯苷類。 進(jìn)樣量 Qin = 400c0S(2D?)1/2 普適性進(jìn)樣方法 無(wú)歧視效應(yīng) 74 三、溫度控制 風(fēng)冷控溫 液冷控溫 商品儀器常用氟代烷烴作冷卻劑 75 四、檢測(cè)系統(tǒng) ? 紫外檢測(cè)器 ? 柱上檢測(cè)：簡(jiǎn)單方便 ? 柱后檢測(cè)：適合于 CEC、 CGE等采用填充灌的分離模式 ? 激光誘導(dǎo)熒光 ? 由激光器、光路系統(tǒng)、檢測(cè)池和光電轉(zhuǎn)換器件等部分組成。 90 加壓毛細(xì)管電色譜儀搭建 91 出口端整體柱制備 聚合液 冰浴超聲震蕩 5 min mL GMA mL 環(huán)己醇 + mL 十二醇 4 mg AIBN EDMA 聚合液 充分溶解后 氮?dú)獬?3 min后 約 20cm 50 ℃ 恒溫水浴箱內(nèi)反應(yīng) 12 h 甲醇 水 除去致孔劑、殘留的反應(yīng)試劑、反應(yīng)產(chǎn)生的低聚合度物質(zhì)及其他可溶性化合物 92 毛細(xì)管色譜柱的填充 采用電滲法將填料混懸液充入 約 2mm作為塞子 燒去聚亞酰胺層作為窗口 已制備好的整體柱端 空口端 93 自制毛細(xì)管色譜填充柱示意圖 進(jìn)口 填充柱 塞子 檢測(cè)窗 出口 94 樣品溶液及標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制 ? 精密稱取佛手柑內(nèi)酯 、 歐前胡素 、 蛇床子素 、 歐山芹素 、 2’乙酰白芷素和 O乙酰哥倫比亞內(nèi)酯及內(nèi)標(biāo)安定一定量 ， 分別置 10 mL量瓶中 ， 加甲醇溶解并稀釋至刻度 ， 搖勻 ， 定容成佛手柑內(nèi)酯和2’乙酰白芷