【正文】 黃豆餅粉培養(yǎng)液，作好標(biāo)記，28℃下振蕩培養(yǎng)7天。 （5）其它：接種用具，游標(biāo)卡尺，記號筆，搖床。 （2）取9套無菌培養(yǎng)皿，向每套培養(yǎng)皿中分別加入1ml試驗(yàn)菌懸液，然后加入約12ml冷卻至45℃左右的細(xì)菌培養(yǎng)基，迅速在實(shí)驗(yàn)臺上搖勻，制成指示菌平板。 （3）用無菌打孔器將待測菌株和對照菌的黃豆餅粉瓊脂培養(yǎng)物切塊，每種培養(yǎng)物9塊。 （5）靜置20min后，放入恒溫箱，37℃下培養(yǎng)18～24h。 濾紙片法(1) 向深紅酵母菌斜面中加入5ml無菌水，制成菌懸液。 (3)過濾各測定菌株的發(fā)酵液。(5) 靜置20min后，28℃下培養(yǎng)2天。 5 結(jié)果 將實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果填入下表，抑菌圈直徑以mm來表示。掌握粗淀粉含量和還原糖、酒精含量的化學(xué)測定方法。一般將淀粉水解為葡萄糖的過程稱為淀粉的糖化，所制得的糖液稱為淀粉水解糖。 可以用來制備淀粉水解糖的原料主要有薯類(木薯、甘薯)淀粉、玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉等，根據(jù)原料淀粉的性質(zhì)及采用的水解催化劑的不同，水解淀粉為葡萄糖的方法可分為酸解法、酸酶結(jié)合法和酶解法。 酶解法是指利用淀粉酶將淀粉水解為葡萄糖的過程。淀粉的液化和糖化都是在酶的作用下進(jìn)行的，故也稱為雙酶水解法。 酶法液化原理淀粉的酶法液化是以α淀粉酶為催化劑，該酶作用于淀粉的α1,4糖苷鍵，從內(nèi)部隨機(jī)地水解淀粉，從而迅速將淀粉水解為糊精及少量麥芽糖，所以也稱內(nèi)切淀粉酶。酶法液化以生產(chǎn)工藝不同分為間歇法，半連續(xù)和連續(xù)式；液化設(shè)備有：管式、罐式、噴射式。根據(jù)酶制劑的耐溫性分為中溫酶法、高溫酶法、或中溫酶和高溫酶混合法。 酶法糖化原理淀粉的糖化是以糖化酶為催化劑，該酶從非還原末端以葡萄糖為單位順次分解淀粉的α1，4糖苷鍵或α1，6糖苷鍵。淀粉糖化的理論收率：因?yàn)樵谔腔^程中，水參與反應(yīng)，％。淀粉轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：DE值：用DE值表示淀粉水解的程度或糖化程度。DE值計(jì)算：還原糖用裴林氏法或碘量法測定，濃度表示：葡萄糖g/100ml糖液；干物質(zhì)用阿貝折光儀測定，濃度表示：干物質(zhì)g/100g糖液。液化DE值與糖化DE值的關(guān)系：液化程度應(yīng)控制適當(dāng)，太低或太高均不利。故應(yīng)在碘試本色的前提下，液化DE值越低，則糖化液的最高DE值越高。酶制劑用量與糖液DE值的關(guān)系：糖化時(shí)間與糖化酶用量關(guān)系表糖化時(shí)間（h）68101624324872糖化酶用量（U/g淀粉）480400320240180150120100為加快糖化速度，可以提高酶用量，縮短糖化時(shí)間。在實(shí)際生產(chǎn)中，應(yīng)充分利用糖化罐的容量，盡量延長糖化時(shí)間，減少糖化酶用量。利用酒精酵母胞內(nèi)的酒化酶系，葡萄糖被轉(zhuǎn)化為酒精即酒精發(fā)酵。本實(shí)驗(yàn)采用酶法糖化、一次添加間歇式方法進(jìn)行酒精發(fā)酵。液化結(jié)束后，觀察液位，再升溫至100℃，保持1015min，以凝聚蛋白質(zhì)，改進(jìn)過濾。 淀粉的糖化（糖化酶用量對糖化的影響）液化結(jié)束后，同時(shí)迅速降溫至60℃。當(dāng)用無水酒精檢驗(yàn)無糊精存在時(shí)，即為糖化終點(diǎn)，記錄糖化時(shí)間，并將料液加熱至80℃，保溫20min．然后將料液溫度降至6070℃，開始過濾。