基因工程工具酶ppt課件(完整版)
【正文】 內切酶的特異識別位點 5’…… G A A T T C ……3’ 3’ ……C T T A A G ……5’ A A G C T T T T C G A A A A G C T T T T C G A A DNA A B C D DNA HindⅢ HindⅢ 切割位點 核酸內切酶 HindⅢ 對雙鏈 DNA分子的 切割作用 限制性核酸內切酶的切割類型： ? （ 1） 兩條鏈上的斷裂位置是交錯和對稱圍繞著一個對稱軸排列 ， 這種形式的斷裂結果形成具有粘末端的 DNA片段； ? （ 2） 兩條鏈上的斷裂位置是處在一個對稱軸的中心 ， 這樣形式的斷裂是形成具有平末端的 DNA片段 。 理論上，某限制性內切酶的識別序列長度為 n個核苷酸，則該酶切割 DNA的頻率為 1/4n，也就是說 DNA每隔 4n個核苷酸便 會出現一次該酶的識別序列。國內市場上常用的是 TaKaRa。 ? 這些酶類參與微生物的核酸代謝 ， 在核酸復制和修復等反應中具有重要作用 ， 有的酶還作為微生物區(qū)別自己和非己的 DNA進而降解非己 DNA的防御工具 。 限制性核酸內切酶 （ 限制酶 ） ：在細胞內能夠識別雙鏈 DNA分子中的特定核苷酸序列 ， 并對 DNA分子進行切割的一種酶 。 限制性內切酶作用過程 點擊播放 三、限制性內切酶的識別序列 限制性內切酶在雙鏈 DNA上識別的特殊核苷酸序列稱為識別序列。 也有少數在識別序列的兩端 ,如 ↓GATC, CATG ↓。 同尾酶 isocaudamers ： 來源不同，識別的核苷酸靶序列也不相同，但切割后 DNA分子產生的粘性末端相同的限制性核酸內切酶。 [DNA]過大，抑制酶活，影響酶分子擴散 如： 4μg DNA/1U HpaⅠ 50μl 37℃ 15h 1μg DNA/1U HpaⅠ 50μl 37℃ 1h (二 )限制性內切酶的用量 50μL Buff
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