【正文】 含有 100u/ml青霉素、 100u/ml鏈霉素和 10%新生小牛血清的 RPMI1640培養(yǎng)液內(nèi)，置 37 C0 , 5% C02孵箱中傳代培養(yǎng)，每 23天傳代一次，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于試驗(yàn)。 ② 兩種藥物的聯(lián)合作用指數(shù) (bination index,CI)的計(jì)算公式為： CI=(D)1/(Dx)1+(D)2/(Dx)2+α(D) 1(D) 2/(Dx)1(Dx) 2 (Dx)1和 (Dx)2為兩種藥物單獨(dú)應(yīng)用產(chǎn)生 x%細(xì)胞 IR時(shí)所需的濃度 ,(D)1和 (D)2為兩種藥物合用產(chǎn)生相同的 x%細(xì)胞 IR時(shí)各自所需要的濃度。取出爬片， PBS洗滌 2次，室溫下 4%多 聚甲醛固定 30min。 材料與方法 2材料 亞砷酸注射液為哈爾濱伊達(dá)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。 停藥后，用 40g/L多聚甲醛（ ） PB 固定液全身灌注固定法獲取肝臟、肺臟標(biāo)本。 2統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量資料以 χ 177。 ②臍靜脈灌注阿霉素治療組： 30 例；阿霉素注射液， 10mg/d， qd 21。 二、可行性分析 本課題基于大量臨床治療 HCC+ PVTT 病例、結(jié)合目前本領(lǐng)域研究動(dòng)向的基礎(chǔ)上，采用手術(shù)聯(lián)合藥物活性優(yōu)化經(jīng)臍靜 脈貫序治療 HCC+ PVTT 新模式，已取得較好的臨床療效（初步得出“ HCC+ PVTT 臨床分組對(duì)照實(shí)驗(yàn)”的 患 者的 3 年生存率提高 %、 %以上）。從 臍靜脈泵皮下留置時(shí)間 1年，到 改進(jìn)后 2年，再到 導(dǎo)絲引導(dǎo)下臍靜脈泵更換技術(shù)后 35年。闡述 本課題采用手術(shù)聯(lián)合藥物活性優(yōu)化經(jīng)臍靜脈貫序治療 HCC+ PVTT新模式的作用 機(jī)制。確定了“ 高轉(zhuǎn)移人肝癌裸鼠模型LCI— D20”的各實(shí)驗(yàn)組藥物劑量和研究腫瘤發(fā)展影響的四個(gè)檢測(cè)指標(biāo) PCNA、 VEGF、 ICAM1 16 和 Apoptosis Index 和檢測(cè)的方法；初步得出“ HCC+ PVTT 臨床分組對(duì)照實(shí)驗(yàn)”的 患者的 3 年生存率提高 %、 %以上；同時(shí)減少了全身化療反應(yīng)， 負(fù)作用反應(yīng)率明顯降低的。腫瘤基因芯片（ BiostarⅠ）有上海博星基因芯片責(zé)任有限公司購(gòu)進(jìn)。已具備各類病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，陸續(xù)開(kāi)展免疫組化檢查， ELISA法檢測(cè) 血液中 VEGF 及 ICAM1的含量，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞技術(shù)等。 2020 年主持省教育廳科技攻關(guān)項(xiàng)目“超聲定位下臍靜脈置泵灌注亞砷酸治療原發(fā)性肝癌臨床研究 ” 。 第二部分（ 2020年 6月 — 2020年 8月） ：高轉(zhuǎn)移人肝癌裸鼠模型 LCI— D20實(shí)驗(yàn)，探討亞砷酸 +派羅欣 +丹參的藥物活性優(yōu)化抗腫瘤的機(jī)制。分析觀察兩種藥物聯(lián)用在很寬的效 應(yīng)范圍內(nèi)存在協(xié)同效應(yīng)與藥物應(yīng)用的先后順序是否無(wú)關(guān)。 腫瘤學(xué)研究數(shù)據(jù)分析 3治療學(xué)角度：研究顯效率， 3年生存率，手術(shù)切除率、二期手術(shù)切除率、負(fù)作用反應(yīng)率。 病例收集、選擇和分組 2病例選擇： 90名病例，來(lái)源于河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院在 2020年 — 2020年收治的住院病人，病理確診為 HCC+ PVTT；年齡 30— 65歲、性別不限。對(duì)照組平均瘤體 100%)和抑轉(zhuǎn)移率 (抑轉(zhuǎn)移率 =（對(duì)照組平均轉(zhuǎn)移率 — 實(shí)驗(yàn)組平均轉(zhuǎn)移率）247。免疫組織化學(xué)試劑購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。 ⑴ 在已準(zhǔn)備好的 BEL7402 細(xì)胞瓶中分別加入亞砷酸治療組、派羅欣治療組、丹參治療組和藥物活性優(yōu)化組，另設(shè)一瓶不加藥物為對(duì)照， 5% C02孵箱中培養(yǎng) 48h. ⑵ 用 %胰酶將細(xì)胞消化脫壁， PBS洗滌 2次，用冷 PBS制備細(xì)胞懸液 ，加5m1 75%冷乙醇固定，加 RNA酶及碘化丙淀，閉光染色 30 mm。如果 CI=1,則認(rèn)為兩種藥物的聯(lián)合作用為相加作用。取 4孔 A值平均數(shù)。 派羅欣注射液（聚乙二醇化干擾素 a） 購(gòu)自 Hoffman Roche 公司上海分公司，丹參注射液有上 海第九制藥廠生產(chǎn)。 