【正文】 然后根據(jù)滅菌的F0值及污染菌的數(shù)量與耐熱性對產(chǎn)品的無菌做出評價。裝載熱分布試驗(yàn)的目的是了解設(shè)備在裝載條件下內(nèi)部的溫度分布狀況，包括高溫點(diǎn)、低溫點(diǎn)的位置，為后續(xù)的評估和驗(yàn)證打下基礎(chǔ)。每一裝載量的熱分布試驗(yàn)需要至少進(jìn)行三次。同時滅菌程序又不應(yīng)使產(chǎn)品受熱過度而造成藥物部分降解，以致同一滅菌批次的產(chǎn)品出現(xiàn)質(zhì)量不均一。熱穿透試驗(yàn)的步驟及要求與裝載的熱分布試驗(yàn)基本相同，每一裝載方式的熱穿透試驗(yàn)也需要至少進(jìn)行三次。在物理確認(rèn)試驗(yàn)中，應(yīng)確認(rèn)關(guān)鍵和重要的操作參數(shù)并有相應(yīng)的文件和記錄。滅菌階段結(jié)束時的最低F0值最少正常運(yùn)行的探頭數(shù)生物學(xué)確認(rèn)濕熱滅菌工藝常用的生物指示劑有以下幾種，嗜熱脂肪芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌，凝結(jié)芽孢桿菌，梭狀芽孢桿菌等。所以對于具體的品種而言，如果需要將生物指示劑接種至產(chǎn)品之中，應(yīng)測定生物指示劑在該產(chǎn)品中的耐熱性，即D值。滅菌柜的其他部位應(yīng)裝載產(chǎn)品或者類似物，以盡可能的模仿實(shí)際生產(chǎn)時的狀況。需要注意不同的生物指示劑所需要的培養(yǎng)條件也各不相同，針對使用的生物指示劑確定培養(yǎng)條件，同時應(yīng)放置陰性和陽性對照樣品。3制劑無菌生產(chǎn)工藝無菌分裝生產(chǎn)工藝是將采用經(jīng)驗(yàn)證的滅菌/除菌工藝過程處理后的原料藥或者原料藥和輔料，用無菌生產(chǎn)的方法分裝到采用經(jīng)驗(yàn)證的滅菌工藝處理的容器中，密封得到的。分裝步驟是影響產(chǎn)品質(zhì)量和無菌保證水平的關(guān)鍵生產(chǎn)步驟，應(yīng)結(jié)合生產(chǎn)設(shè)備和產(chǎn)品特點(diǎn)進(jìn)行工藝參數(shù)的研究，包括分裝速度和分裝時間等。采用過濾除菌工藝時，同樣需要對影響無菌保證水平的工藝步驟及工藝參數(shù)進(jìn)行詳細(xì)的研究，主要包括物料的質(zhì)量控制、除菌過濾器的選擇及除菌過濾工藝參數(shù)的研究、除菌過濾生產(chǎn)過程的控制等。過濾步驟的工藝參數(shù)，如過濾的壓力、流速、時間、溫度等；③對于除菌過濾無菌生產(chǎn)工藝的驗(yàn)證，還包括對除菌過濾系統(tǒng)的驗(yàn)證，如過濾器的微生物截留驗(yàn)證、過濾器與待過濾藥液的相容性驗(yàn)證、過濾器的完整性驗(yàn)證等。某些特殊情況下也可以選用厭氧生長培養(yǎng)基，如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（FTM）。在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)中，需進(jìn)行陽性對照試驗(yàn)，即取低濃度的菌種接種于進(jìn)行陽性試驗(yàn)用的對照容器中，與培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)在同一條件下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)需要對所有灌裝樣品進(jìn)行培養(yǎng)和無菌檢查。應(yīng)盡可能的進(jìn)行微生物負(fù)荷的鑒別和量化研究，掌握所分離的微生物的形態(tài)學(xué)特征，為挑戰(zhàn)性微生物的選擇提供依據(jù)。建議對實(shí)際生產(chǎn)的過濾工藝進(jìn)行一次徹底評估，包括溶劑性質(zhì)（例如水性的、酸、堿、有機(jī)的）、過濾時間、工藝壓差、工藝流速、工藝溫度和過濾器設(shè)計(jì)規(guī)范，以便合理設(shè)計(jì)微生物截留試驗(yàn)條件。