量取糖液體積；取樣分析還原糖濃度。 清糖液發(fā)酵：%左右，于500ml三角瓶中加入該糖液200ml，用無菌吸管取5ml活化酵母，搖勻，密封三角瓶，置入培養(yǎng)箱中于32℃發(fā)酵24hr后得到發(fā)酵成熟醪，蒸餾，測定酒精含量。液化溫度為85℃，液化時(shí)間為30min，然后冷卻至58~60℃，保溫。（3）發(fā)酵：將糖化醪冷卻至30℃，用無菌吸管接入活化酵母液5ml，搖勻，密封容器，置入培養(yǎng)箱中于32℃發(fā)酵50hr左右后得到發(fā)酵成熟醪，蒸餾，測定酒精含量。樣品干燥的速度取決于這個壓差的大小，在此條件下失去的主要是試樣中的游離水。在此條件下失去的重量不僅是水分，還有微量的揮發(fā)性物質(zhì)。再于相同溫度下干燥1小時(shí)左右，同上操作，直至恒重。對生產(chǎn)過程中的水分快速測定，可采用更高溫度下干燥(如120140℃)或紅外燈下干燥，以縮短分析時(shí)間。 淀粉原料中粗淀粉含量的測定 原理淀粉經(jīng)酸或水解生成葡萄糖：所生成的葡萄糖用斐林試劑測定。甲液為硫酸銅溶液，乙液為氫氧化鈉與酒石酸鉀鈉溶液?；旌蠒r(shí)，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)，生成氫氧化銅沉淀：2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2↓+Na2SO4所生成的氫氧化銅沉淀與酒石酸鉀鈉反應(yīng)，生成酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物，使氫氧化銅溶解：酒石酸鉀納銅絡(luò)合物中二價(jià)銅是一個氧化劑，能使還原糖中羰基氧化，而二價(jià)銅被還原生成一價(jià)的氧化亞銅沉淀：反應(yīng)終點(diǎn)用次甲基藍(lán)指示劑顯示。15H2O)，用水溶解并稀釋至1000毫升，如有不溶物可用濾紙過濾。 2％鹽酸溶液。 20％氫氧化鈉溶液稱取200克氫氧化鈉，用水溶解并稀釋至1000毫升。 ％標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液準(zhǔn)確稱取2克無水葡萄糖(預(yù)先于100~l05℃烘干)，用水溶解，加5毫升濃鹽酸，用水定容至1000毫升。加l00毫升2%鹽酸溶液，輕輕搖動三角瓶，使試樣充分濕潤。取出，迅速冷卻，用20％氫氧化鈉溶液中和至中性或微酸性(用pH試紙?jiān)囼?yàn))。 斐林試劑的校正吸取斐林試劑甲、乙液各5毫升，置入250毫升三角瓶中，加20毫升水，％標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液(％標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液在1毫升以內(nèi))，搖勻，于電爐上加熱至沸，并保持微沸2分鐘?？偤奶橇繛関毫升。加2滴1％次甲基藍(lán)溶液，繼續(xù)用水解糖液滴定至藍(lán)色消失，此滴定操作需在1分鐘內(nèi)完成。其反應(yīng)與粗淀粉測定相似，不同點(diǎn)為斐林試劑甲液中硫酸銅量較小，適用于含糖量較少的試樣。Cu2O+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH (淡黃色) 試劑 斐林試劑甲液：稱取35g硫酸銅，用水溶解并定容至1000ml。 %標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液~105℃烘干的無水葡萄糖，用少量水溶解，加入5ml鹽酸，用蒸餾水定容至1000ml，搖勻。 定糖預(yù)備試驗(yàn)：吸取斐林試劑甲、乙液各5毫升，置入250毫升三角瓶中，加入V1毫升試樣稀釋液(含葡萄糖量約為5~15毫克)%標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，搖勻，以下同標(biāo)定時(shí)操作，總耗糖量為V2毫升。