【正文】 3 儀器與材料 （1）培養(yǎng)基：500ml三角瓶中分裝300ml黃豆餅粉瓊脂，18180mm試管分裝4ml黃豆餅粉浸汁，300ml三角瓶分裝150ml細菌培養(yǎng)基，150ml三角瓶分裝50ml馬鈴薯培養(yǎng)基。5 結果與討論將實驗結果填入下表。 （5）鋪平板： 10－3～10－5稀釋液，置于培養(yǎng)基平板中央。 （2）土樣預處理：新鮮土樣應適當風干，并噴施小劑量殺蟲劑以防培養(yǎng)過程中蟲卵發(fā)育的影響。若以常規(guī)方法進行分離，得到的幾乎全部是鏈霉菌。目 錄綜合實驗一 土壤中稀有放線菌的分離和純化及抗生菌的體外抗菌鑒定綜合實驗二 玉米淀粉液化、糖化及酒精發(fā)酵綜合實驗三 甜酒的釀造綜合實驗一 土壤中稀有放線菌的分離和純化及抗生菌的體外抗菌鑒定 一 土壤中稀有放線菌的分離和純化1 實驗目的 了解采集土樣的要求和方法，掌握由土壤中分離稀有放線菌的基本原理和操作技術，學習并掌握土壤稀釋法和微生物的純培養(yǎng)技術。然而，當采用加熱處理土樣、選用特殊培養(yǎng)基或添加某種抗生素等方法時，均可提高稀有放線菌的獲得率。 （3）制備平板：每組取10套無菌培養(yǎng)皿，將冷卻至50℃左右的各培養(yǎng)基，分別倒入平皿，每皿約15～20ml。然后，再用無菌的玻璃刮鏟均勻涂布，靜置10min。 思考題 在分離土壤放線菌時為什么要選用多種培養(yǎng)基？ 在培養(yǎng)基中添加K2Cr2O7有何作用？ 二 抗生菌的體外鑒別1 實驗目的了解抗生素產(chǎn)生菌體外篩選法的原理，學習并掌握抗生菌的鑒別方法。 （2）試驗菌： 枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis） 大腸桿菌（Escherichia coli） 金黃色葡萄球菌（Staphlococcus aureus） 深紅酵母（Ruodotorula rubra） （3）待測菌株： 瓊脂培養(yǎng)物：將融化的黃豆餅粉瓊脂倒入無菌培養(yǎng)皿，制成平板。每1種指示菌3個重復，并注明指示菌及測定菌株的位置。 (4) 用無菌鑷子取無菌的圓濾紙片，蘸取各測定菌株的發(fā)酵濾液，放入指示菌平 板的相應位置上，每1測定菌株3個重復。發(fā)酵生產(chǎn)中，淀粉水解糖液的質量，與生產(chǎn)菌的生長速度及產(chǎn)物的積累直接相關。淀粉受到α淀粉酶的作用后，其碘色反應發(fā)生如下變化：藍→紫→紅→淺紅→不顯色(即碘原色)。（C6H10O5)n+H2O nC6H12O6 162 18 180淀粉糖化實際收率的計算：淀粉轉化率：淀粉葡萄糖轉化率是指100份淀粉中有多少份淀粉被轉化為葡萄糖。一般液化DE值應控制在1218％。3 實驗儀器、設備和材料（1）1000ml燒杯（2）真空過濾裝置（3）烘箱（4）量杯（5）量筒（6）分光光度計（7）水浴鍋（8）滴定管（9）電爐（10）白瓷板（11）三角瓶（12）阿貝折光儀（13）玉米粉（14）α淀粉酶（15）糖化酶（16）pH試紙（17）酒精活性干酵母（18）酒精蒸餾裝置及酒精計4 實驗步驟 淀粉水解糖的制備 淀粉的液化配制30％的淀粉乳，加入氯化鈣(％)，在3個1000ml燒杯中分別加入淀粉乳700ml并分別加入液化酶12U/g淀粉、16U/g淀粉、20U/g淀粉，在劇烈攪拌下，先加熱至72℃，保溫15min，再加熱至80℃~90℃（視酶的特性而定），并維持30min，以達到所需的液化程度(DE值：1518％)，碘反應呈棕紅色。 酒精發(fā)酵 酒精酵母的活化：稱取2g蔗糖，溶于100ml經(jīng)煮沸并冷卻的水中，加入1g活性干酵母于培養(yǎng)箱中30℃活化2hr，備用。試樣的水分一般是指在100℃左右直接干燥的情況下，所失去的總量。斐林試劑由甲、乙液組成。 20％鹽酸溶液量取20毫升濃鹽酸，緩慢倒入80毫開水中。濾紙過濾濾液用500毫升容量瓶接收，用水充分洗搽殘渣，然后用水定容至刻度，搖勻，為供試糖液。另外，斐林試劑中加入亞鐵氰化鉀(黃血鹽)，使紅色氧化亞銅沉淀生成可溶性的復鹽，反應終點更為明顯。 計算式中 V0：斐林試劑標定值(毫升)V：斐林試劑測定值(毫升)C：標準葡萄糖溶液濃度(克/毫升)n：試樣稀釋倍數(shù)v1：所取試樣稀釋液體積(毫升) 說明(1) 滴定速度、三角瓶壁厚度和熱源的穩(wěn)定程度等，對測定精密度影響很大。 