【正文】 后，觀測(cè)植株或器官形成愈傷組織、生根、發(fā)芽的能力等，以判斷林木的抗寒性，這種方法較可靠，但花費(fèi)時(shí)間長，不能正確地區(qū)分傷害發(fā)生的部位。植物細(xì)胞內(nèi)的不飽和脂肪酸含量越高，則膜脂相變的溫度越低，更容易保持膜的正常功能和膜的流動(dòng)性，則植物的抗寒性就越強(qiáng)，反之，植物的抗寒性就越差，這種方法準(zhǔn)確度較高，但其成本較高。低溫導(dǎo)致植物細(xì)胞膜選擇透性改變或者喪失，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的大量外滲，組織浸泡液電導(dǎo)率增高。植物在遭到低溫脅迫后，MDA含量隨著植物傷害程度加大而升高，MDA能引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性。在低溫脅迫下，植物體中保護(hù)酶活性的強(qiáng)弱直接關(guān)系到抗低溫傷害的能力（劉鴻先等，1985）。 氣候條件影響植物的分布、生長發(fā)育，而水分條件是決定植物發(fā)展類型的主要限制條件。二是大氣干旱。目前常采用聚乙二醇（PEG）滲透脅迫法。顧振瑜等在研究1年生元寶楓幼苗在土壤干旱脅迫下生長反應(yīng)時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨土壤含水量降低，幼苗的株高、根長、莖葉重、根重、莖粗均隨之降低(顧振瑜，1999)。丙二醛（MDA）是膜質(zhì)過氧化降解的產(chǎn)物，因其測(cè)定方法簡便易行，且能夠表示植物的氧化脅迫狀況，因此，測(cè)定植物脅迫下MDA含量的變化可以了解植物脅迫下的膜脂過氧化程度（王榮華，2003）。2引言大葉冬青（Ilex latifolia)又名苦丁茶，是冬青科冬青屬常綠闊葉喬木。由于大葉冬青主要分布地為溫暖濕潤的氣候，因此干旱、低溫是其引種的主要限制因子。因此，探討干旱脅迫下大葉冬青的生理指標(biāo)的變化對(duì)于園林應(yīng)用及抗旱栽培具有重要意義（Gergely，1980）。處理24h后取第5片葉以上的莖段和葉片測(cè)定相關(guān)生理指標(biāo)。然后每3h降低5℃，直至降到6℃。每個(gè)處理4盆（1株/盆），3次重復(fù)。共測(cè)定3次電導(dǎo)率（1）1min后震蕩搖勻用電導(dǎo)儀測(cè)定電導(dǎo)值E0，（2）在室溫下放置24h后，充分搖勻測(cè)定電導(dǎo)值E1，（3）測(cè)完E1后，在沸水浴中加熱15min后，冷卻至室溫測(cè)定電導(dǎo)值E2，根據(jù)公式計(jì)算出相對(duì)電導(dǎo)率（L）。取新鮮葉片，擦凈表面的污物，剪碎混勻，共四份。以不照光的對(duì)照管做空白，分別測(cè)定其它各管在560nm處的吸光值。試劑：蒸餾水；=；30%的H2O2。4ml 5％TCA沖洗轉(zhuǎn)移至離心管中；在3000r/min下離心10min，提取上清夜。這可能是大葉冬青為了維持正常的光合作用主動(dòng)適應(yīng)低溫環(huán)境的結(jié)果,表現(xiàn)在葉綠素上就是其含量有所回升。在低溫脅迫下植物的細(xì)胞膜會(huì)遭到破壞，質(zhì)膜透性增大，從而使植物細(xì)胞的電導(dǎo)率增大，抗寒性較強(qiáng)的植物細(xì)胞不僅透性增大的程度較小，并且透性的變化可以逆轉(zhuǎn)，易于恢復(fù)正常（劉鵬，2004）。6℃、0℃處理在整個(gè)過程變化幅度較小，%、%。24h以上處理時(shí)間對(duì)應(yīng)的“S”形曲線可以計(jì)算出拐點(diǎn)溫度，℃℃之間(見表41)，這是大葉冬青抗寒能力的重要指標(biāo)。48h時(shí)各處理MDA含量持續(xù)上升，至72h處理時(shí)各處理MDA含量均達(dá)到峰值，%、%、%、%。 