影響釋放物的因素可能包括過濾液的化學(xué)性質(zhì)、滅菌方法、接觸時間、溫度和過濾量與面積之比。如果使用了替代溶液或幾種溶液合并的方式，則必須提供溶液選擇的合理依據(jù)。化學(xué)相容性試驗(yàn)應(yīng)涵蓋整個裝置，試驗(yàn)的設(shè)計(jì)應(yīng)考慮料液性質(zhì)、過濾溫度和接觸時間等。吸附試驗(yàn)條件可以根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)條件確定，流速、過濾時間、料液濃度、防腐劑濃度、溫度和pH值等因素都可能影響吸附效果。與無菌制劑工藝相比，無菌原料藥的生產(chǎn)工藝一般要更復(fù)雜，設(shè)備類型多種多樣，且不同的工藝有不同的特點(diǎn)。目前生產(chǎn)上最常用的方法是無菌過濾法；即將非無菌的中間體或原材料配制成溶液。除菌過濾環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注濾器本身的無菌性、過濾器與料液的相容性、濾芯本身及裝配后的完整性、過濾器的清洗及滅菌周期、過濾器的除菌效率、除菌濾器前料液的微生物污染水平等。無菌原料藥工藝驗(yàn)證對于常規(guī)生產(chǎn)批量較大的無菌原料藥，考慮到模擬大生產(chǎn)批量的可行性和實(shí)際介質(zhì)培養(yǎng)的可行性，模擬灌裝批量可以比大生產(chǎn)批量小，但模擬介質(zhì)應(yīng)能夠接觸到所有產(chǎn)品可能接觸的設(shè)備內(nèi)表面。其它要求可參考無菌制劑的驗(yàn)證相關(guān)內(nèi)容。附件3：生物指示劑用量的確定方法。其中NO為滅菌前容器內(nèi)初始孢子數(shù)，Nt為滅菌后容器內(nèi)殘存孢子數(shù)。+SLR=/Dbi根據(jù)公式：需要說明的是，在常規(guī)的生產(chǎn)條件下，如采用115℃滅菌30分鐘，假定采用的生物指示劑的D值為1，那么，計(jì)算得到的生物指示劑的用量為106，這也是微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)時常規(guī)采用的用量?？梢缘玫剑焊鶕?jù)公式：①制樣：將產(chǎn)品中的微生物分離，將菌膜或者孢子懸浮液分別放入注射用水或者磷酸鹽緩沖液中，采用適宜的設(shè)備振動使其分散均勻，制備成濃度約為108個/ml的懸浮液，然后在沸水中加熱約10分鐘以殺滅可能存在的芽孢繁殖體。最差條件其中除冷凍干燥環(huán)節(jié)外，其它工藝步驟的關(guān)注重點(diǎn)可參考溶媒結(jié)晶工藝的相關(guān)要求。干燥環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注干燥設(shè)備無菌性、密封性能及密封裝置的可靠性、清洗及滅菌周期、呼吸器的完整性及無菌性，以及真空系統(tǒng)的防倒吸設(shè)置（如使用真空，應(yīng)在管路上安裝除菌級別的過濾器）。對于采用最終滅菌的無菌原料藥，必須嚴(yán)格控制微生物污染、細(xì)菌內(nèi)毒素和不溶性微粒的水平。另外，原料藥的生產(chǎn)設(shè)備通常體積較大且內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜，在選擇放置位置或進(jìn)行投料、取樣、回收操作時應(yīng)考慮如何保證潔凈區(qū)內(nèi)的氣流流向符合要求，以及如何匹配好高效過濾器的位置與設(shè)備本體之間的位置分布等。無菌原料藥是指在法定的藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定無菌檢查項(xiàng)目的原料藥。可以用靜態(tài)浸泡或循環(huán)流動的方法?？紤]到析出物的來源不同和影響析出物的因素較多，建議過濾器使用者在開展研究時盡可能使用實(shí)際產(chǎn)品，并使用與實(shí)際生產(chǎn)相同類型的過濾器。物理完整性檢測應(yīng)使用已有規(guī)范值的水、產(chǎn)品或其它潤濕流體來進(jìn)行測試，并在進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)前完成。