【正文】 動物細胞融合理論基礎細胞的全能性、細胞膜的流動性細胞增殖、細胞膜的流動性融合前處理酶解法去除細胞壁（纖維素酶、果膠酶）注射特定抗原，免疫處理正常小鼠誘導手段物理法:離心、振動、電激化學法：聚乙二醇（PEG）物理法:離心、振動、電激化學法：聚乙二醇生物法：滅活的病毒（滅活的仙臺病毒）誘導過程第一步：原生質(zhì)體的制備（酶解法）第二步：原生質(zhì)體融合（物、化法）第三步：雜種細胞的篩選和培養(yǎng)第四步：雜種植株的誘導與鑒定正常小鼠免疫處理動物細胞的融合（物、化、生法）雜交瘤細胞的篩選與培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性細胞培養(yǎng)單克隆抗體的提純用途和意義克服遠緣雜交的不親和障礙，大大擴展雜交的親本組合范圍應用：白菜甘藍等雜種植株（1）制備單克隆抗體(2)診斷、治療、預防疾病，例如“生物導彈”治療癌癥（1）抗體：一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。（1）哺乳動物核移植可以分為胚胎細胞核移植（比較容易）和體細胞核移植（比較難）。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中污染。（1）過程：去除細胞壁獲得原生質(zhì)體—原生質(zhì)體融合—雜種細胞—雜種細胞的篩選—雜種細胞再生出細胞壁—植物組織培養(yǎng)（2）誘導融合的方法：物理法包括離心、振動、電激 等。（注意：目的基因只能用人工合成的方法）設計中的困難：如何推測非編碼區(qū)以及內(nèi)含子的脫氧核苷酸序列（1）基因工程和蛋白質(zhì)工程的比較基因工程蛋白質(zhì)工程相同均是基因工程，蛋白質(zhì)工程是第二代基因工程不同概念P1P27 黑體字目的獲得自然界中已存在的蛋白質(zhì)獲得自然界中不存在的蛋白質(zhì)基本途徑遵循中心法則先中心法則的逆推，再遵循中心法則注意：① 蛋白質(zhì)的工程的重點在于對已存在的蛋白質(zhì)進行分子改造，改造的對象是編碼蛋白質(zhì)的DNA序列。（三）基因工程藥物（主要是微生物）基因工程藥物種類：細胞因子、抗體、疫苗、激素等。 目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 蛋白質(zhì)，用相應的 抗體進行 抗原－抗體雜交。：將目的基因?qū)胫参锛毎翰捎米疃嗟姆椒ㄊ?農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有 基因槍法、花粉管通道法。（3）條件：模板、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）、引物、脫氧核苷酸、精確的溫度控制、能量第二步：基因表達載體的構建：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，能縫合兩種末端，但連接平末端的之間的效率較低?；蚬こ淌窃贒NA分子水平上進行設計和施工的，又叫做DNA重組技術。2.“分子縫合針”——DNA連接酶(1)兩種DNA連接酶（E（3）其它載體： 噬菌體的衍生物、動植物病毒 (二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲?。?編碼蛋白質(zhì)的結構基因或具有調(diào)控作用的因子。（3）標記基因的作用：是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。② 以上介紹的幾種方法，在導入受體細胞之前，都必須進行目的基因表達載體的構建，也就是說導入受體細胞的必須是重組DNA分子，而不能直接導入目的基因。為了使目標產(chǎn)品在奶中形成，需要使用乳腺組織中特異表達的啟動子，要在編碼目的蛋白質(zhì)的基因序列前加上乳腺組織中特異表達的啟動子構建成表達載體。植物細胞工程的受體細胞可以是受精卵也可以是其他的體細胞。 優(yōu)點：明顯縮短育種年限C. 突變體利用：在組織培養(yǎng)中會出現(xiàn)突變體，通過從有用的突變體中選育出新品種（如篩選抗病、抗鹽、含高蛋白的突變體。（3）細胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。④氣體環(huán)境：95%空氣＋5%CO2。融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞。（4）單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。？植物：物理法（離心、振動、電激）化學法（聚乙二醇）動物：物理法（離心、振動、電激）化學法（聚乙二醇） 生物法（滅活的病毒）14. 細胞融合的優(yōu)點及應用優(yōu)點：克服遠緣雜交不親和的障礙 應用：制備單克隆抗體（最主要的應用）15. 單克隆抗體制備過程用到的技術動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合（克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢驗陽性）專題三 胚胎工程（一）動物胚胎發(fā)育的基本過程胚胎工程是指對動物早期胚胎或配子所進行的多種顯微操作和處理技術，如胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細胞培養(yǎng)等技術。 ③桑椹胚：特點：胚胎細胞數(shù)目達到32個左右時，胚胎形成致密的細胞團，形似桑椹。采集的卵母細胞，都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟后，才能與獲能的精子受精。)(1)胚胎移植是指將雌性動物的早期胚胎，或者通過體外受精及其它方式得到的胚胎，移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其它雌性動物的體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育為新個體的技術。②早期胚胎在一定時間內(nèi)處于游離狀態(tài)。②配種或人工授精。(1)概念：是指采用機械方法將早期胚胎切割2等份、4等份等，經(jīng)移植獲得同卵雙胎或多胎的技術。另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進行冷凍保存，也可進行遺傳改造。c 、完善相應的法令法規(guī)，利用法制手段確保轉(zhuǎn)基因生物的安全性。其主要用于不孕夫婦的不孕設計試管嬰兒：方法同于試管嬰兒，只是在植入前對胚胎進行遺傳學診斷。目的：遵循自然界物質(zhì)循環(huán)的規(guī)律，充分發(fā)揮資源的生產(chǎn)潛力，防止環(huán)境污染，達到經(jīng)濟效益和生態(tài)效益的同步發(fā)展。即使某個物種由于某種原因而死亡，也會有其他物種占據(jù)它原來的生態(tài)位置，從而避免了系統(tǒng)結構或功能的失衡。系統(tǒng)整體性原理解釋：系統(tǒng)各組分之間要有適當?shù)谋壤P系，只有這樣才能順利完成能量、物質(zhì)、信息等的轉(zhuǎn)換和流通，并且實現(xiàn)總體功能大于各部分之和的效果，即“1+12”。（2）實例：西部的生態(tài)治理表象：植被減少、地力減退等。 6 6。手段：要發(fā)揮生態(tài)系統(tǒng)的自然修復功能。例如，農(nóng)業(yè)生態(tài)工程、林業(yè)生態(tài)工程、治污生態(tài)工程、生態(tài)恢復工程等。處理好生物與環(huán)境的協(xié)調(diào)與平衡，需要考慮環(huán)境承載力。三、生態(tài)工程的原理（一）物質(zhì)循環(huán)再生原理解釋：地球以有限的空間和資源，長久維持著眾多生物的生存、繁衍和發(fā)展，奧秘就在于物質(zhì)實現(xiàn)了循環(huán)往復、分層分級利用，從而達到取之不盡，用之不竭的效果。調(diào)控缺乏及時準確的監(jiān)