熒光定量pcr技術(shù)講座(完整版)
【正文】 定制 (Real time Quantitative PCR) ?miRNA的特點及檢測 ?熒光定量 PCR檢測 內(nèi) 容 PCR： 偉大的天才發(fā)明 ? Use of LSD ? Synthesis and selftesting of novel psychoactive substances ? Belief in astrology C Y C L E N U M B E R A M O U N T O F D N A0 11 22 43 84 165 326 647 1288 2569 51210 1 , 0 2 411 2 , 0 4 812 4 , 0 9 613 8 , 1 9 214 1 6 , 3 8 415 3 2 , 7 6 816 6 5 , 5 3 617 1 3 1 , 0 7 218 2 6 2 , 1 4 419 5 2 4 , 2 8 820 1 , 0 4 8 , 5 7 621 2 , 0 9 7 , 1 5 222 4 , 1 9 4 , 3 0 423 8 , 3 8 8 , 6 0 824 1 6 , 7 7 7 , 2 1 625 3 3 , 5 5 4 , 4 3 226 6 7 , 1 0 8 , 8 6 427 1 3 4 , 2 1 7 , 7 2 828 2 6 8 , 4 3 5 , 4 5 629 5 3 6 , 8 7 0 , 9 1 230 1 , 0 7 3 , 7 4 1 , 8 2 431 1 , 4 0 0 , 0 0 0 , 0 0 032 1 , 5 0 0 , 0 0 0 , 0 0 033 1 , 5 5 0 , 0 0 0 , 0 0 034 1 , 5 8 0 , 0 0 0 , 0 0 0PCR：理想與現(xiàn)實 起點定量 終點定量 ? 起點定量檢測 ： 起點量是樣本中未經(jīng) PCR放大 之前的模板量 具有重現(xiàn)性，誤差小 “加入了 500個拷貝 ” ? 終點定量檢測 ： 終點產(chǎn)物量經(jīng)過 PCR放大的 DNA量 不恒定，誤差大 “生成了 500， 0000， 0000個拷貝 ” 擴增曲線 Ct值： ?模板 DNA量越多， 熒光強度達到檢測域值所需的循環(huán)數(shù) 越少， 即 Ct值越小。 不同環(huán)境，不同器官、組織、細胞類型之間，表達量相對恒定。 ? 需參照儀器要求選擇。 熒光定量產(chǎn)品 染料法 FastSYBR Mixture UltraSYBR Mixture ?GoldStar Taq ?特異性強 ?靈敏度高 ?Ct值更低 ?線性范圍更廣 ?定量更準(zhǔn)確 ?反應(yīng)速度快 ?比普通反應(yīng)可節(jié)省約 40分鐘 ?適合于普通和快速定量 PCR程序 熒光定量產(chǎn)品 染料法 某其它品牌 康為 UltraSYBR cDNA用內(nèi)參 actin引物進行擴增，產(chǎn)物片段 100bp。 康為世紀產(chǎn)品 RNA Trizol 超純 RNA提取試劑盒 動物組織 RNA 植物 RNA 血液 RNA 病毒 RNA 逆轉(zhuǎn)錄 SuperRT / HiFiMMLV逆轉(zhuǎn)錄酶 cDNA第一鏈合成試劑盒 RTPCR 一步法、兩步法試劑盒 熒光定量 PCR UltraSYBR Mixture FastSYBR Mixture GoldStar Taqman Mixture PCR GoldStar DNA Polymerase Taq /Es Taq D
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