重復(fù)測定兩次，取總消耗標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液體積的平均值V ml。故在標(biāo)定、預(yù)備、正式測定過程中，實(shí)驗(yàn)條件應(yīng)力求一致。~lml內(nèi)，否則應(yīng)重新測定。(4) 滴定至終點(diǎn)藍(lán)色褪去之后，就不應(yīng)再滴定，因四甲基藍(lán)指示劑被還原褪色后，當(dāng)接觸空氣時(shí)，又會被氧化重現(xiàn)籃色。所以用廉愛農(nóng)法定糖時(shí)，必須先用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)還原糖標(biāo)定斐林溶液。用量筒量取成熟發(fā)酵醪100ml置于500ml蒸餾燒瓶中，加入蒸餾水100ml，裝好蒸餾裝置，加熱，保持發(fā)酵成熟醪始終處于微沸狀態(tài)，用100ml量筒收集餾出液100ml，停止蒸餾。 α淀粉酶活力測定 原理 液化型淀粉酶(即α1，4糊精酶，俗稱α淀粉酶)能將淀粉分子鍵的α1，4葡萄糖苷鍵任意切斷成長短不一的短鏈糊精，以及少量麥芽糖和葡萄糖，而使淀粉對碘呈藍(lán)紫色特異反應(yīng)逐漸消失，以該顏色消失的速度計(jì)算酶的活力。 稀碘液取原碘液2m1，加入KI 20g，用蒸餾水溶解定容至500ml，貯于棕色瓶內(nèi)。此溶液需當(dāng)天配制。H2O) (C6H8O7 標(biāo)準(zhǔn)終點(diǎn)色溶液 A液 精確稱取氯化鈷(CoCl B液 精確稱取鉻黑T(C20H 12N2NaO7S)10mg，以蒸餾水溶解定容至100mI。此混合液宜冰箱保存，使用15天后需要重新配制。 測定 取2ml標(biāo)準(zhǔn)終點(diǎn)色溶液滴于白磁板空穴內(nèi)，作為比較顏色的標(biāo)準(zhǔn)。滴于預(yù)先充滿比色稀碘液()的磁扳空穴內(nèi)，當(dāng)穴內(nèi)顏色反應(yīng)由紫色逐漸變?yōu)榧t棕色，與標(biāo)準(zhǔn)終點(diǎn)色相同時(shí)，即為反應(yīng)終點(diǎn)，并記錄時(shí)間t(min)。h）。（2）為統(tǒng)一起見，可溶性淀粉使用同一廠家生產(chǎn)的化學(xué)純試劑。 糖化酶活力測定 原理糖化型淀粉酶（即淀粉α1，4葡萄糖苷酶）有催化淀粉水解的作用，從淀粉分子非還原性末端開始，分解α1，4糖苷鍵生成葡萄糖，反應(yīng)生成的葡萄糖用次碘酸鉀法定量測定，以表示糖化性淀粉酶的活力。3H2O)(CH3COOH)，用蒸餾水溶解，定容至1000m1。 (1)配制：稱取硫代硫酸鈉(Na2S2O3貯于棕色瓶中密封保存，配制后應(yīng)放置一星期標(biāo)定使用。置碘量瓶中，加水50m1使溶解，加碘化鉀2g。在暗處放置10min后用蒸餾水250ml稀釋，用此液滴定至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液3ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失而顯亮綠色。根據(jù)本液的消耗量與重鉻酸鉀的用量，計(jì)算硫代硫酸鈉的當(dāng)量濃度。 稱取碘化鉀(K1)36g，溶解在100m1蒸餾水中，再加入碘(I2)，定容至1000ml貯存于棕色瓶中。吸取10ml待標(biāo)定的碘液放入250m1碘量瓶中，加入1%淀粉指示劑l2滴，繼續(xù)滴定至無色為終點(diǎn)。 1mol/L硫酸溶液，慢慢加入于80 m1蒸餾水中，冷卻后定容至l00ml，搖勻。 2%可溶性淀粉稱取可溶性淀粉2g，然后用少量蒸餾水調(diào)勻，徐徐傾入巳沸的蒸餾水中，煮沸至透明，冷卻定容至l00ml，此溶液需當(dāng)天配制。 測定于甲、乙兩支比色管中(50ml)，分別加入20%，搖勻，40℃的恒溫水浴中預(yù)熱(510min