高效液相色譜法：特指一種用液體為流動(dòng)相的色譜分離分析方(完整版)
【正文】 四丁基季胺鹽 → 分析酸 2） 影響 k的因素 a． 與 m的極性有關(guān) （ 同反相色譜 ） b． 與 R的鏈長(zhǎng)有關(guān)： R↑ 長(zhǎng) ， 極性 ↓ 小 ， tR↑ ， k↑ 3） 適用：較強(qiáng)的有機(jī)酸 、 堿 ? 三、離子色譜法（ IC） 2．反相離子抑制色譜 在反相色譜中 ， 通過(guò)加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動(dòng)相 pH值 ， 抑制 組分解離 ， 增加其 k和 tR， 以達(dá)到改善分離的目的 1） 離子抑制劑：弱酸 、 弱堿性物質(zhì) pH一定的緩沖溶液 2） k的影響因素： 與流動(dòng)相極性有關(guān) ， 還與 pH值有關(guān) ? 選擇流動(dòng)相：應(yīng)同時(shí)考慮極性及 pH值 酸性物質(zhì) —— 加入酸 HAc tR↑ ， k↑ 堿性物質(zhì) —— 加入堿 NH339。 （ 蛋白質(zhì) 、 氨 基酸 、 常見(jiàn)陰陽(yáng)離子等 ） 利用多孔凝膠固定相建立空間排阻色譜法可分 離高分子化合物 。它在經(jīng)典色譜理論的基礎(chǔ)上，采用了高壓泵、化學(xué) 鍵合固定相高效分離柱、高靈敏專用檢測(cè)器等新實(shí) 驗(yàn)技術(shù)建立的一種液相色譜分析法。 3． 操作條件差別 GC：加溫操作 HPLC：室溫；高壓 （ 液體粘度大 ， 峰展寬小 ） 1． 貯液罐 （ 濾棒 ， 可濾 去顆粒狀物質(zhì) ） 2． 高壓泵 （ 輸液泵 ） 3． 進(jìn)樣裝置 4． 色譜柱 —— 分離 5． 檢測(cè)器 —— 分析 6． 廢液出口或組分收集器 7． 記錄裝置 ? 二、高效液相色譜儀流程圖 三 、 HPLC的特點(diǎn)和實(shí)際應(yīng)用 利用其高柱效 （ n=104片 /米 ） ， 有效分離極復(fù)雜 體系中的痕量組分 。)()(16 W tWtn RReff ??039。H2O tR↑ ， k↑ ? 調(diào)節(jié) pH范圍： ~ pH 破壞鍵合相與載體的結(jié)合 pH 腐蝕柱子 3） 適用：極弱酸堿物質(zhì) pH=3~7弱酸； pH=7~8弱堿；兩性化合物 2． 對(duì)流動(dòng)相的要求： 1） 與固定液不反應(yīng) 2） 對(duì)樣品有良好溶解度 k=1~10 k=2~5 最理想的 3） 與檢測(cè)器匹配： UV（ 常用 ， 測(cè)定波長(zhǎng)應(yīng)大于溶劑的截止波長(zhǎng) ） 熒光 ， 電化學(xué) 4） 使用粘度小 、 純度高的流動(dòng)相 （ 甲醇 ， 乙腈 ） 使用前過(guò)濾 、 脫氣 3．洗脫方式 1） 等度洗脫 （ 恒組成溶劑洗脫 ） 以固定配比的溶劑系統(tǒng)洗脫組分 （ 一個(gè)泵 ） 類似 GC的等溫度洗脫 2） 梯度洗脫： 在一定分析周期內(nèi)不斷變換流動(dòng)相的種類 和比例 即不斷改變其極性 （ 兩個(gè)泵 ） 適于分析極性差別較大的復(fù)雜組分 類似 GC的程序升溫 （ 沸程較長(zhǎng)樣品 ） 167。39。 用離子型固
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