【正文】 口數(shù)量逐年增加，由此在很大程度上影響了國(guó)內(nèi)煙葉的生產(chǎn)。 蜂膠作為一種具有廣泛應(yīng)用前景的天然保健物質(zhì)，其生物活性正越來(lái)越被人所重視。 蜂膠在紫外線 UVB 和 UVC 范圍內(nèi)均有良好的吸收性能 ， 能吸收和降低致紅斑紫外光的輻射 ， 則其可做成天然防曬劑 。 蜂膠可作為畜禽的飼料添加劑。 盧兆蕓 [63]、孟日增 [64]、許合金 [65]、趙強(qiáng) [66]、 Lucrecia L. Chaillou[67]等人分別研究了蜂膠黃酮類化合物在食品保鮮、抗菌，畜牧業(yè)中的應(yīng)用，以及蜂膠中揮發(fā)油的抗氧化活性，并闡述了相關(guān) 機(jī)理。它們作為蜂膠的主要活性成分發(fā)揮著重要的生理功效。 [58,59] 天然蜂膠的基本成分一般是：樹(shù)脂樹(shù)香復(fù)合物 39％ —53％、多酚類 12％ —17％、多糖類 2％ —3％，蜂蠟 19％ —35％、雜質(zhì)（含花粉等） 8％ —12％。呈黃褐色、棕褐色、灰褐色、灰綠色、暗綠色，極少數(shù)深似黑蜂膠對(duì)煙草青枯病防治效果的初步研究 12 色。在此基礎(chǔ)上，他們將產(chǎn)生柞蠶殺菌膚 D 的基因?qū)氚礃?shù)，并獲得了轉(zhuǎn)基因植株提高了按樹(shù)對(duì)青枯病的抗病力。荷蘭 Floraek 等 (1995)將可抑制 的抗菌 肽 cecropin B 轉(zhuǎn)入煙草植株，并成功地得到了 mRNA 水平上的表達(dá)。 在化學(xué)防治上，許多研究者篩選出不少對(duì)青枯病菌有較好抑制作用的藥劑 [51]。合理施用有機(jī)肥或?qū)⒂袡C(jī)肥與生物防治、拮抗菌應(yīng)用相結(jié)合，可改善和修復(fù)土壤生態(tài)環(huán)境，提高土壤和煙株自身抗御病害的能力，減少肥料和化學(xué)農(nóng)藥使用，改善煙葉品質(zhì)和實(shí)現(xiàn)煙葉生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展。根據(jù)青枯病的特點(diǎn)可實(shí)行 “稻 —稻 —煙 ”的輪作制度，旱地?zé)煹妮喿鏖g隔年限至少 3 年，輪作作物最好選用禾本科作物及甘薯、大豆、豇豆、綠豆等，不與馬鈴薯、番茄、辣椒、茄子、花生、芝麻及姜類等作 物輪作 ； 宜大面積連片種植煙葉。根據(jù)不同接菌濃度下品種的抗性水平分析，相對(duì)抗性較強(qiáng)的品種有 Nc9 Nc82 和 Oxfod26 等； 較感病的品種有青梗和 Ky9 兩個(gè)品種，其余品種介于兩者之間。病組織腐爛后，病菌遺留在土壤中或糞肥中越冬，成為下年的初侵染源。 青枯病菌主要在土壤中及遺落在土壤中的病殘?bào)w上越冬，也能在各種生長(zhǎng)著的寄主體內(nèi)及根際越冬。發(fā)病最適宜的溫度為 30～ 35℃ 。 青枯病在我國(guó)呈由北向南、由西向東始病期逐漸提早 ， 為害程度逐漸加重的趨勢(shì) [28]。青枯病菌在導(dǎo)管中生長(zhǎng)時(shí)可產(chǎn)生大量胞外多糖，影響和阻塞植物內(nèi)的水分運(yùn)輸，特別是易于對(duì)葉柄結(jié)和小葉處較小孔徑的導(dǎo)管穿孔板造成堵塞，因而引起植株萎蔫 [25]。病原菌在煙 株其他部位侵入也是通過(guò)傷口進(jìn)行的。王敏等 [22]測(cè)定了 81 個(gè)煙草青枯菌菌株的生化型，結(jié)果表明，云南省以生化型 Ⅲ 為主。分子遺傳學(xué)研究指出，青枯菌的致病性基因主要攜帶在一個(gè)特大質(zhì)粒上，而且分布在 7 個(gè)限制性內(nèi)切酶片段上 [15]。煙草青枯菌屬于小種 1，只能侵染茄科植物。在病株發(fā)病的一側(cè)，葉片枯萎，無(wú)病的一側(cè)葉片生長(zhǎng)正常 ，呈現(xiàn) “半邊瘋 ”癥狀。此后，在國(guó)際重大刊物上發(fā)表的文章均使用該名。 1940 年前后，該病在美國(guó)和印度尼西亞的為害最為嚴(yán)重，此后，在許多產(chǎn)煙國(guó)家逐漸演變?yōu)闊煵萆系闹匾『?