【正文】 動物細(xì)胞融合理論基礎(chǔ)細(xì)胞的全能性、細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞增殖、細(xì)胞膜的流動性融合前處理酶解法去除細(xì)胞壁（纖維素酶、果膠酶）注射特定抗原，免疫處理正常小鼠誘導(dǎo)手段物理法:離心、振動、電激化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）物理法:離心、振動、電激化學(xué)法：聚乙二醇生物法：滅活的病毒（滅活的仙臺病毒）誘導(dǎo)過程第一步：原生質(zhì)體的制備（酶解法）第二步：原生質(zhì)體融合（物、化法）第三步：雜種細(xì)胞的篩選和培養(yǎng)第四步：雜種植株的誘導(dǎo)與鑒定正常小鼠免疫處理動物細(xì)胞的融合（物、化、生法）雜交瘤細(xì)胞的篩選與培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體的提純用途和意義克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和障礙，大大擴展雜交的親本組合范圍應(yīng)用：白菜甘藍(lán)等雜種植株（1）制備單克隆抗體(2)診斷、治療、預(yù)防疾病，例如“生物導(dǎo)彈”治療癌癥（1）抗體：一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。（1）哺乳動物核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植（比較容易）和體細(xì)胞核移植（比較難）。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中污染。（1）過程：去除細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體—原生質(zhì)體融合—雜種細(xì)胞—雜種細(xì)胞的篩選—雜種細(xì)胞再生出細(xì)胞壁—植物組織培養(yǎng)（2）誘導(dǎo)融合的方法：物理法包括離心、振動、電激 等。（注意：目的基因只能用人工合成的方法）設(shè)計中的困難：如何推測非編碼區(qū)以及內(nèi)含子的脫氧核苷酸序列（1）基因工程和蛋白質(zhì)工程的比較基因工程蛋白質(zhì)工程相同均是基因工程，蛋白質(zhì)工程是第二代基因工程不同概念P1P27 黑體字目的獲得自然界中已存在的蛋白質(zhì)獲得自然界中不存在的蛋白質(zhì)基本途徑遵循中心法則先中心法則的逆推，再遵循中心法則注意：① 蛋白質(zhì)的工程的重點在于對已存在的蛋白質(zhì)進(jìn)行分子改造，改造的對象是編碼蛋白質(zhì)的DNA序列。（三）基因工程藥物（主要是微生物）基因工程藥物種類：細(xì)胞因子、抗體、疫苗、激素等。 目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的 抗體進(jìn)行 抗原－抗體雜交。：將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：采用最多的方法是 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有 基因槍法、花粉管通道法。（3）條件：模板、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）、引物、脫氧核苷酸、精確的溫度控制、能量第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，能縫合兩種末端，但連接平末端的之間的效率較低?；蚬こ淌窃贒NA分子水平上進(jìn)行設(shè)計和施工的，又叫做DNA重組技術(shù)。2.“分子縫合針”——DNA連接酶(1)兩種DNA連接酶（E（3）其它載體： 噬菌體的衍生物、動植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲?。?編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因或具有調(diào)控作用的因子。（3）標(biāo)記基因的作用：是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。② 以上介紹的幾種方法，在導(dǎo)入受體細(xì)胞之前，都必須進(jìn)行目的基因表達(dá)載體的構(gòu)建，也就是說導(dǎo)入受體細(xì)胞的必須是重組DNA分子，而不能直接導(dǎo)入目的基因。為了使目標(biāo)產(chǎn)品在奶中形成，需要使用乳腺組織中特異表達(dá)的啟動子，要在編碼目的蛋白質(zhì)的基因序列前加上乳腺組織中特異表達(dá)的啟動子構(gòu)建成表達(dá)載體。植物細(xì)胞工程的受體細(xì)胞可以是受精卵也可以是其他的體細(xì)胞。 優(yōu)點：明顯縮短育種年限C. 突變體利用：在組織培養(yǎng)中會出現(xiàn)突變體，通過從有用的突變體中選育出新品種（如篩選抗病、抗鹽、含高蛋白的突變體。（3）細(xì)胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。④氣體環(huán)境：95%空氣＋5%CO2。融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。（4）單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。？植物：物理法（離心、振動、電激）化學(xué)法（聚乙二醇）動物：物理法（離心、振動、電激）化學(xué)法（聚乙二醇） 生物法（滅活的病毒）14. 細(xì)胞融合的優(yōu)點及應(yīng)用優(yōu)點：克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙 應(yīng)用：制備單克隆抗體（最主要的應(yīng)用）15. 單克隆抗體制備過程用到的技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)、動物細(xì)胞融合（克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢驗陽性）專題三 胚胎工程（一）動物胚胎發(fā)育的基本過程胚胎工程是指對動物早期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù)，如胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)。 ③桑椹胚：特點：胚胎細(xì)胞數(shù)目達(dá)到32個左右時，胚胎形成致密的細(xì)胞團(tuán)，形似桑椹。采集的卵母細(xì)胞，都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟后，才能與獲能的精子受精。)(1)胚胎移植是指將雌性動物的早期胚胎，或者通過體外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其它雌性動物的體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術(shù)。②早期胚胎在一定時間內(nèi)處于游離狀態(tài)。②配種或人工授精。(1)概念：是指采用機械方法將早期胚胎切割2等份、4等份等，經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術(shù)。另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可進(jìn)行遺傳改造。c 、完善相應(yīng)的法令法規(guī)，利用法制手段確保轉(zhuǎn)基因生物的安全性。其主要用于不孕夫婦的不孕設(shè)計試管嬰兒：方法同于試管嬰兒，只是在植入前對胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。目的：遵循自然界物質(zhì)循環(huán)的規(guī)律，充分發(fā)揮資源的生產(chǎn)潛力，防止環(huán)境污染，達(dá)到經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益的同步發(fā)展。即使某個物種由于某種原因而死亡，也會有其他物種占據(jù)它原來的生態(tài)位置，從而避免了系統(tǒng)結(jié)構(gòu)或功能的失衡。系統(tǒng)整體性原理解釋：系統(tǒng)各組分之間要有適當(dāng)?shù)谋壤P(guān)系，只有這樣才能順利完成能量、物質(zhì)、信息等的轉(zhuǎn)換和流通，并且實現(xiàn)總體功能大于各部分之和的效果，即“1+12”。（2）實例：西部的生態(tài)治理表象：植被減少、地力減退等。 6 6。手段：要發(fā)揮生態(tài)系統(tǒng)的自然修復(fù)功能。例如，農(nóng)業(yè)生態(tài)工程、林業(yè)生態(tài)工程、治污生態(tài)工程、生態(tài)恢復(fù)工程等。處理好生物與環(huán)境的協(xié)調(diào)與平衡，需要考慮環(huán)境承載力。三、生態(tài)工程的原理（一）物質(zhì)循環(huán)再生原理解釋：地球以有限的空間和資源，長久維持著眾多生物的生存、繁衍和發(fā)展，奧秘就在于物質(zhì)實現(xiàn)了循環(huán)往復(fù)、分層分級利用，從而達(dá)到取之不盡，用之不竭的效果。調(diào)控缺乏及時準(zhǔn)確的監(jiān)