動物細胞培養(yǎng)hxyppt課件(完整版)
【正文】 3．停止期： 細胞數(shù)量達飽和密度后，細胞停止增殖，進入停止期，也稱 平臺期 。 33 34 ? – 胰蛋白酶 – EDTANa溶液 – 膠原酶 ? ： 用于終止消化酶的作用 – 血清 – 大豆胰酶抑制劑 35 ? pH調整液 ： 常用的有： ％、 ％、％的 NaHCO3溶液和 HEPES溶液（二羥乙基哌嗪乙烷磺酸）等。 38 ? （ 2）胚胎提取液 ： 雞胚、牛胚提取液，能促進細胞生長。合成培養(yǎng)基成分已知，便于對實驗條件的控制。 ? （ 3）無機離子：包括大量和微量無機離子，通常也可由血清提供。 ? 主要用于：研究細胞生長因子、單克隆抗體的制備、以及細胞分泌產(chǎn)物研究 43 ? （ 1）基礎培養(yǎng) 液 ? 根據(jù)不同培養(yǎng)細胞選擇合適的合成培養(yǎng)基作為基礎培養(yǎng)基。 ⑤ 酶抑制劑 ：常用大豆胰酶抑制劑。 48 細胞的基本培養(yǎng)技術 ? 定義 ? 動物細胞培養(yǎng) ：就是將動物組織或細胞從機體中取出，分散成單個細胞，給予必要的生長條件，模擬體內(nèi)的生長環(huán)境，使其在體外繼續(xù)生長和增殖的技術。 ? 原代細胞通常由多種細胞組成（異質性），細胞獨立生存性差 53 過程 組織 取材 組織細胞的 分離 培養(yǎng) 機械法 消化法 動物胚胎或幼齡動物的組織、器官 細胞懸液 胰蛋白酶 1代細胞 原代培養(yǎng) 50代細胞 傳代培養(yǎng) 無限傳代 單個細胞 加培養(yǎng)液 動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質，將細胞網(wǎng)絡起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。 ? 切割分離法： 用剪刀剪切成 1mm3左右的小塊?？捎煤}、鎂離子的 BSS配制或溶于含血清的培養(yǎng)液中。少數(shù)動物細胞（血液和淋巴組織細胞等非貼壁動物細胞）可懸浮生長，采集組織分散、過濾、離心、純化、漂洗后接種培養(yǎng)。 3. 25min檢查，如有細胞間隙變大，加入蛋白酶抑制劑或血清培養(yǎng)液終止消化。 ? 優(yōu)點： 1）容易換片。 缺點 ：不易在顯微鏡下觀察。 篩選同步化細胞 誘導同步化細胞 M期細胞震蕩脫落法 離心洗脫法 梯度沉降法 血清饑餓法 異亮氨酸營養(yǎng)缺乏法 DNA合成抑制劑阻斷法 秋水仙素阻斷法 1. 分批式操作 2. 流加式操作 3. 半連續(xù)式操作 4. 連續(xù)式操作 5. 灌流式操作 優(yōu)點：操作簡單，培養(yǎng)周期短，污染和細胞突變的風險小。分為有限細胞系、無限細胞系。腫瘤細胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型細胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有不死性 和 異體接種致瘤性 。 2. 將 1－ 2ml 凍存細胞液加入到 25ml 新鮮完全細胞生長培養(yǎng)液中，輕輕混勻。 4. 用完全生長培養(yǎng)液輕輕懸浮細胞團，并計數(shù)細胞。 細胞系或株的鑒定、管理和使用 ATCC入庫細胞要求檢測項目如下： 培養(yǎng)簡歷： 組織來源日期、物種、組織起源、性別、年齡、供體正?；虍惓＝】禒顟B(tài)、細胞已傳代數(shù)等 凍 存 液： 培養(yǎng)基和防凍液名稱 細胞活力： 融解前后細胞接種存活率和生長特性 培 養(yǎng) 液： 培養(yǎng)基種類和名稱（一般要求不含抗生素）、血清來源和含量 細胞形態(tài)： 類型，如為上皮或成纖維細胞等，融解后細胞生長特性 核 型： 二倍體或多倍體，標記染色體的有無 無污染檢測： 包括細菌、真菌、支原體、原蟲和病毒等 物種檢測： 檢測同工酶，以證明細胞有否交叉污染以及反轉錄酶檢測 免疫檢測： 一兩種血清學檢測 細胞建立者： 建立者姓名；檢測者姓名 細胞的凍存、復蘇和運輸 92 細胞的凍存 主要目的： （ 1）保存種子細胞，以便隨時取用 （ 2）降低人力和物力 （ 3）減少細胞被微生物污染的危險性 （ 4）避免有限細胞系出現(xiàn)衰老或惡性轉變 （ 5）減少細胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變 冷凍保存要點 （ 1）冷凍過程要緩慢，有條件的地方，可用程控降溫儀，按每分鐘 1 到 3℃ 速度降溫，一直到 80℃以下，然后直接放入液氮中長期保存 （ 2）凍存細胞必須處在對數(shù)生長期，活力大于 90％，無微生物污染。 ? 二倍體細胞： 細胞群染色體數(shù)目與原供體二倍細胞染色體數(shù)相同或基本相同（ 2n細胞占 75％或 80％以上）的細胞群。而且收液率低 . 優(yōu)點：生產(chǎn)效率高，可反復長期培養(yǎng)，反復收獲產(chǎn)品。 細胞株 :由 細胞系 進一步克隆化，而獲得的由 單一細胞 形成的細胞群體。 72 ： 指將培養(yǎng)對象直接接種于培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)。 5. 吸管輕輕吹打，加入新鮮培養(yǎng)液，制成懸液，計數(shù)并調整其密度。 ? 動物細胞培養(yǎng)類型 : ? 非貼壁培養(yǎng)： 也叫懸浮培養(yǎng)。 ? 優(yōu)點：消化緩和、無需機械振蕩 ? 缺點：價格昂貴 ? 可與胰蛋白酶混用
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