，如日本、澳大利亞、韓國(guó)等 [2]。其中有 15種主要煙草病害，他們是 (按為害嚴(yán)重程度及分布范圍為序 )普通花葉病毒病、黃瓜花葉病毒病、赤星病、黑脛病、炭疽病、青枯病、野火病、馬鈴薯 Y 病毒病、蛙眼病、根結(jié)線蟲(chóng)病、空莖病 、猝倒病、角斑病、根黑腐病、蝕紋病毒病。 關(guān)鍵字：煙草青枯??； 青枯假單胞桿菌； 蜂膠； 防治 ；效果 蜂膠對(duì)煙草青枯病防治效果的初步研究 2 ABSTRACT Effect of propolis on the prevention and control of Tobacco bacterial wilt Kong Congcong Directed by Associate Professor LAN Jianqiang In the anic tobacco production process, any chemical synthesis of pesticides can not be propolis were tested. Through the resistance experiment, the drug sensitivity test, the Pathogenicity test and the field experiment, it provided a preliminary basis for the control of tobacco bacterial wilt of propolis: resistance experiment, through the parison of acupuncture inoculation method and injection inoculation method, showed that the injection could make plants more easy and fast the injection inoculation method applied to this experimental study. By pathogenicity to Pseudomonas solanacearum of Honghuadajinyuan, NC297, MSK326, yun 87 and yun 97, the results showed that Honghuadajinyuan and yun 87 were highly susceptible varieties, MSK326 and yun 97 were moderate susceptible cultivars, NC297 was moderate resistant NC297 should be chose to plant. drug sensitivity test, by inhibiting effect of 72% streptomycin, 90% carbendazol and propolis on Pseudomonas solanacearum, indicated that the inhibitory effect of propolis on Pseudomonas solanacearum is poor, with 72% streptomycin was significantly different. pot experiment and field efficacy experiment, by propolis and 72% streptomycin control tobacco bacterial wilt, the results showed that the control effect of propolis was more than 30%, and the control effect of 72% streptomycin was more than 65%.It showed that the control effect of streptomycin on tobacco bacterial was better than the propolis’. But propolis still have certain effect. Especially the propolis as a biological source of drugs， have a certain value and significance to the production of the anic tobacco. Keyword : Tobacco bacterial wilt。