《動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)hxy》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 態(tài)恒定，細(xì)胞在穩(wěn)定的狀態(tài)下生長。而且收液率低 . 優(yōu)點(diǎn)：生產(chǎn)效率高，可反復(fù)長期培養(yǎng)，反復(fù)收獲產(chǎn)品。能促進(jìn)克隆細(xì)胞的生長，利于克隆的形成。 細(xì)胞株 :由 細(xì)胞系 進(jìn)一步克隆化，而獲得的由 單一細(xì)胞 形成的細(xì)胞群體。 ： 蓋爾（ Gey， 1933年）、劉易斯（Lewis， 1934年）建立該方法。 72 ： 指將培養(yǎng)對象直接接種于培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)。 ? 常用培養(yǎng)技術(shù) ? ： 又稱植塊懸滴培養(yǎng)法， 1907年由哈里森首創(chuàng)。 5. 吸管輕輕吹打，加入新鮮培養(yǎng)液，制成懸液，計(jì)數(shù)并調(diào)整其密度。用不含鈣、鎂離子的 BSS溶液清洗。 ? 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)類型 : ? 非貼壁培養(yǎng)： 也叫懸浮培養(yǎng)。 65 ? （三）培養(yǎng)方法 ? ：簡便，成功率較低 ? :將解離得到的細(xì)胞用培養(yǎng)液配制成一定密度的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)。 ? 優(yōu)點(diǎn)：消化緩和、無需機(jī)械振蕩 ? 缺點(diǎn)：價(jià)格昂貴 ? 可與胰蛋白酶混用 64 ③其他消化酶消化法 ：鏈霉蛋白酶、黏蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等。 ? 胰蛋白酶消化法有熱 (37℃) 和冷 (4 ℃) 兩種處理。 61 ? （二）組織細(xì)胞的分離 ? ：可使組織疏松，細(xì)胞分開，細(xì)胞容易生長，成活率高。 59 60 ? （二）組織細(xì)胞的分離 ? 有 機(jī)械法 和 消化法 兩大類 ? ： ? 離心分離法： 適用于細(xì)胞懸液組織。 57 ⑥ ① ② ③ ④ ⑤ 機(jī)械法分離胚胎 ? 3. 皮膚和粘膜：多來源于手術(shù)，需嚴(yán)格消毒以消滅細(xì)菌霉菌。 ? 原代培養(yǎng) ? 原代培養(yǎng)： 從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。 49 動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)的特點(diǎn) : ① 大多數(shù)須附著在固體或半固體的表面才能生長。 ? （ 3）氣體 ： O2； CO2，還可調(diào)節(jié) pH。 ℃ ；對低溫耐受性比高溫強(qiáng)。如纖黏蛋白、血清鋪展因子、膠原等。 44 （ 2）補(bǔ)充成分 ① 激素和生長因子 ：激素有胰島素、生長激素和多種生長因子如表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、增殖刺激因子、類胰島素生長因子等。 ? 可保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。 ? （ 5）其他：嘌呤、嘧啶、輔酶及抗氧化劑等。 ? （ 2）維生素：包括水溶性和脂溶性兩類。最普遍的作法是 加入小牛血清，稱為完全培養(yǎng)基 。 ? （ 4）膠原 ： 膠原是從動(dòng)物真皮或大鼠尾腱中提取的，具改善細(xì)胞表面特性促使其附著生長的作用。不常用。缺點(diǎn)是組成復(fù)雜，使培養(yǎng)結(jié)果不穩(wěn)定。 36 ? 培養(yǎng)基 ? 按照來源分： – 天然培養(yǎng)基 – 合成培養(yǎng)基 – 無血清培養(yǎng)基 37 1. 天然培養(yǎng)基 ?天然培養(yǎng)基： 直接取自動(dòng)物體液或從組織中提取的天然成分作培養(yǎng)液，但成分復(fù)雜，來源有限。主要用于合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)液和洗滌組織、細(xì)胞等。此時(shí)需做分離培養(yǎng)即傳代，否則細(xì)胞會(huì)中毒，發(fā)生形態(tài)改變，重則從底物脫落死亡 潛伏期 指數(shù)生長期 停止期 培養(yǎng)細(xì)胞的遺傳學(xué)特征 （一）染色質(zhì)與染色體： ? 正常細(xì)胞：二倍體 ? 細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化：多倍體或異倍體 （二）細(xì)胞性別 ? 女性： Barr小體 ? 男性： Y小體 體內(nèi)外細(xì)胞的差異及培養(yǎng)細(xì)胞的分化 ? 經(jīng)多次傳代增殖后，培養(yǎng)細(xì)胞將失去原有的組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)，分化逐漸減弱或不顯。它與細(xì)胞世代或倍增不同；在 細(xì)胞一代中，細(xì)胞能倍增 3～ 6次 。細(xì)胞轉(zhuǎn)化亦可用人工方法 誘發(fā)，轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞也可能具有惡性性質(zhì)。轉(zhuǎn)化的標(biāo)志之一是細(xì)胞可能獲得永生性 或 惡性性 。為保持二倍體細(xì)胞性質(zhì)，細(xì)胞應(yīng)在初代培養(yǎng)期或傳代后早期凍存。 細(xì)胞的生長曲線 1．原代培養(yǎng)期： 從體內(nèi)取出組織 ,接種培養(yǎng)到第一次傳代階段（初代培養(yǎng)） 特點(diǎn) ： 14周、細(xì)胞呈活躍的移動(dòng)、可見細(xì)胞分裂、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上與體內(nèi)原組織相似性大、多呈 二倍體核型 細(xì)胞群是異質(zhì)的，細(xì)胞克隆形成率很低，即細(xì)胞獨(dú)立生存性差。 來源： 血，脾或骨髓，血中白細(xì)胞癌腫細(xì)胞 特點(diǎn)： 在懸浮中生長良好，細(xì)胞圓形、單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán) 優(yōu)點(diǎn)： 生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便 (不需消化 )，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài) 缺點(diǎn)： 純化不方便，不能通過離心將死、活細(xì)胞分離 ? 培養(yǎng)細(xì)胞的生長特點(diǎn) ? ? 貼壁 → 伸展 ? 影響因素： – 鈣離子 – 機(jī)械、物理因素 – 生物因素 13 細(xì)胞貼壁過程 15 ? ? 細(xì)胞接觸 → 停止移動(dòng) ? 正常細(xì)胞成單層生長 ? 腫瘤細(xì)胞無接觸抑制 ，可以堆積生長。 多形型細(xì)胞： 有一些細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。 ? 懸浮型 細(xì)胞 :不必附著于固相支持物表面，在懸浮狀態(tài)下即可生長的細(xì)胞。 2 培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征 ? 體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型
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