酒精含量測定采用國標方法——蒸餾法。 稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4 操作步驟 待測酶液的制備 ，供測定用。（3）測定時照明采用40W日光燈，燈與白磁板的間距以60 cm為宜。(2)標定：取在120℃．精密稱量。在甲管中加入酶液2ml(酶活總量約100170單位)，立即記時間，搖勻。計算淀粉轉化率和淀粉出酒率。 甜酒釀是米酒曲的最初產(chǎn)品，它是各類酒類制作的雛形，除了食用外，還有兩種用途，一是作為料酒使用，如川式火鍋，豆瓣醬中添加；二是制作饅頭，如河南周口的米酒饅頭、浙江金華的米酒饅頭。然后再通過酵母的酒精發(fā)酵作用和細菌的乳酸發(fā)酵作用，就得到了風味各異的醬品。12H2O), (C6H8O7取2％200mm試管中,在60℃恒溫水浴中預熱4～5min。 n——稀釋倍數(shù)。在發(fā)酵過程中根霉產(chǎn)生糖化酶，首先將糯米中的淀粉分解成葡萄糖，蛋白質分解成氨基酸，接著少量的酵母又將葡糖糖經(jīng)糖酵解途徑轉化成酒精。：發(fā)酵完成后再移植到較低溫度處放置，以防止發(fā)酵過渡和變質。得線形回歸方程： Y = Y：餾出液中乙醇的百分含量 （V/V） X：吸光度A ：補嘗參數(shù)表1 %乙醇序列稀釋度稀釋編號0＃1234567%乙醇ml蒸餾水ml圖1 乙醇濃度OD值關系曲線 酒醅中乙醇含量的計算： C1：酒醅中乙醇的百分含量，V/M。 %亞鐵氰化鉀溶液：[K4Fe(CN)6 堿性酒石酸銅溶液的標定： 準確吸取堿性酒石酸銅甲和乙液各5ml，置于250ml錐形三角瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9ml葡萄糖標準溶液，加熱至沸（控制在2分鐘內加熱至沸），趁沸以每2秒1滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標準溶液，直至溶液的藍色剛好退去為終點，記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積。平均= （2） 樣品中總糖的測定 a. 轉化：準確吸取上述所制得的樣品溶液50ml于100ml的容量瓶中，加入6mol/L鹽酸5ml，搖勻，置于68~70℃的恒溫水浴鍋上加熱15分鐘，取出置流水下迅速冷卻至室溫，加2滴甲基紅指示劑，以20%的氫氧化鈉溶液中和至中性，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。 2. 氫氧化鈉標準溶液（） 用小燒杯在粗天平上稱取固體氫氧化鈉（AR）1g，加適量水使氫氧化鈉全部溶解，將溶液傾入另一清潔的試劑瓶中，用蒸餾水稀釋至250ml，以橡皮塞塞住瓶口，充分搖勻。——滴定消耗標準NaOH溶液體積，ml； m——樣品質量或體積，g或ml； V0——樣品稀釋液總體積，ml； V1——滴定時吸取的樣液體積，ml； K——換算為主要酸的系數(shù)，即1毫摩爾氫氧化鈉相當于主要酸的克數(shù)。KMV0V1 1 23總酸度%= 注意事項： 測定過程中，如果被測樣品濾液有顏色，可以在滴定前往錐形瓶中加入同體積的新煮沸并冷卻的蒸餾水稀釋。～（）于250ml錐形三角瓶中，加入100ml蒸餾水溶解，加3滴酚酞指示劑，用以上配置好的氫氧化鈉標準溶液滴定至紅色。 結果及處理 按下式計算出待測樣品中還原糖及總糖的含量： 還原糖(以葡萄糖計%) = 總糖(以轉化糖計%）= 式中：F——相當于10毫升堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質量，mg； m——樣品質量，g 。 式中：F——10ml堿性酒石酸銅溶液相當于葡萄糖的質量，mg； c——標準葡萄糖溶液的濃度，mg/ml； V——標定時消耗葡萄糖標準溶液的總體積，ml。 %葡萄糖標準溶液：（）經(jīng)98～100℃干燥至恒重的無水葡萄糖，加水溶解后移至1000ml的容量瓶中，加5ml鹽酸（防止微生物生長），并用水稀釋至1000ml。在加熱條件下，以次甲基藍作為指示劑，用樣液滴定,樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，生成紅