【正文】 ....................................................... 5 水 解 和 衍 生 化 ...................................................................... 5 樣 品 的 凈 化 ............................................................................... 6 液 液 萃 取 （ LLP） ............................................................... 6 基 體 固 相 分 散 技 術 （ MSPD） ............................................. 6 固 相 萃 取 技 術 （ SPE） ........................................................ 7 在 線 透 析 和 微 量 富 集 技 術 ................................................... 7 硝基呋喃類物質及其代謝物的檢測方法 ..................................................... 8 色 譜 分 析 方 法 ........................................................................... 8 高 效 液 相 色 譜 法 (HPLC) .................................................... 8 聯(lián) 用 技 術 分 析 法 .................................................................. 10 分 光 光 度 法 ............................................................................... 12 免 疫 分 析 法 （ IA） .................................................................... 13目 錄 II 總 結 .......................................................................................... 14第二章 實驗方法 ......................................................................................... 17 原理 ................................................................................................................ 17 儀器和設備 .................................................................................................... 17 試劑與溶液 .................................................................................................... 18 主 要 試 劑 .................................................................................. 18 主 要 溶 液 的 配 制 ...................................................................... 18 標 準 物 質 和 標 準 溶 液 ............................................................... 19 實驗方法 ........................................................................................................ 20 試 樣 制 備 與 保 存 ...................................................................... 20 分 析 步 驟 .................................................................................. 20 洗 樣 .................................................................................... 20 水 解 .................................................................................... 20 提 取 和 凈 化 ......................................................................... 20 儀 器 參 數(shù) 與 設 定 ................................................................. 21 液 相 色 譜 串 聯(lián) 質 譜 測 定 ..................................................... 22 定 性 方 法 ............................................................................. 22 定 量 方 法 ............................................................................. 23第三章 結果計算及討論 ............................................................................... 24 結果計算 ........................................................................................................ 24 總離子流圖和保留時間 ................................................................................ 24 樣品衍生條件的優(yōu)化 .................................................................................... 25 凈化條件的選擇 ............................................................................................ 26 質譜條件的優(yōu)化 ............................................................................................. 26 檢測限、測定低限、回收率和精密度 ......................................................... 29 回 收 率 統(tǒng) 計 .............................................................................. 29 重 復 性 統(tǒng) 計 .............................................................................. 33 內標法定量 .................................................................................................... 38 標準曲線圖譜及線性范圍 ............................................................................ 39目 錄 III 標 準 曲 線 圖 譜 .......................................................................... 39 線 性 范 圍 .................................................................................. 41 質量控制及注意事項 .................................................................................... 41 質 量 控 制 .................................................................................. 41 注 意 事 項 .................................................................................. 42結論 ............................................................................................................. 44參考文獻 ...................................................................................................... 45致謝及聲明 .................................................................................................. 48 目 錄 IV 第一章 引 言 0 第一章 引 言 硝基呋喃類藥物的性質和使用硝基呋喃類藥物(Nitrofurans)是人工合成的具有5硝基呋喃基本結構的廣譜抗菌藥物，對大多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌、某些真菌和原蟲均有作用，在低濃度下對上述病原體有抑制作用，高濃度則有殺滅作用，其抗菌作用機理是干擾細菌體內的氧化還原酶系統(tǒng)，使細菌代謝紊亂 [1]。呋喃唑酮用于防治畜禽腸道感染，如兔球蟲病、豬痢疾、禽白痢、火雞黑頭病等 [2]。通過對小白鼠和大白鼠的毒性研究表明，呋喃唑酮可以誘發(fā)乳腺癌和支氣管癌，并且有劑量反應關系；高劑量飼喂食用魚和觀賞魚，可誘導魚的肝臟發(fā)生腫瘤；繁殖毒性結果表明，呋喃唑酮能減少精子的數(shù)量和胚胎的成活率。 硝基呋喃類藥物的管理對策由于硝基呋喃類藥物殘留危害嚴重，美國、日本和歐盟等國家和地區(qū)紛紛采取措施，嚴加監(jiān)管。韓國 2022 年版《食品公典》規(guī)定豬肉中不得檢出呋喃唑酮。（2）加強獸藥生產經營管理。（5）加強獸藥殘留監(jiān)控。在樣品的提取和去蛋白過程中，有機溶劑也能從內源性大分子中萃取非共價鍵結合的殘留物。同樣地，呋喃西林、呋喃它酮和呋喃妥因的蛋白結合代謝物，經酸水解，產生游離代謝產物 SEM、 AMOZ 和 AHD。 液液萃?。↙LP ）液液萃取是最經典、常用的凈化手段，可以用有機溶劑將待測物從溶液中萃取出來，或者將干擾物質從有機相或水相萃取物中除去。用固相萃取柱可以從共萃取物中凈化和濃縮硝基呋喃萃取物。此外，高通量的 96 孔板，可滿足處理大量樣品的要求。近年來各種色譜聯(lián)用技術分析法在硝基呋喃類抗生素的代謝物的檢測中應用較多，發(fā)展迅速，主要是與質譜聯(lián)用（包括串聯(lián)質譜）。葛寶坤等 [13]采用固相萃取(SPE)前處理凈化技術，高效液相色譜(配有紫外檢測器) 法快速測定雞肉、魚、蝦中呋喃它定、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮藥物殘留量，4種硝基呋喃類藥物在雞肉、魚、蝦樣品中3個不同水平的添加回收率(n=7) 為87%~102%；相對標準偏差(RSD)%~%；工作曲線的線性范圍為5μg/kg~100μg/kg；呋喃它定、呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮的檢出限分別為2μg/kg 。其中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因測定結果的相關系數(shù)r分別為第一章 引 言 9 、(Height) 、 (Area)。9)%。LCMS 法可以利用待測分子的結構來定性，可以排除酶聯(lián)免疫方法和HPLC法檢測的假陽性結果，用以確證檢測結果。在溶解提取物用鋁土柱凈化后，用HPLCUV篩選可能含有呋喃唑酮的樣品，LCMS 方法用來確定證實陽性樣品。（2）液相色譜串聯(lián)質譜法(LCMS/MS)最近幾年用于檢測硝基呋喃類抗生素的代謝物的LCMS/