圖48 緩慢降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量的變化Fig48 Effect of slow cooling chill stress on SS content of broadleaf holly leaves由圖48可以看出，可溶性糖含量總的趨勢(shì)是隨著脅迫時(shí)間的延長，而呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)。驟然降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量的變化見圖49所示。緩慢降溫下大葉冬青葉片SOD活性的變化見圖410。圖11驟然降溫下大葉冬青葉片SOD活性的變化Fig411 Effect of slow cooling chill stress on SOD activity of broadleaf holly leaves由圖411，大葉冬青在驟然降溫下葉片內(nèi)SOD活性隨著時(shí)間變化的曲線，可以看出，3個(gè)低溫處理與對(duì)照相比，都出現(xiàn)了先升后降的“Z”形變化趨勢(shì)，這與緩慢降溫SOD活性的變化不同。圖412 緩慢降溫下大葉冬青葉片POD活性的變化Fig412 Effect of rapid cooling chill stress on POD activity of broadleaf holly leaves由圖412可知，緩慢降溫下大葉冬青葉片POD活性都低于對(duì)照。在低溫脅迫24h時(shí)，三者POD活性的變化較為緩慢，POD的活性分別是444 u?g1FW?min1 、458 u?g1FW?min557 u?g1FW?min1，%、%、%。但在較低溫度的持續(xù)脅迫下，CAT活性都有不同程度下降，至72h時(shí)，0 ℃、6 ℃處理下CAT活性仍高于對(duì)照，保持了較高的CAT活性。在低溫脅迫下，膜脂過氧化的加劇，致使植物滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)合成速度減小，滲透調(diào)節(jié)能力降低，葉綠素含量下降，致使植物生成機(jī)制遭到破壞?？芍苯臃从持参飳?duì)干旱脅迫的抵抗能力，通過測(cè)定葉綠素含量的變化可以確定大葉冬青抗旱性的強(qiáng)弱。隨著干旱脅迫時(shí)間的延長，從第9天到第15天葉綠素含量與對(duì)照差異并不顯著（見表51），這是大葉冬青對(duì)干旱脅迫的一種適應(yīng)（黃顏梅等，1998；王金錫等，1995），在干旱脅迫下，葉綠素含量表現(xiàn)出了較強(qiáng)的穩(wěn)定性，這是耐旱植物的生理特點(diǎn)之一（李在軍等，2006）。 干旱脅迫對(duì)大葉冬青葉片SOD活性的影響 超氧化物歧化酶(SOD)是植物體內(nèi)清除自由基的最關(guān)鍵的保護(hù)酶之一，它能催化生物體內(nèi)氧活化的第一個(gè)中間產(chǎn)物O2發(fā)生歧化反應(yīng)，生成O2和H2O2，從而起到清除活性氧，維護(hù)氧代謝平衡的重要作用。而S3處理產(chǎn)生不可逆的下降，說明SOD的防御和清除自由基的能力只在一定范圍內(nèi)有效，一旦超出了其范圍，SOD就會(huì)失活。過氧化氫過多，則會(huì)造成植物體內(nèi)生理系統(tǒng)的紊亂，破壞膜的結(jié)構(gòu)。說明隨著脅迫濃度的增加，POD清除能力也隨之增加。各處理的SOD活性峰值均在第3天就出現(xiàn)了，%，%，%，說明干旱脅迫激活了SOD活性的水平，使其清除自由基的能力加強(qiáng)，且隨著脅迫濃度的增加，其激活程度也較大。 