高中生物課件53血紅蛋白的提取和分離(完整版)
【正文】 4 層 :第 1 層為無色透明的有機溶劑 ( 甲苯 ), 第 2 層為白色的脂類物質(zhì) ,第 3 層為紅色透明的血紅蛋白溶液 ,第 4 層為暗紅色的紅細胞破碎物沉淀。 退出 目錄 遷移與應用 1 用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時 , 相對分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì) ( ) 。 退出 目錄 課堂 合作探究 問題 導學 一、血紅蛋白提取和分離的原理 活動與探究 1 1 . 分離生物大分子的基本思路是什么 ? 提示 :選用一定的物理或化學方法分離具有不同物理或化學性質(zhì)的生物大分子。 退出 目錄 ( 2 ) 色譜柱填料的處理 : 商品凝膠使用前需直接放在 洗脫液 中膨脹 ,可以將加入其中的 濕凝膠 用 沸水浴 加熱 , 加速膨脹。 ② 加透析樣品 調(diào)整緩沖液面 : 與凝膠面平齊。 ( 2 ) 作用 : 抵制外界的酸和堿對溶液 pH 的影響 , 維持 pH 基本不變。 退出 目錄 預習 導引 一、分離蛋白質(zhì)的原理與方法 1 .分離蛋白質(zhì)的原理 蛋白質(zhì)特 性的差異 分子的 形狀和大小所帶 電荷 的性質(zhì)和多少溶解度吸附性質(zhì)對其他分子的 親和力 退出 目錄 2. 分離蛋白質(zhì)的方法 ( 1 ) 凝膠色譜法 ① 概念 : 根據(jù) 相對分子質(zhì)量的大小 分離蛋白質(zhì)的有效方法 , 也叫 分配色譜法 。 重點 : 凝膠色譜法的原理和方法。其中后者使用時通常加入帶負電荷多的 SDS , 形成 “ 蛋白質(zhì) SDS 復合物 ” , 使蛋白質(zhì)遷移速率僅取決于 分子的大小 。 ↓ 裝填 : 將用蒸餾水充分溶脹后 的凝膠配成凝膠懸浮液 , 一次性 緩慢倒入色譜柱內(nèi) , 裝填時可輕輕敲動色譜柱 , 使凝膠裝填 均勻 。 3. 操作提示 ( 1 ) 紅細胞的洗滌 : 洗滌次數(shù) 、 離心速度 與 離心時間 十分重要。固定化酶的反應柱裝填的是固定有酶的載體顆粒 ,既能催化反應物的反應 ,又保證了酶與反應 物分子的分離 ,實現(xiàn)了酶的重復利用 ,節(jié)約了生產(chǎn)成本。 退出 目錄 4 . 討論電泳的作用及其原理是什么。 提示 : ( 1 ) 目的是去除血漿蛋白等雜蛋白。因此 透析的目的是除去小分子雜質(zhì)。首先通過洗滌紅細胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液 ,即樣品的處理 。第 3 層為紅色透明液體 ,是血紅蛋白的水溶液 。在電場的作用下 ,這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動。 A. 加樣前要使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液下降到與凝膠面平齊 B. 讓吸管管口沿管壁環(huán)繞移動 , 貼壁加樣至色譜柱頂端 , 不要破壞凝膠面 C. 打開下端出口 , 待樣品完全進入凝膠層后 , 直接連接緩沖液洗脫瓶開始洗脫 D. 待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時 , 每 5 m L 收集一管 , 連續(xù)收集流出液 解析 :打開下端出口 ,待樣品完全進入凝膠層后 ,關(guān)閉下端出口 ,再用同樣的方法小心加入適量的物質(zhì)的量濃度為 2 0 m m o l/ L 的磷酸緩沖液 ,然后連接緩沖 液洗脫瓶開始洗脫。因此 ,加緩沖溶液的目的是維持蛋白質(zhì)所帶的電荷不發(fā)生改變而不是使蛋白質(zhì)帶上電荷。 答
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