（1）挑戰(zhàn)用微生物的選擇如果試驗(yàn)中需要使用模擬分裝用粉末，同樣需要對模擬分裝用粉末進(jìn)行選擇和質(zhì)量控制。培養(yǎng)基的微生物生長性能：在按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程制備培養(yǎng)基并滅菌后，可按照中國藥典附錄進(jìn)行培養(yǎng)基微生物生長性能試驗(yàn)，確認(rèn)所制備的培養(yǎng)基應(yīng)出現(xiàn)明顯的所接種的微生物的生長。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)需要選擇合適的培養(yǎng)基，并對培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行控制。新建的無菌生產(chǎn)工藝的生產(chǎn)線在正式投產(chǎn)前必須進(jìn)行連續(xù)三批無菌培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。在實(shí)際生產(chǎn)過程中，在過濾除菌前后均需要進(jìn)行濾器完整性測試。各種物料的滅菌/除菌工藝，都應(yīng)是經(jīng)過驗(yàn)證的、控制良好的工藝。如確實(shí)無法耐受終端滅菌工藝，則可采用無菌生產(chǎn)工藝。驗(yàn)證新的滅菌工藝時，每個產(chǎn)品的每個規(guī)格的每一滅菌程序，至少需要連續(xù)進(jìn)行三次生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)。生物指示劑的用量可以采用陰性分?jǐn)?shù)法或者殘存曲線法計(jì)算，可以根據(jù)實(shí)際情況（如污染菌的耐熱性，擬用的生物指示劑的D值等）選擇合適的計(jì)算方法，具體檢測方法見附件3?！嬷畠?nèi)，如果溫度差別過大，提示滅菌柜的性能不符合要求，需要尋找原因并進(jìn)行改進(jìn)，重新進(jìn)行驗(yàn)證。熱穿透溫度探頭之間的最大溫差或F0探頭測得的溫度與設(shè)定溫度之間的差值對于F0值最大點(diǎn)位置的樣品，由于其受熱情況最為強(qiáng)烈，因此應(yīng)評估該位置下產(chǎn)品的穩(wěn)定性情況，以進(jìn)一步確認(rèn)滅菌對于產(chǎn)品的穩(wěn)定性沒有影響。應(yīng)將熱穿透溫度探頭置于液體容器中的冷點(diǎn)，即整個包裝中最難滅菌的位置。熱穿透試驗(yàn)溫度探頭在試驗(yàn)前后至少需要兩個溫度點(diǎn)進(jìn)行校正。濕熱滅菌工藝的驗(yàn)證一般分為物理驗(yàn)證和生物學(xué)驗(yàn)證兩部分，物理驗(yàn)證包括熱分布、熱穿透試驗(yàn)，生物學(xué)驗(yàn)證主要是微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。分離獲得的污染菌需要進(jìn)行耐熱性的檢查。在工藝參數(shù)控制方面，由于微生物的特性，通常在藥液放置期間也會逐漸繁殖，尤其一些營養(yǎng)型的注射液，如葡萄糖注射液、復(fù)方氨基酸注射液等，其環(huán)境更有利于微生物的生長和繁殖，因此應(yīng)通過工藝篩選和驗(yàn)證來確定溶液配制至過濾前、以及過濾后至滅菌前能夠放置的最長時限，并相應(yīng)確定產(chǎn)品的批量、生產(chǎn)周期等關(guān)鍵工藝參數(shù)。無菌保證值=過度殺滅法假設(shè)的生物負(fù)荷和耐熱性都高于實(shí)際數(shù)，而大多數(shù)微生物的耐熱性都比較低，很少發(fā)現(xiàn)自然生成的微生物的D121℃。滅菌時，殺滅微生物的效果和活性成分的降解都隨著時間和溫度而累積?？傊?，需要通過各個方面的研究，使藥物盡可能的可以采用濕熱滅菌工藝。通過對活性成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，可以初步判斷活性成分的穩(wěn)定性，如果活性成分結(jié)構(gòu)中含有一些對熱不