【正文】 2 * S2 * → S 2 + h? 發(fā)射光譜范圍： 350～ 460 nm； 最大發(fā)射波長(zhǎng)： 394 nm； 靈敏度： ng/cm3； 發(fā)射光強(qiáng)度與硫化物濃度的平方成正比。 二、熒光分析方法與應(yīng)用 1. 特點(diǎn) （ 1） 靈敏度高 比紫外 可見分光光度法高 2～ 4個(gè)數(shù)量級(jí)； 檢測(cè)下限： ～ ?g/cm3 相對(duì)靈敏度： 。 特殊點(diǎn) ：有兩個(gè)單色器 ， 光源與檢測(cè)器通常成直角 。 ③ 轉(zhuǎn)入三重態(tài)的猝滅 分子由于系間的跨越躍遷，由單重態(tài)躍遷到三重態(tài)。 如色胺酸中的重鉻酸鉀 。 ② 溫度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響 溫度上升使熒光強(qiáng)度下降。 特殊溶劑效應(yīng) ：熒光體和溶劑分子間的特殊化學(xué)作用，如氫鍵的生成和化合作用。 5 、金屬螯合物的熒光 除過(guò)渡元素的順磁性原子會(huì)發(fā)生線狀熒光光譜外， 大多數(shù)無(wú)機(jī)鹽類金屬離子，在溶液中只能發(fā)生無(wú)輻射躍遷，因而不產(chǎn)生熒光。 給電子基團(tuán) ， 如 OH、 OR、 CN、 NH2 、 NR2等， 使熒光增強(qiáng)。 總之， ????躍遷是產(chǎn)生熒光的主要躍遷類型。 如外轉(zhuǎn)換過(guò)程速度快 ， 不出現(xiàn)熒光發(fā)射 。 鏡像規(guī)則的解釋 解釋 1：能層結(jié)構(gòu)相似性 熒光為第一電子激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能層躍遷到基態(tài)的各個(gè)振動(dòng)能層而形成 ， 即其形狀與基態(tài)振動(dòng)能級(jí)分布有關(guān) 。 (或磷光光譜 ) 固定激發(fā)光波長(zhǎng)和強(qiáng)度 (選最大激發(fā)波長(zhǎng) ), 讓物質(zhì)發(fā)出的熒光通過(guò)單色器測(cè)定不同波長(zhǎng)的熒光強(qiáng)度。 發(fā)光速度很慢： 104～ 100 s 。 非輻射能量傳遞過(guò)程 3)系間跨躍 指不同多重態(tài)間的無(wú)輻射躍遷，例如 S1→T 1就是一種系間跨躍。 10. 核磁共振波普分析法 在外磁場(chǎng)的作用下，核自旋磁矩與磁場(chǎng)相互作用而裂分為能量不同的核磁能級(jí)，吸收射頻輻射后產(chǎn)生能級(jí)躍遷，根據(jù)吸收光譜可進(jìn)行有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析。一、分子熒光與磷光產(chǎn)生過(guò)程 luminescence process of molecular fluorescence phosphorescence 二、激發(fā)光譜與熒光光譜 excitation spectrum and fluorescence spectrum 三、熒光的產(chǎn)生與分子結(jié)構(gòu)關(guān)系 relation between fluorescence and molecular structure 四、影響熒光強(qiáng)度的因素 factor influenced fluorescence molecular luminescence analysis molecular fluorescence and phosphorescence 第五章 分子發(fā)光分析法 第一節(jié) 分子熒光和磷光 光分析法及其特點(diǎn) 概念 基于電磁輻射能量與待測(cè)物質(zhì)相互作用后所產(chǎn)生的輻射信號(hào)與物質(zhì)組成及結(jié)構(gòu)關(guān)系所建立起來(lái)的分析方法 相互作用方式 發(fā)射、吸收、反射、折射、散射、干涉、衍射等 電磁輻射基本性質(zhì) (1) 吸收 物質(zhì)選擇性吸收特定頻率的輻射能，并從低能 級(jí)躍遷到高能級(jí)； (2) 發(fā)射 將吸收的能量以光的形式釋放出； (3) 散射 丁鐸爾散射和分子散射； (4) 折射 折射是光在兩種介質(zhì)中的傳播速度不同； (5) 反射 (6) 干涉 干涉現(xiàn)象； (7) 衍射 光繞過(guò)物體而彎曲地向他后面?zhèn)鞑サ默F(xiàn)象； (8) 偏振 只在一個(gè)固定方向有振動(dòng)的光稱為平面偏振光。 11. 順磁共振波譜分析法 在外磁場(chǎng)的作用下，電子的自旋磁矩與磁場(chǎng)相互作用而裂分為磁量子數(shù)不同的磁能級(jí)，吸收微波輻射后產(chǎn)生能級(jí)躍遷，根據(jù)吸收光譜可進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。