盡我所 知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得云南農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。分別通過(guò)藥劑篩選實(shí)驗(yàn)、 抗 病性實(shí)驗(yàn)、盆栽實(shí)驗(yàn)及 田間藥效實(shí)驗(yàn)，為蜂膠防治煙草青枯病提供了初步依據(jù)： 1． 抗 病性實(shí)驗(yàn)中， 通過(guò)針刺接種方法與注射接種方法的比較，表明注射接種能使植株更易更快發(fā)病，易于本實(shí)驗(yàn)研究； 通 過(guò) 紅花大金元、 NC29 MSK32云 8云 97 五個(gè)烤煙品種對(duì)青枯假單胞桿菌的 抗病 性 試驗(yàn) ，結(jié)果表明 紅花大金元與云 87 為高感品種， MSK326 與云 97 為中感品種， NC297 為中抗品種，生產(chǎn)種植中應(yīng)選種 NC297。在煙草種植過(guò)程中，煙草病害是影響煙草產(chǎn)量、品質(zhì)的重要因素，因此世界各煙草栽培國(guó)均高度重視病害防治。做好煙草苗期病害的綜合防治，是培育足夠壯苗、提高 煙葉產(chǎn)、質(zhì)量，獲得較好經(jīng)濟(jì)效益的基礎(chǔ)性工作。目前 ， 該病造成的損失已居各類病害的第 4 位，必須重視該病的防治工作。在 TTC 培養(yǎng)基上，菌落中央呈粉紅色，周圍乳白色流動(dòng)性較強(qiáng)（鄭繼法等， 1998） [6]。 青枯雷爾氏菌 (Ralstonia solanacearum)寄主范圍雖然廣泛，但菌株間的致病性具有明顯寄主?；?[9,10]。來(lái)源不同的菌株之間致病性喪失的速率有很大差異。煙草青枯菌的生化型變異很大，不同來(lái)源的菌株其生化型有很大差異 [11,17]，而且菌株經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間保存后，其所屬生化型也會(huì)發(fā)生變化 [17]。 在自然條件下，病原菌通常是從煙株的根部侵入，而且在根系又傷口的條件下更容易侵入。 青枯病菌引起多種植物的致死性枯萎，主要通過(guò)根和莖的傷口 ， 或次生根的根冠進(jìn)入植物體，侵染寄主的木質(zhì)部，然后在整個(gè)維管束中蔓延，引起嚴(yán)重的萎蔫，最終導(dǎo)致植物死亡。 蜂膠對(duì)煙草青枯病防治效果的初步研究 7 由于各地地理環(huán)境和氣候條件不同， 青枯病在各地區(qū)的發(fā)生消長(zhǎng)態(tài)勢(shì)存 在很大差異。同一省區(qū)平原與山區(qū)發(fā)病時(shí)期也不同，山區(qū)比平原發(fā)病稍晚一些 [30]。 土質(zhì)粘重易板結(jié)或土壤含沙量過(guò)高都易誘發(fā)病害。在諸多因素中，帶菌土壤是最重要的初侵染源。 從理論上講，青枯病最根本的防治方法是培育和推廣抗病品種 [32]，國(guó)外已有這方面報(bào)道。 （ 1） 輪作 對(duì)于細(xì)菌性青枯病的防治，前人已做了大量的工作，提出的農(nóng)業(yè)防治措施主要是輪作。 （ 4） 農(nóng)事操作 多雨的地區(qū)，提倡高起壟、高培土技術(shù) ； 雨季做到煙田無(wú)積水，健全排灌系統(tǒng)，防止串灌和雨水 串流，以減少病原在田間擴(kuò)散傳播。用于青枯病生物防治的因子主要集中于弱毒力的青枯假單孢桿菌 [44]、鏈霉菌 [45]、假單胞桿菌 [46]、菌根真菌和芽孢桿菌 [47]。 Harrison 等 [56]在煙草根部接種 青枯病菌的死菌來(lái)誘發(fā)植物體的抗性，誘導(dǎo)后的植株顯示出了對(duì)青枯病菌的強(qiáng)烈抑菌作用。