【正文】 ? 指烷化劑提供甲基或乙基等烷基與 DNA共價結(jié)合 ， 所引起的甲基損傷表現(xiàn)為錯配 。當斷端不發(fā)生重接或雖重接而不在原處，即可出現(xiàn)染色體結(jié)構(gòu)異常。 ? 由于堿基序列所形成的一系列三聯(lián)體密碼子相互間并無標點符號，于是從受損位點開始密碼子的閱讀框架完全改變。 ? 致死突變： 發(fā)生在必需基團上，嚴重影響蛋白質(zhì)功能。 539。 ? 染色體畸變 (chromosome aberration)： 染色體的結(jié)構(gòu)及數(shù)目改變，可用光學(xué)顯微鏡進行觀察。 ? 減數(shù)分裂 (meiosis)： 是一種特殊的有絲分裂，通過兩個細胞周期，細胞核分裂兩次，而染色體只復(fù)制一次，使染色體數(shù)目減少一半，成為單倍體。 二、遺傳學(xué)基礎(chǔ) ? 4. 基因型與表型 ? 基因型： 指控制生物性狀的基因組成，是生物體遺傳性狀發(fā)育的內(nèi)因，是表型形成的根據(jù)。 染色質(zhì)由 DNA、 蛋白 、 及少量的 RNA組成 ， 形似串珠狀的復(fù)合體 。 ? 遺傳毒理學(xué) (geic toxicology)： 主要研究化學(xué)性和放射性物質(zhì)的致突變作用以及人類接觸致突變物可能引起的健康損傷效應(yīng) 。 ? 突變 (mutation)： 生物體遺傳物質(zhì)發(fā)生的突然的、根本的、可遺傳的變化。第七章 外源化學(xué)物致突變作用 第一節(jié) 概 述 一、基本概念 ? 遺傳 (inheritance)： 生物物種在漫長的自然選擇和生物進化過程中，以相對穩(wěn)定的生命形式存在于自然界中，并能持續(xù)不斷的繁衍后代，這個過程就是遺傳。 ? 因為這種變化起源于基因和染色體，所以突變實際上是 遺傳物質(zhì)的一種可遺傳的變異 。 ? 遺傳毒理學(xué)主要研究內(nèi)容： ? 致突變作用及機制； ? 應(yīng)用檢測系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)和探究致突變物； ? 提出評價致突變物健康危害的方法 。 ? 在間期細胞核中 ， 一般沒有染色體結(jié)構(gòu) ， 只有在細胞分裂時 ， 染色質(zhì)才螺旋化并折疊成 染色體 (chromosome)， 故染色質(zhì)與染色體的物質(zhì)組成是相同的 。 ? 表型： 指在發(fā)育過程中由基因所控制的生物性狀的具體表現(xiàn)。 二、遺傳學(xué)基礎(chǔ) The course of mitosis 第二節(jié) 化學(xué)物致突變的類型 突變的分類 ? 自發(fā)突變 (spontaneous mutation) ? 是由于普遍存在的未知因素作用下，在自然條件下發(fā)生的突變。 ? 染色體結(jié)構(gòu)改變 ? 染色體數(shù)目改變 一、基因突變 ? 基因突變： 指基因中 DNA序列的變化。 339。 ? 滲漏突變： 突變的產(chǎn)物仍有部分活性，表現(xiàn)型介于突變型與野生型之間。 ? 如果減少或增加的堿基對剛好是 3對，則基因產(chǎn)物的肽鏈中僅減少或增加一個氨基酸，其后果與堿基置換相似，故不包括在移碼突變范疇。 染色體結(jié)構(gòu)異常的類型 ? ① 缺失 (deletion)： 染色體上丟失了一個片段。 ? 一般情況下 ， 發(fā)生頻率：甲基化 乙基化 高碳烷基化 ? 目前認為最常受到烷化的是： ? 鳥嘌呤的 N7位 ， O6位 ? 腺嘌呤的 N1， N7位 ? 烷化的堿基既可表現(xiàn)出像正常堿基一樣的配對特性 ， 也可有不同的配對特性 ， 主要取決于烷化的位置 。它能夠結(jié)合到 DNA分子上 ， 插入相鄰的堿基對 ， 使它們分開 ， 產(chǎn)生兩個重組子 ， 一個堿基對增多 ， 一個堿基對減少 ， 即造成堿基對的缺失或者額外堿基對的插入 。 ? 甲醛可在體內(nèi)形成有機過氧化物或自由基 ， 間接使嘌呤的化學(xué)結(jié)構(gòu)破壞 ， 最終導(dǎo)致 DNA鏈的斷裂 。 雖然不同化學(xué)物引起 DNA蛋白質(zhì)交聯(lián)物的交聯(lián)有所不同 ， 但 DPC一旦形成 ， 必將對 DNA構(gòu)象與功能產(chǎn)生嚴重影響 。 