通過(guò)高轉(zhuǎn)移人肝癌裸鼠模型 LCI— D20，對(duì)空白對(duì)照組、 5Fu陽(yáng)性對(duì)照組和藥物活性優(yōu)化治療組施行分組對(duì)照，從形態(tài)學(xué)角度觀察腫瘤體積、抑癌率、抑轉(zhuǎn)移率和從分子學(xué)角度對(duì)肝癌的增殖能力、肝癌細(xì)胞凋亡、腫瘤血管的形成和肝癌轉(zhuǎn)移傾向進(jìn)行研究，探討亞砷酸 +派羅欣 +丹參的藥物活性優(yōu)化抗腫瘤的機(jī)制。通過(guò)河南大學(xué)天然藥物研究所、河南大學(xué)醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室和河南大學(xué)植物逆境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行交叉學(xué)科協(xié)作。其特點(diǎn)：一方面增加了肝臟局部的藥物濃度，封殺了 HCC經(jīng)門靜脈轉(zhuǎn)移易產(chǎn)生 PVTT特點(diǎn)；另一方面克服了門靜脈置泵化療容易形成血栓的缺點(diǎn)，又解除了患者因傳統(tǒng)化療帶來(lái)痛苦。派羅欣（聚乙二醇化干擾素）具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、誘導(dǎo)細(xì)胞分化和抗腫瘤血管形成；長(zhǎng)期應(yīng)用可降低與 病毒持續(xù)狀態(tài)相關(guān)的HCC發(fā)生率和 HCC+PVTT術(shù)后的復(fù)發(fā) ［ 12］ 。 ① 治療途徑創(chuàng)新的研究 ： 目 前 HCC+PVTT的治 療多采取以肝癌切除 +門靜脈切開(kāi)取癌 栓術(shù)為主綜合治療。 課題研究理論意義和應(yīng)用價(jià)值 ： 本課題 通過(guò)基 礎(chǔ)和臨床系列研究， 從細(xì)胞學(xué)、藥效學(xué)、腫瘤分子生物學(xué)、基因?qū)W等方面，多角度、多層次地 ， 揭示 手術(shù)聯(lián)合藥物活性優(yōu)化經(jīng)臍靜脈灌注治療 HCC+ PVTT治療作用的機(jī)制 ， 探討有效地預(yù)防及治療 HCC+PVTT的新策略， 達(dá)到 規(guī)范化治療 ， 易于推廣，可轉(zhuǎn)化為成果， 有效地降低治療原發(fā)性肝癌綜合醫(yī)療費(fèi)用， 勢(shì)必產(chǎn)生不可估量經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。而非手術(shù)組中 , 行介入治療組的療效又要優(yōu)于 保守治療組。一方面 HCC無(wú)限增殖能力（ PCNA） ［ 4］ 和凋亡的障礙 ［ 5］，使腫瘤細(xì)胞過(guò)度增殖，并分泌大量的 VEGF，促進(jìn)大量結(jié)構(gòu)和功能異常腫瘤血管的形成，向癌組織周圍血管化浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移 ［ 6］ 。② 通過(guò)裸鼠肝癌的模型，從形態(tài)學(xué)觀察腫瘤體積、抑癌率、抑轉(zhuǎn)移率和從腫瘤學(xué)研究肝 癌增殖能力、肝癌細(xì)胞凋亡、腫瘤血管形成和肝癌轉(zhuǎn)移傾向 , 探討藥物活性優(yōu)化對(duì) HCC發(fā)展的影響。 2430 血液病學(xué) 330 預(yù)防醫(yī)學(xué)與衛(wèi)生學(xué) 簡(jiǎn) 表 編號(hào)： 3 項(xiàng)目名稱 藥物活性優(yōu)化經(jīng)臍靜脈治療 HCC+PVTT作用機(jī)制的研究 學(xué)科代碼 320 57 精神病學(xué) 910 17 理 療學(xué) 320 37 眼科學(xué) 350 2799 外科學(xué)其他學(xué)科 350 藥學(xué) 320 2755 整形外科學(xué) 330 61 勞動(dòng)衛(wèi)生學(xué) 310 41 醫(yī)學(xué)微生物學(xué) 320 31 放射醫(yī)學(xué) 320 2499 內(nèi)科學(xué)其他學(xué)科 330 14 毒理學(xué) 310表達(dá)要明確、嚴(yán)謹(jǐn)、詳細(xì)、具體，內(nèi)容請(qǐng)務(wù)必打印，必要時(shí)另附詳細(xì)技術(shù)材料。 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 學(xué) 科 分 類 與 代 碼 Classification and code of disciplines (GB/T 1374592) 代碼 學(xué)科名稱 代碼 學(xué)科名稱 代碼 學(xué)科名稱 0 310 2450 變態(tài)反應(yīng)學(xué) 330 27 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué) 320 37 醫(yī)學(xué)寄生蟲學(xué) 320 57 環(huán)境衛(wèi)生學(xué) 310 2750 燒傷外科學(xué) 330 99 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)其他學(xué)科 320 34 兒科學(xué) 350 1430 老年醫(yī)學(xué) 320 24 內(nèi)科學(xué) 320 67 腫瘤學(xué) 320 起止時(shí)間 2020年 5月 2020年 5