通常，發(fā)生系間跨躍時(shí)，電子由 S1的較低振動(dòng)能級(jí)轉(zhuǎn)移至 T1的較高振動(dòng)能級(jí)處。 光照停止后，可持續(xù)一段時(shí)間。以熒光的波長(zhǎng)（ λ）為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度（ IF）為縱坐標(biāo)作圖，便得熒光光譜。 吸收光譜是由基態(tài)最低振動(dòng)能層躍遷到第一電子激發(fā)單重態(tài)的各個(gè)振動(dòng)能層而形成 ， 即其形狀與第一電子激發(fā)單重態(tài)的振動(dòng)能級(jí)分布有關(guān) 。 2 .化合物的結(jié)構(gòu)與熒光 (1)躍遷類型 對(duì)于大多數(shù)熒光物質(zhì)，首先經(jīng)歷 ????或 n(非鍵電子軌道 )???激發(fā)，然后經(jīng)過(guò)振動(dòng)弛豫或其它無(wú)輻射躍遷，再發(fā)生 ????或???n躍遷而得到熒光。 (2)共軛效應(yīng) 容易實(shí)現(xiàn) ????激發(fā) 的芳香族化合物容易發(fā)生熒光，能發(fā)生熒光的脂肪族和脂環(huán)族化合物極少 (僅少數(shù)高度共軛體系化合物除外 )。 因?yàn)楫a(chǎn)生了 p?共軛作用，增強(qiáng)了 ?電子共軛程度，使最低激發(fā)單重態(tài)與基態(tài)之間的躍遷幾率增大。 但是，在某些情況下，金屬螯合物卻能產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光，并可用于痕量金屬元素分析。 一般溶劑效應(yīng)是普遍的，而特殊溶劑效應(yīng)則決定于溶劑和熒光體的化學(xué)結(jié)構(gòu)。 其中一個(gè)原因是分子的內(nèi)部能量轉(zhuǎn)化作用。 如 熒光物質(zhì)的熒光發(fā)射光譜的短波長(zhǎng)的一端與該物質(zhì)的吸收光譜的長(zhǎng)波長(zhǎng)一端有重疊 ， 產(chǎn)生“自吸收”現(xiàn)象 ， 而降低了溶液的熒光強(qiáng)度 ， 如蒽化合物 。轉(zhuǎn)入三重態(tài)的分子在常溫下不發(fā)光，它們?cè)谂c其它分子的碰撞中消耗能量而使熒光猝滅。 光源： 氙燈 、 高壓汞燈 ， 染料激光器 (可見與紫外區(qū) ) 樣品池： 石英 (低熒光材料 ) 單色器： 選擇激發(fā)光波長(zhǎng)的第一單色器和選擇發(fā)射光 (測(cè)量 )波長(zhǎng)的第二單色器； 檢測(cè)器： 光電倍增管 。 （ 2） 選擇性強(qiáng) 可同時(shí)用激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜定性 。 （ 3） 液相化學(xué)發(fā)光反應(yīng) 機(jī)理研究較多，在分析中應(yīng)用最多；可測(cè)痕量的 H2O2 、Cu、 Mn、 Co、 V、 Fe、 Cr、 Ce、 Hg、 Th等。 5. 化學(xué)與生物發(fā)光分析的應(yīng)用 （ 1） 該發(fā)光反應(yīng)速度慢，某些金屬離子可催化反應(yīng)；利用這一現(xiàn)象可間接測(cè)定這些金屬離子。 Mol/L的 ATP， 即可檢測(cè)出一個(gè)細(xì)菌中的 ATP含量 2. 儀器設(shè)備簡(jiǎn)單 不需要光源 、 單色器和背景校正； 3. 發(fā)射光強(qiáng)度測(cè)量無(wú)干擾 無(wú)背景光 、 散射光等干擾； 4. 線性范圍寬 5. 分析速度快 缺點(diǎn)： 可供發(fā)光用的試劑少；發(fā)光反應(yīng)效率低 （ 大大低于生物體中的發(fā)光 ） ；機(jī)理研究少 。這是由于兒茶素嵌插進(jìn) DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生電荷轉(zhuǎn)移，進(jìn)而改變了自身激發(fā)態(tài)的電子態(tài)，導(dǎo)致熒光降低。 葡萄糖氧化酶 草酸二酯 (能量提供體 )+高濃度雙氧水 +稠環(huán)芳烴 (能量接受體)+金屬離子 +溶劑組成的反應(yīng)體系，可發(fā)出很強(qiáng)的可見光，發(fā)光效率高，使用不同的稠環(huán)芳烴，發(fā)射出不同顏色的光 (冷光源 )。 魯米諾作為一種有效的化學(xué)發(fā)光試劑。 2. 定量 依據(jù)與方法 (1)定量依據(jù) 熒光強(qiáng)度 If正比于 吸收的光量 Ia和熒光量子效率 ? ：