李乃堅(jiān)等 (1998)應(yīng)用花粉管通道技術(shù)將天蠶抗菌 肽 B 基因轉(zhuǎn)入煙草子房，經(jīng)多世代接種青枯菌鑒定及各項(xiàng)檢測(cè)表明，抗菌 肽 B基因已整合到煙草基因組并傳遞到后代中，田間發(fā)病率和病情指數(shù)分析顯示 T T4代轉(zhuǎn)基因株系抗青枯病能力有明顯提高。 蜂膠是蜜蜂用于維持整個(gè)群體健 康的有效物質(zhì)，一個(gè) 5～ 6 萬(wàn)只的蜂群一年只能生產(chǎn)蜂膠 70～ 110 克，被譽(yù)為 “紫色黃金 ”。不溶于水，微溶于松節(jié)油，部分溶于乙醇，極 易溶 于乙醚和氯仿。例如：根據(jù)董捷 [59]等的研究報(bào)道，在智利蜂膠、巴西蜂膠、埃及蜂膠、新西蘭蜂膠和索拉納沙漠地區(qū)蜂膠中，都檢出了各不相同的新化學(xué)成分。根據(jù)陳國(guó)有 [60]等人的研究總結(jié)，蜂膠中的黃酮類化合物的生物活性主要有以下幾方面。雞蛋試驗(yàn)組在 60 天時(shí)大部分還比較完好 ，而對(duì)照組則全部散黃 ， 有的變臭 ， 不能食用。云南動(dòng)物研究所等單位用 95%的乙醇提取液 (含蜂膠 %一 2%)施用于稻瘟病菌、白葉粘病菌、棉花枯萎病菌、玉米莖病菌等病菌 ， 表現(xiàn)了強(qiáng)烈的抑制作用。解放軍廣州醫(yī)學(xué)高校、上海第一醫(yī)院等把蜂膠制劑用于細(xì)菌性炎癥、真菌性皮膚病、白色念珠菌、抱子菌等引起的疾病 ， 均表現(xiàn)出良好的效果。有機(jī)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)三要素中社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和環(huán)境三者并不排斥，而是戰(zhàn)略性和理性的整合 [69,70]。有機(jī)煙葉生產(chǎn)始于 20 世紀(jì) 90 年代，它是隨著有機(jī)農(nóng)業(yè)的發(fā)展順勢(shì)而產(chǎn)生的，并且有不斷增長(zhǎng)的趨勢(shì)。美國(guó)農(nóng)業(yè)部在 2022年 10 月實(shí)施了一套 “國(guó)家有機(jī)項(xiàng)目 ”( NOP) 的標(biāo)準(zhǔn)。 2022年國(guó)家煙草專賣局將無(wú)公害煙葉工程作為國(guó)家煙草重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目提出，標(biāo)志著有機(jī)、綠色煙葉的研發(fā)在國(guó)內(nèi)正式啟動(dòng) [78]。他們先后開(kāi)展了認(rèn)證有機(jī)煙葉生產(chǎn)用氮肥替代品的研究、有機(jī)煙葉成苗的移栽試驗(yàn)、有機(jī)煙葉栽后的田間評(píng)估 。 要實(shí)現(xiàn)有機(jī)煙葉的生產(chǎn)，必須根據(jù)有機(jī)食品的要求，在不使用基因工程獲得品種，不施用化學(xué)肥料、化學(xué)除草劑、化學(xué)殺蟲(chóng)劑的情況下，合理地解決基地的選種和栽培、土壤培肥、病蟲(chóng)草害防治等問(wèn)題 [81]。但是研究者也指出，與常規(guī)煙葉相比，有機(jī)煙葉有害物質(zhì)百分?jǐn)?shù)的下降是建立在減產(chǎn) 35%的基礎(chǔ)之上的，因此，彌補(bǔ)有機(jī)煙葉與常規(guī)煙葉間的產(chǎn)量差距也是當(dāng)前研究的重點(diǎn)之一。 2022 年云南中煙工業(yè)公司《云南特色有機(jī)、綠色煙葉及其生產(chǎn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)研發(fā)》項(xiàng)目立項(xiàng)，標(biāo)志著有機(jī)、綠色煙葉的研發(fā)在國(guó)內(nèi)正式啟動(dòng)。 2022 年秋季 Mother Earth Tobacco 公司的第 1 個(gè)Ceremonial Tobacco 產(chǎn)品開(kāi)始