圖52 干旱脅迫下大葉冬青葉片MDA含量的變化Fig52 The contents variation of MDA on Broadleaf Holly leaf under drought stress表52 不同干旱脅迫處理下大葉冬青葉片MDA含量隨時(shí)間變化的方差分析（單位：μmol﹒g1FW）Table52 Different drought stress treatments Broadleaf Holly leaf MDA changes with time analysis of variance處理Treatment處理時(shí)間Treating Time0 d3 d6 d9 d12 d15 d18 dCK a a a a a a aS1 a a a ab b bcd abS2 a a a ab b ab bS3 a a a b b d c由圖52可以看出，從脅迫開始至第9天，除S3處理葉片MDA含量增幅稍大以外，其余處理與CK相差不大，并且在這段時(shí)間內(nèi)都保持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的水平，這說明輕度的干旱脅迫尚未對(duì)大葉冬青產(chǎn)生明顯傷害。注：表中不同字母表示差異顯著（p），下同. Note: Different letters indicate significance（p）,The same as below.由圖51可知，隨著PEG脅迫，與CK比較SS2處理水平下在第3天時(shí)葉綠素含量就有所上升，而S3處理下葉綠素含量有所降低，并且差異顯著。表明在整個(gè)低溫脅迫過程，這些物質(zhì)都不能有效清除MDA對(duì)細(xì)胞膜的傷害，不同物質(zhì)在不同階段對(duì)MDA直接清除作用是不同的。%、 %、%。緩慢降溫下大葉冬青葉片CAT活性的變化如圖414所示。12℃、18℃%、% 。 低溫脅迫對(duì)大葉冬青葉片POD活性的影響POD酶對(duì)植物的作用比較復(fù)雜，目前認(rèn)為它是具有雙重效應(yīng)的一種酶。0℃、6℃處理下，SOD活性升高，表明SOD能有效地清除活性氧等各種自由基對(duì)植株的傷害，避免了活性氧等各種自由基的大量積累,此溫度下不會(huì)對(duì)大葉冬青造成傷害。表明低溫脅迫適應(yīng)后，植物體內(nèi)仍存在某種機(jī)制，調(diào)節(jié)體內(nèi)糖含量的增加以增加其對(duì)低溫脅迫的適應(yīng)能力。48h時(shí)6 ℃、12 ℃、18 ℃處理下大葉冬青葉片的可溶性糖開始下降。表現(xiàn)為三個(gè)階段，即冷激階段（24h）、適應(yīng)階段（48h）、和傷害階段（72h后）。緩慢降溫下大葉冬青葉片MDA含量的變化見圖46所示。大部分研究者認(rèn)為,植物材料在傷害度為50%時(shí)的脅迫因子的水平具有特殊的生理學(xué)意義，已廣泛應(yīng)用于抗性研究中。 隨后，電解質(zhì)滲出曲線上升，在72h后，12℃、18℃處理下達(dá)到了最大值，%、%，上升幅度變化較大。驟然降溫下葉片葉綠素含量的變化見圖42圖42 驟然降溫下大葉冬青葉片葉綠素含量的變化Fig42 Effect of rapid cooling chill stress on chlorophyll content of broadleaf holly leaves由圖42可見，驟然降溫下大葉冬青葉片葉綠素含量的變化基本呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，但6℃、0℃處理下葉綠素含量變化不明顯，表明葉綠素含量對(duì)驟然降溫不敏感。4結(jié)果與分析葉綠素總含量?？勺鳛橐环N反映逆境脅迫對(duì)植物造成傷害程度的生理指標(biāo)，用以說明環(huán)境條件的變化對(duì)植物產(chǎn)生的影響。儀器與用具：剪刀；離心機(jī)。試劑：PH ；愈創(chuàng)木酚（%）；%的H2O2 方法步驟：在試管中加PH （）2 ml，愈創(chuàng)木酚（%），%的H2O2 ，空白以緩沖液代替。吸取樣品液的體積提取液量稀釋倍數(shù)樣品干重106可溶性糖含量＝100％從回歸方程求得糖含量