四、突變的后果 ? 突變的后果 ， 取決于化學(xué)物所作用的靶細胞 ， ? 生殖細胞 ， 其影響有可能遺傳到下一代 。 ? 其他不良后果： 動脈粥樣硬化、衰老等。 MGMT廣泛存在于酵母、大鼠及人類。 嚴格來說 ， 雙鏈斷裂修復(fù)不是修復(fù) ， 而是一種耐受過程 ， 一種以容忍損傷繼續(xù)存在和在高突變率情況下 ， 換取細胞繼續(xù)生存的耐受過程 。 當一個基因座位的最常見的等位基因頻率不超過 ， 這個基因座位即是多態(tài)性 。將試驗觀察到的現(xiàn)象所反映的各種事件統(tǒng)稱為 遺傳學(xué)終點 (geic mdpoint)。 如原核細胞、低等和高等真核細胞，這樣更加具有說服力。 ? 這四個試驗菌株除了含有 his突變 ， 還有一些附加突變 ，檢測時提高試驗敏感性 。 ? 微核試驗 (micronucleus test， MNT)： 是用于染色體損傷和干擾細胞有絲分裂的化學(xué)物的快速檢測方法 。 ? 將固定晾干后的骨髓片，用 Giemsa應(yīng)用液染色 10~15min，輕微沖洗掉玻片上的染色液，置晾片架上晾干?？捎^察到裂隙、斷裂、斷片、染色體環(huán)、雙或多著絲粒染色體和染色體粉碎。同樣方法再固定一次，棄上清液，留約 。 ? 讀片時每張標本片至少要分析 100個中期分裂細胞。如果兩條染色單體間發(fā)生等位交換，可根據(jù)每條染色單體內(nèi)出現(xiàn)深淺不同的染色片段，在光鏡下進行識別，清晰分辨出交換的染色單體，計數(shù) SCE數(shù)，判斷受試物對 DNA是否有損傷作用。 通過檢測拖尾率 ， DNA遷移距離等數(shù)據(jù) ， 可以觀察到 DNA損傷的程度 。 4. 試驗結(jié)果在毒理學(xué)安全性評價中的作用 ? 在評定結(jié)果之前，應(yīng)首先檢查實驗的質(zhì)量控制情況。重復(fù)試驗指在不同時間完成的試驗，而并非試驗中的平行樣本。 ? 優(yōu)點： 此方法檢測低水平 DNA損傷的敏感性高，對樣品的細胞數(shù)要求少，適應(yīng)性高，操作簡便，省時省力。 ? 當 DNA損傷時 ， 會發(fā)生在 S期半保留 DNA程序合成之外的DNA合成 ， 稱之為 程序外 DNA合成 (unscheduled DNA synthesis, UDS)。 ? 姐妹染色單體交換 (sisterchromatid exchange， SCE)： 二條姐妹染色單體之間的物質(zhì)交換就稱為姐妹染色單體交換。 ? 閱片計數(shù)。 ? 細胞通過低滲處理，使染色體均勻散開，然后固定、染色，油鏡下觀察計數(shù)。 ? PCE呈灰藍色，成熟 RBC呈粉紅色， NC呈藍紫色。 ? 常用嚙齒類動物 骨髓嗜多染紅細胞 （ PCE） 做微核試驗 。 結(jié)果判斷 ? 只要一種試驗菌株得到陽性結(jié)果，即認為受試物是致突變物。其遺傳學(xué)終點是基因突變。 ? 其中③指基因突變，④指染色體結(jié)構(gòu)畸變， ⑤ 指染色體數(shù)目改變。 如代謝酶和修復(fù)酶的遺傳多態(tài)性 。 ? 易誤交聯(lián)修復(fù)： 其作用是次要的，指突變作為修復(fù)的結(jié)果或者作為損傷旁路發(fā)生的 DNA修復(fù)，包括整個核苷酸切除修復(fù)和易誤 DNA聚合酶。 堿基切除修復(fù) ? DNA糖基化酶 識別異常的堿基，切斷堿基與脫氧核糖之間的鍵，使受損傷的堿基脫落，形成一個無嘌呤或無嘧啶的位點（ AP位點）； ? AP內(nèi)切酶 將 DNA鏈切斷； ? 插入酶 將正確堿基插入 AP位點； ? DNA聚合酶 合成 DNA片段，填補空缺； ? DNA連接酶 將新合成的互補片接上。 機體修復(fù) DNA損傷的機制可分為兩類 ? 損傷耐受機制： 指遺傳可繞過那些阻止 DNA復(fù)制的 DNA損傷 。 生殖細胞突變的后果 ? 致死性突變（影響后代數(shù)量） ? 顯性致死：突變配子與正常配子結(jié)合后，使精子不能受精，合子在著床前丟失或著床后早期胚胎死亡； ? 隱性致死：需要純合子或半合子才能出現(xiàn)死亡效應(yīng)，雜合子則不出現(xiàn)死亡，可造成生育功能障礙。 二、引起突變的細胞分裂過程的改變 ? 一些化學(xué)物能作用于紡錘體、中心?；蚱渌藘?nèi)細胞器，從而干擾有絲分裂過程，使得染色體