植物細(xì)胞的獲取ppt課件(完整版)
【正文】 制：機械或酶傷害細(xì)胞，完整細(xì)胞較少。 ? 基因型的影響：不同種類及不同品種之間存在差異； ? 同一植物，不同部位脫分化和再分化能力存在差異：百合：外層＞內(nèi)層；紫草根＞莖葉；蘋果頂芽褐變程度＜側(cè)芽；蘭科：莖尖； ? 還要考慮生產(chǎn)目的：選用植株中主要生產(chǎn)所需的的次級代謝產(chǎn)物的組織和器官 ? 用于愈傷組織誘導(dǎo)的外植體的選擇 ? 外植體的生理狀態(tài)：紅豆杉：新生的嫩枝； ? 取材季節(jié)：母株生長旺盛的季節(jié)；紫草：秋天（紫草寧合成和積累）； ? 外植體大?。哼m當(dāng)大小；脫毒率和莖尖大小及成活率之間的關(guān)系； ? 用于分離原生質(zhì)體的外植體的選擇 ? 分離原生質(zhì)體則以葉片為最好。 ? 方法： ? 預(yù)培養(yǎng)； ? 暗處理； ? 低溫或高溫處理； ? 萎蔫處理； ? 抗氧化劑處理； ? 高滲透壓預(yù)處理； ? 花藥和花粉培養(yǎng)的預(yù)處理： ? 最常用的方法是 低溫冷藏 。 ? 促使細(xì)胞同步分裂。 ? 首次成功：煙草葉細(xì)胞 ? 步驟：葉片表面滅菌 → 撕去下表皮 → 切成 4cm2小塊 → 放入酶液中 →抽真空 → 搖床上酶解 → 每 30min更換一次酶液（第一次棄去，第二次主要含海綿細(xì)胞，第三、四次主要含柵欄細(xì)胞） → 收集細(xì)胞，培養(yǎng)基洗二次后培養(yǎng) ? 機械法和酶解法比較 ? 機械法：細(xì)胞不受到酶的傷害；不用質(zhì)壁分離，有利于進(jìn)行生理和生化研究 ；容易傷害細(xì)胞結(jié)構(gòu)，獲得完整細(xì)胞團(tuán)或細(xì)胞數(shù)量極低；細(xì)胞易破。常用的有： 2,4－ D、萘乙酸（ NAA）、吲哚乙酸（ IAA）、吲哚丁酸（ IBA）等。如果要讓愈傷組織繼續(xù)生長增殖，必須定期地（ 2～ 4個星期）將它們分成小塊接種到新鮮的培養(yǎng)基上，這樣愈傷組織就可以長期保持旺盛的生長。 ? 培養(yǎng)基中可利用水的含量過高，試管苗可吸收的水分太多，植物內(nèi)具有過多的游離水 。 ? 1971年， Takebe 首次得到煙草葉肉原生質(zhì)體培養(yǎng)的再生植株。 二、 植物原生質(zhì)體的材料來源 ?原生質(zhì)體也可以從 組織培養(yǎng)的材料 中大量獲得 。 (二 ) 原生質(zhì)體的純化 ? 酶解后純化原生質(zhì)體的步驟如下： ? 400目的不銹鋼或尼龍網(wǎng)過濾 ， 以除去未消化的碎片 。 Before protoplasts can be cultured it is necessary to test them for viability. 三 . 影響原生質(zhì)體分離的幾個因素 ? 1. 酶解條件：酶質(zhì)量 、 濃度 、 酶解溫度 、 酶解時間 、 酶溶液的滲透壓等 。 原生質(zhì)體培養(yǎng)時有一種密度效應(yīng) ， 一般 104－ 5個 /mL有利于培養(yǎng) ?；旌虾蟮暮性|(zhì)體的培養(yǎng)基鋪于培養(yǎng)皿底部，封口后進(jìn)行培養(yǎng)。這種方法由于改善了培養(yǎng)物的通氣和營養(yǎng)環(huán)境，從而促進(jìn)了原生質(zhì)體的分裂和細(xì)胞團(tuán)的形成。培養(yǎng)時花粉的密度一般為104～ 105個 /ml。 ? （ 1）花藥漂浮培養(yǎng)自然釋放法：把花藥接種在液體培養(yǎng)基上，花藥漂浮于液體表面經(jīng) 1～ 7天的培養(yǎng)，藥壁自然開裂，花粉自然散落下來，及時將花藥壁從培養(yǎng)瓶中取出來，留下的花粉繼續(xù)培養(yǎng)，如水稻、大麥等。 ? 缺點：操作要求嚴(yán)格，尤其是混合時的溫度掌握必須合適，溫度偏高則影響原生質(zhì)體的活力，溫度偏低則瓊脂糖凝固太快，原生質(zhì)體不易混合均勻。 Brassica protoplasts The optimum plating efficiency (tobacco protoplasts) 5 104
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